chapter3核酸化學(參考版)
2025-01-09 14:21本頁面
【正文】 * 引物設計的主要原則是最大限度地提高擴增效率和特異性。 ? 核酸的雜交在分子生物學和遺傳學的研究中具有重要意義。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ ? 復性影響因素 片段濃度 /片段大小 /片段復雜性（重復序列數(shù)目） / 溶液離子強度 ? DNA單鏈與在某些區(qū)域有互補序列的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結(jié)構的過程。 ? 將熱變性的 DNA驟然冷卻至低溫時， DNA不可能復性。因而測定 Tm值，可反映 DNA分子中 G, C含量，可通過經(jīng)驗公式計算：（ G+C)%=() 2. 熱變性和 Tm 3. 核酸的復性 ? 變性核酸的互補鏈在適當?shù)臈l件下，重新締合成為雙螺旋結(jié)構的過程稱為 復性 。 DNA的 Tm值與分子中的 G和 C的含量 有關，也與 DNA的均一性和介質(zhì)中離子強度有關。因此， 通常將加熱變性使 DNA的雙螺旋結(jié)構失去一半時的溫度稱熔解溫度或熔點，用 Tm表示 。核酸的一級結(jié)構 (堿基順序 )保持不變。 P484 五、 snRNA （ small nucleic RNA 核小 RNA） scRNA （ small cytoplasmic RNA） asRNA （ antisense RNA） 第五節(jié) 核酸的性質(zhì) 一、一般的理化性質(zhì) ? 兩性解離 / 一般呈酸性（在中性溶液中帶負電荷），可 溶于水，不溶于有機溶劑 ?線性大分子（粘度高、抗剪切力差） ?可用電泳或離子交換（色譜）進行分離 ?室溫條件下， DNA在堿液中變性，但不水解， RNA水解 ?加熱條件下， D－核糖＋濃鹽酸＋苔黑酚 綠色 D－ 2－脫氧核糖＋酸＋二苯胺 藍紫色 二、核酸的紫外吸收特性 ? 在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有 共軛雙鍵 體系，因而具有獨特的紫外線吸收光譜，一般在 260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組份定性和定量測定的依據(jù)。 ?3‘ 末端都具有 CpCpAOH的結(jié)構。 T= A : A , C≡G ： C+ T = A : T C≡G ： G DNA的存在形式 二、 DNA的三級結(jié)構 ? DNA三級結(jié)構：指 DNA雙螺旋的進一步扭曲與折疊形成的特定構象，包括 三方面內(nèi)容 （ P490） 原核 雙鏈環(huán)狀 DNA（ dcDNA） 病毒 單鏈環(huán)狀 DNA（ scDNA） 單鏈線性 DNA（ ssDNA） 負超螺旋 幾個參數(shù)： 連環(huán)數(shù)：指雙鏈的互繞數(shù)， L（ linking number） 扭轉(zhuǎn)數(shù)：指螺旋圈數(shù)， T（ twisting number） 超螺旋數(shù)：即纏繞數(shù)， W（ writhing number） L = T + W 拓撲異構酶 ： I（ L0＋ 1）、 II（ L02 ） 真核 雙鏈線性 DNA（ dsDNA）： P495 核小體 纖絲 突環(huán) 玫瑰花環(huán) 螺旋圈 染色體 第四節(jié) RNA的結(jié)構與功能 一、結(jié)構特點 1. 堿基組成 A、 G、 C、 U （ A＝ U/G≡C） 稀有堿基較多，穩(wěn)定性較差，易水解 2. 多為單鏈結(jié)構，少數(shù)局部形成螺旋 3. 分子較小 4. 分類 ? mRNA（ hnRNA 核不均一 RNA） ? tRNA ? rRNA （ snRNA/a
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