【正文】 將 RNA分子從電泳凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜或其他化學(xué)修飾的活性濾紙上，進行核酸雜交的一種實驗方法。 ?顯微鏡下細(xì)胞融合過程 細(xì)胞融合的常用方法 一、滅活病毒法 ①兩種細(xì)胞在一起培養(yǎng)，加入滅活病毒，在 4℃ 條件下病毒附著在細(xì)胞膜上。在這種培養(yǎng)基中細(xì)胞只能利用旁路途徑合成 DNA，因而只有具有HGPRT+或 /和 TK+的細(xì)胞才能生長 。此外，對用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經(jīng)抗 T細(xì)胞單抗加補體處理，能減輕移植物抗宿主病的發(fā)生。 單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)特定抗原免疫刺激的 B淋巴細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無限增殖，又具有 B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。這對于種質(zhì)資源的開發(fā)和利用具有深遠(yuǎn)的意義。 ? (2) 將 DNA片段轉(zhuǎn)移到固體支持物 (硝酸纖維素濾膜或尼龍膜 )上。 對應(yīng)的菌斑或噬菌斑位置不變，可以直接找出陽性菌落。2022年暑假中學(xué)骨干教師培訓(xùn) 基因工程 和 細(xì)胞工程 生物材料 DNA mRNA 一定大小范圍 DNA PCR cDNA（互補 DNA） 反轉(zhuǎn)錄 基因組文庫 cDNA文庫 基因文庫 包括 人工合成 限制酶切割 獲取目的基因 構(gòu)建表達載體 導(dǎo)入受體細(xì)胞 得到轉(zhuǎn)基因生物 目的基因檢測與鑒定 第一步 第二步 第三步 第四步 基因工程的基本操作程序 獲取目的基因 生物材料 PCR cDNA mRNA DNA 基因組文庫 cDNA文庫 一定大小范圍 DNA 人工合成 逆轉(zhuǎn)錄 限制酶切割 獲取目的基因 構(gòu)建表達載體 導(dǎo)入受體細(xì)胞 得到轉(zhuǎn)基因生物 目的基因檢測與鑒定 第一步 第二步 第三步 第四步 基因文庫 (gene library)概念 ?又稱 DNA文庫，是指某個生物的 基因組 DNA或 cDNA片段 與 適當(dāng)?shù)妮d體 在體外重組后，轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞 ，通過篩選后得到大量的陽性菌落 (或噬菌體 )，所有菌落或噬菌體的集合即為該生物的基因文庫。 特點： PCR篩選法 利用合適的引物 ， 以從初選出來的陽性克隆中提出的質(zhì)粒為模板進行 PCR， 通過對PCR產(chǎn)物的電泳分析 ， 確定目的基因序列所在克隆 。 ? (3) 預(yù)雜交濾膜 ,掩蓋濾膜上非特異性位點。 ?繞開了種間生殖隔離的限制，為遠(yuǎn)緣物種間的遺傳物質(zhì)交換提供了有效途徑。因此，單克隆抗體技術(shù)又稱為雜交瘤技術(shù)。 。 HAT選擇培養(yǎng)基 ? 含次黃嘌呤（ H）、氨基蝶呤（ A）和胸腺嘧啶核苷（ T）的培養(yǎng)基，是動物雜交細(xì)胞篩選中最常用的方法。 ?淋巴細(xì)胞雜交瘤和單克隆抗體的制備。 ? (5) 通過顯影檢查目的 DNA所在的位置。因此，要想從龐大的基因組中分離某個特定的 未知基因 非常困難，因此 先把材料 DNA分成若干易于處理的片段，然后確定目標(biāo)序列在哪一片段，再進一步從該片段尋找目標(biāo)序列，事情就變得容易了。 mRNA 結(jié)構(gòu)圖 DNA 結(jié)構(gòu)圖 基因組文庫 (Genomic library) ? 將某種生物體的全部基因組