【年會報告】-xxxx生物教育年會報告基因工程與細胞工程-閱讀頁
2025-02-15 17:04本頁面
【正文】 高變區(qū)。一個抗體分子上的兩個抗原結合部位是相同的，位于兩臂末端，稱抗原結合片段 (antigenbinding fragment, Fab)。 V編碼可變區(qū)，有 300個種類； D編碼高變區(qū) ,有 15 ～ 20個種類； J編碼連接 V、 C的結合區(qū)，有 4～ 5個種類； C編碼恒定區(qū)，僅有一種。抗原決定簇n 抗原分子中存在的能與抗體 Fab片段特異性結合的特殊化學基團，是免疫應答特異性的物質(zhì)基礎。每種單克隆抗體其分子結構完全相同。這些由不同 B細胞克隆產(chǎn)生的抗體稱為多克隆抗體（ polycolonal antibody, PcAb）。因此，單克隆抗體技術又稱為雜交瘤技術。n 一般將各種病毒、細菌和癌細胞作為目的抗原接種動物制作抗原，其方法是將目的抗原進行腹腔或皮下注射，一般要進行初次免疫、二次免疫和加強免疫。骨髓瘤細胞選擇n 骨髓瘤細胞本身不能分泌抗體n 選擇次黃嘌呤 鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺陷型（ HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（ TK）瘤細胞細胞內(nèi) DNA的合成途徑n 從頭合成途徑： 以氨基酸和其他小分子起始合成核苷酸，進而合成 DNA 的過程；可被葉酸類似物 氨基蝶呤（ A） 阻斷；n 旁路合成途徑 ：胸腺嘧啶脫氧核苷激酶（TK）利用胸腺嘧啶核苷（ T）合成 DNA；次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（ HGPRT）利用次黃嘌呤（ H）合成 DNA。HAT選擇培養(yǎng)基n 含次黃嘌呤（ H）、氨基蝶呤（ A）和胸腺嘧啶核苷（ T）的培養(yǎng)基，是動物雜交細胞篩選中最常用的方法。在 HAT選擇培養(yǎng)基中骨髓瘤瘤細胞（ HGPRT或 TK）及其同核體： 不能增殖， → 死亡；B淋巴細胞及其同核體： 體外培養(yǎng)條件下增殖次數(shù)有限， → 死亡；雜交瘤細胞： → 存活陽性細胞的篩選n 將融合細胞充分稀釋，進行克隆培養(yǎng)；然后再通過酶聯(lián)免疫吸附測定 ( ELISA) ，篩選出能夠分泌較高水平抗體的融合細胞，即陽性細胞，再進行克隆化培養(yǎng)。 n 一般情況下，雜交瘤細胞的染色體處于不穩(wěn)定狀態(tài)，因此當細胞分裂時，染色體分配不平衡，易造成雜交瘤細胞在分裂增殖過程中失去抗體分泌能力，所以克隆化培養(yǎng) 3～ 5次后，才能獲得穩(wěn)定基因型和穩(wěn)定分泌特異性抗體的細胞。 n 細胞培養(yǎng)：體外克隆培養(yǎng)，再從培養(yǎng)液中回收產(chǎn)生的抗體。目前，常用的方法有硫酸銨沉淀法、鹽析法、離子交換、凝膠過濾或親和層析等等。單克隆抗體的應用n 1. 作為親合層析的配體n 單克隆抗體能與其相應的抗原特異性結合，因而能夠從復雜系統(tǒng)中識別出單個成分。如用抗人絨毛膜促性腺激素 (hCG)親合層析柱，就可從孕婦尿中提取到純的 hCG。2. 作為生物治療的導向武器n 將針對某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療藥物或放療物質(zhì)連接，利用單克隆抗體的導向作用，將化療藥物或放療物質(zhì)攜帶至靶器官，可直接殺傷靶細胞。 治療用脂質(zhì)體 n 單克隆抗體以其特異性強、純度高、均一性好等優(yōu)點，廣泛應用于酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫分析、免疫組化和流式細胞儀等技術，目前，應用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應用于： ① 病原微生物抗原、抗體的檢測； ② 腫瘤抗原的檢測； ③ 免疫細胞及其亞群的檢測； ④ 激素測定； ⑤ 細胞因子的測定。5. 作為免疫抑制劑n 抗人 T淋巴細胞單抗 (McAb)作為一種新型免疫抑制劑，已廣泛應用于臨床治療自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反應。此外，對用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經(jīng)抗 T細胞單抗加補體處理，能減輕移植物抗宿主病的
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1