基因工程載體xxxx-閱讀頁(yè)
2025-01-17 18:08本頁(yè)面
【正文】 因中，基因滅活，不能合成藍(lán)色化合物；而空載體 λDNA則產(chǎn)生藍(lán)色透明斑。 大腸桿菌的某些菌株含有特異性的校正基因，其編碼產(chǎn)物校正 tRNA能專(zhuān)一性地糾正這一突變。當(dāng)這種 λDNA進(jìn)入一般的大腸桿菌菌株后，不能合成有活性的頭部蛋白，也就不能被包裝和裂解細(xì)菌，這樣就可以阻止有害重組體的生物污染及擴(kuò)散，而基因工程實(shí)驗(yàn)中使用的受體則是具有琥珀型突變體校正功能的菌株。以 感染 方式導(dǎo)入細(xì)胞的頻率可達(dá)106~108/μgDNA，而以 轉(zhuǎn)染 （ translation）的方式導(dǎo)入的頻率僅為103~105/ μgDNA。這些包裝蛋白通常分為相互互補(bǔ)的兩部分：一部分缺少 E組份，另一部分則缺少 D組份。 λDNA及其重組分子的分離純化 將大腸桿菌在含有麥芽糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 加入 λ噬菌體或重組 λ噬菌體的懸浮液， 37℃ 培養(yǎng)1小時(shí) 用新鮮培養(yǎng)基稀釋?zhuān)^續(xù)培養(yǎng) 4 12小時(shí)。 Charon Charon λgt11 置換型載體 (replacement vector,又稱(chēng)取代型載體 ):允許外源 DNA片段替換非必需 DNA片段的載體。 實(shí)際上是一種“穿梭”克隆載體，含有質(zhì)?？寺≥d體所必備的第一受體 (大腸桿菌 )源質(zhì)粒復(fù)制起始位點(diǎn) (ori)，還含有第二受體 (如酵母菌 )染色體DNA著絲點(diǎn)、端粒和復(fù)制起始位點(diǎn)的序列，以及合適的選擇標(biāo)記基因。這種克隆載體在體外與目的DNA片段重組后，轉(zhuǎn)化第二受體細(xì)胞，可在轉(zhuǎn)化的細(xì)胞內(nèi)按染色體 DNA復(fù)制的形式進(jìn)行復(fù)制和傳遞。與其他的克隆載體相比，人工染色體克隆載體的特點(diǎn)是能容納長(zhǎng)達(dá) 1000kb甚至 3000kb的外源 DNA片段。 原核表達(dá)載體 1. 原核表達(dá)載體所需的主要元件 (1) 啟動(dòng)子； (2) SD順序 。 (1)、融合表達(dá)載體 融合基因 (fusion gene):是指應(yīng)用 DNA體外重組技術(shù) ,構(gòu)建的一類(lèi)含兩個(gè)或兩個(gè)以上的不同基因序列的雜合基因。 開(kāi)放閱讀框 (open reading frame， ORF)： 起始于 AUG、止于 UAA、 UGA、 UAG的連續(xù)的密碼子區(qū)域，是潛在的編碼區(qū)。 具備的 3個(gè)要素： 一是有一段信號(hào)肽，二是在成熟蛋白質(zhì)內(nèi)有適當(dāng)?shù)呐c分泌相關(guān)的氨基酸序列，三是細(xì)胞內(nèi)有相應(yīng)的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。 大腸桿菌 釀酒酵母穿梭質(zhì)粒載體，含有兩種分別來(lái)自大腸桿菌和釀酒酵母的復(fù)制起點(diǎn)與選擇標(biāo)記，可單獨(dú)或同時(shí)在兩種寄主細(xì)胞中研究目的基因的表達(dá)活性及其它調(diào)節(jié)功能。 克隆載體 DNA分子具備的條件。 抗生素選擇標(biāo)記基因的作用方式及其機(jī)理。 λ DNA載體的構(gòu)建、類(lèi)型及其優(yōu)點(diǎn)。 靜夜四無(wú)鄰，荒居舊業(yè)貧。 11:53:1011:53:1011:531/23/2023 11:53:10 AM 1以我獨(dú)沈久，愧君相見(jiàn)頻。 11:53:1011:53:1011:53Monday, January 23, 2023 1乍見(jiàn)翻疑夢(mèng)，相悲各問(wèn)年。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時(shí) 53分 10秒 11:53: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 2023年 1月 上午 11時(shí) 53分 :53January 23, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 上午 11時(shí) 53分 10秒 上午 11時(shí) 53分 11:53: 沒(méi)有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 11:53:1011:53:1011:531/23/2023 11:53:10 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 11:53:1011:53:1011:53Monday, January 23, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時(shí) 53分 10秒 11:53: 1楚塞三湘接，荊門(mén)九派通。 2023年 1月 上午 11時(shí) 53分 :53January 23, 2023 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 上午 11時(shí) 53分 10秒 上午 11時(shí) 53分 11:53: 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 11:53:1011:53:1011:531/23/2023 11:53:10 AM 1越是沒(méi)有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 11:53:1011:53:1011:53Monday, January 23, 2023 1知人者智，自知者明。 :53:1011:53:10January 23, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 上午 11時(shí) 53分 :53January 23, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 上午 11時(shí) 53分 10秒 上午 11時(shí) 53分 11:53: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blandit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis ut cursus. 感 謝 您 的 下 載 觀 看 專(zhuān)家告訴
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1