生化3第三章核酸化學(xué)(參考版)
2025-01-19 10:36本頁(yè)面
【正文】 人的第 22號(hào)染色體已完全破譯?，F(xiàn)使用毛細(xì)管陳列電泳技術(shù)，每個(gè)堿基少于 。 二 .HGP取得的成就 ：人類(lèi)基因組計(jì)劃的任務(wù)已完成，與蛋白質(zhì)有關(guān)的基因只占 2%，含 2萬(wàn) 。 。 。 HGP與曼哈頓原子彈計(jì)劃和啊波羅登月計(jì)劃一起被稱(chēng)為二 十世紀(jì)三大科學(xué)工程 . 美國(guó) ,英國(guó) ,日本 ,德國(guó) ,法國(guó) ,中國(guó) .我國(guó)是 1999年加入 ,承擔(dān) 1%的測(cè)序任務(wù) .{我國(guó)成立三個(gè)人類(lèi)基因組中心 — 北京遺傳所，上海（南方），北京（北方）。 核酸雜交方法： Southern blotting雜交技術(shù) : Northern blotting雜交技術(shù) : 點(diǎn)雜交技術(shù) : 菌落 /噬菌體的原位雜交技術(shù) : （三） .雜交檢測(cè)方法 — 放射自顯影 點(diǎn)雜交 三 .PCR技術(shù) DNA Polymerase Chain Reaction （一）基本步驟 引物 1pmol/ul,dNTP200umol/l, Taq酶 2u/100ul 94 ?c 510min 褪火 45s60s 保 溫 72 ?c1min （二） PCR技術(shù)的應(yīng)用 1. 遺傳病，疑難病的診斷及產(chǎn)前檢查 2 .病原體的檢測(cè) 3 .癌基因的檢查 4 .基因組測(cè)序 5 .基因探針的制備 6 .基因突變的分析及定位誘變 7 .cDNA庫(kù)的構(gòu)建 ,DNA重組 ,基因分離與克隆 8. 法醫(yī)及刑事鑒定 （三） PCR技術(shù)的特點(diǎn) 1 .引物設(shè)計(jì) :(引物的長(zhǎng)度一般為 18～ 25bp) 擴(kuò)増長(zhǎng)度一般在 200～ 800bp之間 2 .擴(kuò)増效率 : 2n,DNA量增加 106～ 109倍 3 .擴(kuò)増溫度 : G＋ C含量和 Tm值 ,一般在 40－ 60%之間， 兩條相差 2－ 3 ℃, 72 ℃. :3’端不得有任何修飾 第七節(jié)人類(lèi)基因組計(jì)劃簡(jiǎn)介 一 .人類(lèi)基因組計(jì)劃概況 概況 : 1986年，由 (Science)人類(lèi)基因組計(jì)劃(human genome projectHGP)。1982, Reihart,Eastern) 電轉(zhuǎn)移技術(shù) :(1983,Aubertin) （二） .核酸雜交 核酸雜交的概念 :DNA單鏈與在某些區(qū)域有互補(bǔ)序列的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過(guò)程。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ 復(fù)性影響因素 片段濃度 /片段大小 /片段復(fù)雜性（重復(fù)序列數(shù)目） / 純度 /溶液離子強(qiáng)度 第五節(jié) 核酸及其組分的分離純化與測(cè)定 一 .分離純化的一般原則 二 .DNA的分離純化 三 .RNA的分離純化 四 .核酸組分的分離純化 破細(xì)胞（ 1mol/LNACL） 離心去沉淀（含 RNAPr） 上清（含 DNAPr） SDS法 /酚法（去蛋白） 離心去沉淀（變性蛋白） 上清（含 DNA） 乙醇沉淀 離心收集沉淀（ DNA） 細(xì)胞（飽和酚處理） 離心去沉淀（含 DNAPr） 上清液調(diào)節(jié) PI（ RNA PI） 離心去上清 收集沉淀（總 RNA） 不同的 RNA分離時(shí)可用： DEAESephadex 超離心 Oligdt 親和層析 ： 四種核苷酸之間的分離采用離子交換法 陽(yáng)離子交換劑洗脫次序： 理論次序 U G A C 實(shí)際次序 U G C A 陰 離子交換劑洗脫次序： 理論次序 C A G U 實(shí)際次序 C
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