【年會報告】-xxxx生物教育年會報告基因工程與細胞工程(編輯修改稿)
2025-02-23 17:04 本頁面
【文章內容簡介】 印跡技術。其基本原理是通過 特異性抗體 對凝膠電泳分離的細胞或生物組織 蛋白樣品 進行檢測。n Western Blot與 Southern雜交或 Northern雜交方法類似，但 Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質， “探針 ”是抗體， “顯色 ”用標記的二抗。 Western雜交過程n ⑴ 經過 SDSPAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素膜）上；n ⑵ 以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應；n ⑶ 再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的目的蛋白。n 根據檢測結果，從而可得知被檢細胞內目的蛋白表達與否、表達量及分子量等情況。 Western雜交結果圖常見載體容量載體 質粒 λ噬菌體黏粒 細菌人工染色體（BAC）酵母人工染色體（YAC）容量（ kb)10 23 45 350 1000（二）細胞工程動物細胞融合與單克隆抗體細胞融合（ cell fusion)， 又稱體細胞雜交，是指兩個或更多個相同或不同細胞通過膜融合，形成單個細胞的過程。細胞融合的常用方法一、滅活病毒法：二、聚乙二醇（ PEG）法：三、電融合法：一、滅活病毒法1. 兩個原生質體或細胞在病毒黏結作用下彼此靠近；2. 通過病毒與細胞膜的作用使兩個細胞膜互相滲透，胞質互相滲透；3. 兩個細胞的細胞核互相融合，兩個細胞融為一體；4. 進入正常的細胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細胞。二、聚乙二醇（ PEG）法n PEG分子式： HOH2C（ CH20CH2） nCH2OH，通常選用平均相對分子質量為 1000～ 4000、濃度在 30%～ 50%的PEG進行動物細胞的誘導融合。n PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成 H鍵，從而在在質膜之間形成分子橋，其結果是使細胞質膜發(fā)生粘連進而促使質膜的融合 .PEG誘導融合的特點 ： 其優(yōu)點是融合成本低，不需特殊設備；融合子異核率較高；融合過程不受物種限制。其缺點是操作過程繁瑣， PEG可能對細胞有毒害。 三、電融合法 細胞首先在交流電場中極化并沿電力線排列成串，形成細胞間的緊密接觸；然后在高強度的直流電脈沖作用下，相互連接的細胞質膜被擊穿而導致細胞融合。電融合法的優(yōu)點：u融合率高，重復性強，對細胞傷害?。籾裝置精巧，方法簡單，可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程；u免去 PEG誘導后的洗滌過程，誘導過程可控性強。融合細胞的篩選 n 細胞融合后，會形成由未融合的親本細胞、同核體以及異核體組成的細胞混合群體?？筛鶕煌毎砩匦缘牟町?，設計具體的篩選方案和選擇體系，優(yōu)先選擇雜交細胞或只允許雜交細胞生長，以淘汰親本細胞。最常用方法是應用合適的選擇培養(yǎng)基，使親本細胞死亡，而僅讓雜交細胞存活下來。u基于酶缺陷型細胞和藥物抗性所建立的雜種篩選u基于營養(yǎng)缺陷型細胞所建立的雜種篩選u由溫度敏感型細胞組成的雜種細胞的篩選u具有所需性狀雜種細胞的篩選常用的雜種細胞篩選方法 雜交瘤技術與單克隆抗體抗體 由抗原刺激 B淋巴細胞產生的，并能與刺激其產生的抗原發(fā)生特異性結合的、具有免疫功能的糖蛋白?？贵w結構 n 抗體是具有 4條多肽鏈的對稱結構，其中 2條較長、相對分子量較大的相同的重鏈 (H鏈 )；2條較短、相對分子量較小的相同的輕鏈 (L鏈 )。鏈間由二硫鍵和非共價鍵
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