【年會(huì)報(bào)告】-xxxx生物教育年會(huì)報(bào)告基因工程與細(xì)胞工程-wenkub.com
2025-02-03 17:04 本頁面
【正文】 此外，對(duì)用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經(jīng)抗 T細(xì)胞單抗加補(bǔ)體處理，能減輕移植物抗宿主病的發(fā)生。 治療用脂質(zhì)體 n 單克隆抗體以其特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射免疫分析、免疫組化和流式細(xì)胞儀等技術(shù)，目前，應(yīng)用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于： ① 病原微生物抗原、抗體的檢測(cè)； ② 腫瘤抗原的檢測(cè)； ③ 免疫細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)； ④ 激素測(cè)定； ⑤ 細(xì)胞因子的測(cè)定。如用抗人絨毛膜促性腺激素 (hCG)親合層析柱，就可從孕婦尿中提取到純的 hCG。目前，常用的方法有硫酸銨沉淀法、鹽析法、離子交換、凝膠過濾或親和層析等等。 n 一般情況下，雜交瘤細(xì)胞的染色體處于不穩(wěn)定狀態(tài)，因此當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí)，染色體分配不平衡，易造成雜交瘤細(xì)胞在分裂增殖過程中失去抗體分泌能力，所以克隆化培養(yǎng) 3～ 5次后，才能獲得穩(wěn)定基因型和穩(wěn)定分泌特異性抗體的細(xì)胞。HAT選擇培養(yǎng)基n 含次黃嘌呤（ H）、氨基蝶呤（ A）和胸腺嘧啶核苷（ T）的培養(yǎng)基，是動(dòng)物雜交細(xì)胞篩選中最常用的方法。n 一般將各種病毒、細(xì)菌和癌細(xì)胞作為目的抗原接種動(dòng)物制作抗原，其方法是將目的抗原進(jìn)行腹腔或皮下注射，一般要進(jìn)行初次免疫、二次免疫和加強(qiáng)免疫。這些由不同 B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體稱為多克隆抗體（ polycolonal antibody, PcAb）?？乖瓫Q定簇n 抗原分子中存在的能與抗體 Fab片段特異性結(jié)合的特殊化學(xué)基團(tuán)，是免疫應(yīng)答特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的，位于兩臂末端，稱抗原結(jié)合片段 (antigenbinding fragment, Fab)。抗體的結(jié)構(gòu)圖“Y”型，四肽鏈重鏈 （ 5種 : ?、 ?、 ?、 ?、 ?） 輕鏈 （ 2種 : ?? 、 ?? ）可變區(qū) （ V區(qū)） 超變區(qū) 骨架區(qū)恒定區(qū) （ C區(qū)）鉸鏈區(qū)抗體結(jié)構(gòu)n 在給定的物種中，不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列。u基于酶缺陷型細(xì)胞和藥物抗性所建立的雜種篩選u基于營養(yǎng)缺陷型細(xì)胞所建立的雜種篩選u由溫度敏感型細(xì)胞組成的雜種細(xì)胞的篩選u具有所需性狀雜種細(xì)胞的篩選常用的雜種細(xì)胞篩選方法 雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體抗體 由抗原刺激 B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，并能與刺激其產(chǎn)生的抗原發(fā)生特異性結(jié)合的、具有免疫功能的糖蛋白。電融合法的優(yōu)點(diǎn)：u融合率高，重復(fù)性強(qiáng)，對(duì)細(xì)胞傷害??；u裝置精巧，方法簡單，可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程；u免去 PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程，誘導(dǎo)過程可控性強(qiáng)。n PEG分子具有輕微的負(fù)極性，故可以與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成 H鍵，從而在在質(zhì)膜之間形成分子橋，其結(jié)果是使細(xì)胞質(zhì)膜發(fā)生粘連進(jìn)而促使質(zhì)膜的融合 .PEG誘導(dǎo)融合的特點(diǎn) ： 其優(yōu)點(diǎn)是融合成本低，不需特殊設(shè)備；融合子異核率較高；融合過程不受物種限制。n 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，從而可得知被檢細(xì)胞內(nèi)目的蛋白表達(dá)與否、表達(dá)量及分子量等情況。 Southern雜交和 Northern雜交過程示意圖 Western雜交（檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)）n 中文一般稱為蛋白質(zhì)印跡技術(shù)。一種實(shí)驗(yàn)方法。 n (3) 預(yù)雜交濾膜，掩蓋濾膜上非特異性位點(diǎn)。n 根據(jù)其檢測(cè)對(duì)象的不同可分為 Southern 雜交 （DNA）、 Northern 雜交 （ RNA）和 Western 雜交 （蛋白質(zhì)） ?；瘜W(xué)合成法通常主要用于制備探針
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