生化3第三章核酸化學(xué)-資料下載頁(yè)
2025-01-16 10:36本頁(yè)面
【正文】 節(jié) 核酸研究的常用技術(shù) 一 .DNA的凝膠電泳 （一）瓊脂糖凝膠電泳 (分離 ,測(cè)量 ,回收 ,印跡 ) （二） PAGE電泳 1. PAGE濃度及選擇 2. PAGE電泳的分辨率 （三）影響凝膠電泳 Rf值的因素 二 .印跡技術(shù)與分子雜交 （一） .印跡技術(shù) 概念 :核酸的雜交中，經(jīng)過(guò)凝膠電泳分離的 DNA/RNA分子，雜交之前通過(guò)毛細(xì)管吸附作用 /電導(dǎo)作用將凝膠中 DNA/RNA分子原封不動(dòng)地轉(zhuǎn)移到濾膜上。 濾膜 :硝酸纖維素濾膜， DEAE纖維素濾膜 印跡種類 : Southern blotting:（ 1975） Northern blotting:（ 1979， Alwine) （ 1979， Towbin,ImmunoblottingWestern。1982, Reihart,Eastern) 電轉(zhuǎn)移技術(shù) :(1983,Aubertin) （二） .核酸雜交 核酸雜交的概念 :DNA單鏈與在某些區(qū)域有互補(bǔ)序列的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過(guò)程。這樣形成的新分子稱為雜交 DNA分子 。 核酸雜交方法： Southern blotting雜交技術(shù) : Northern blotting雜交技術(shù) : 點(diǎn)雜交技術(shù) : 菌落 /噬菌體的原位雜交技術(shù) : （三） .雜交檢測(cè)方法 — 放射自顯影 點(diǎn)雜交 三 .PCR技術(shù) DNA Polymerase Chain Reaction （一）基本步驟 引物 1pmol/ul,dNTP200umol/l, Taq酶 2u/100ul 94 ?c 510min 褪火 45s60s 保 溫 72 ?c1min （二） PCR技術(shù)的應(yīng)用 1. 遺傳病，疑難病的診斷及產(chǎn)前檢查 2 .病原體的檢測(cè) 3 .癌基因的檢查 4 .基因組測(cè)序 5 .基因探針的制備 6 .基因突變的分析及定位誘變 7 .cDNA庫(kù)的構(gòu)建 ,DNA重組 ,基因分離與克隆 8. 法醫(yī)及刑事鑒定 （三） PCR技術(shù)的特點(diǎn) 1 .引物設(shè)計(jì) :(引物的長(zhǎng)度一般為 18～ 25bp) 擴(kuò)増長(zhǎng)度一般在 200～ 800bp之間 2 .擴(kuò)増效率 : 2n,DNA量增加 106～ 109倍 3 .擴(kuò)増溫度 : G＋ C含量和 Tm值 ,一般在 40－ 60%之間， 兩條相差 2－ 3 ℃, 72 ℃. :3’端不得有任何修飾 第七節(jié)人類基因組計(jì)劃簡(jiǎn)介 一 .人類基因組計(jì)劃概況 概況 : 1986年，由 (Science)人類基因組計(jì)劃(human genome projectHGP)。 1990年 10月，美國(guó)政府決定出資 30億美元，用 15年時(shí)（ 19912022）完成 HGP。 HGP與曼哈頓原子彈計(jì)劃和啊波羅登月計(jì)劃一起被稱為二 十世紀(jì)三大科學(xué)工程 . 美國(guó) ,英國(guó) ,日本 ,德國(guó) ,法國(guó) ,中國(guó) .我國(guó)是 1999年加入 ,承擔(dān) 1%的測(cè)序任務(wù) .{我國(guó)成立三個(gè)人類基因組中心 — 北京遺傳所，上海（南方），北京（北方）。承擔(dān) 3號(hào)染色體短臂D3S3610至端粒 30M b區(qū)域 3000萬(wàn) bp} HGP的研究?jī)?nèi)容 : 。 。 。 。 HGP的目標(biāo)： 基因的表達(dá)調(diào)節(jié)，癌癥發(fā)生的機(jī)制及治療，人類疾病的防治， 醫(yī)療，制藥，人口素質(zhì)，環(huán)境等。 二 .HGP取得的成就 ：人類基因組計(jì)劃的任務(wù)已完成，與蛋白質(zhì)有關(guān)的基因只占 2%，含 2萬(wàn) 。 ：改進(jìn)和創(chuàng)新了 DNA序列測(cè)定的方法，降低了測(cè)定成本?，F(xiàn)使用毛細(xì)管陳列電泳技術(shù)，每個(gè)堿基少于 。 ：現(xiàn)已測(cè)定了上百中模式生物的 DNA全序列，如酵母、線蟲、擬南芥、黑猩猩、 、血吸蟲、楊樹，正在進(jìn)行的小鼠、果蠅等。人的第 22號(hào)染色體已完全破譯。 三 .HGP面臨的挑戰(zhàn)
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