生物化學(xué)核酸化學(xué)ppt課件(參考版)
2025-05-04 13:29本頁面
【正文】 ?反義 RNA技術(shù)目前在植物基因工程和人類疾病治療方面具有廣泛的應(yīng)用。 ?小 RNA和微小 RNA技術(shù)主要應(yīng)用于癌癥的預(yù)防、診斷和治療方面。 ?小 RNA： 1998年發(fā)現(xiàn)一些小 RNA具有調(diào)控DNA分子的功能，這種機(jī)制叫做 RNA干擾（ RNAi） 。 ?Northern印跡法 （ Northern bloting： DNARNA）。 DNA和 DNA雜交以及 DNA和RNA雜交在核酸技術(shù)中占有十分重要的地位。 ?蛋白質(zhì)組學(xué)和結(jié)構(gòu)基因組學(xué) ：闡釋基因組中全部基因及其編碼蛋白質(zhì)的功能以及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。 一、人類基因組計(jì)劃 ?破譯基因組的全部遺傳信 。 ?2022年 10月 11日，我國科學(xué)家成功繪制出大熊貓晶晶的基因組序列。 一、人類基因組計(jì)劃 ?美國： WASH＆ MIT等研究中心，貢獻(xiàn)率為 54％； ?英國： SANGER等研究中心，貢獻(xiàn)率為 33％； ?日本： RIKEN等研究中心，貢獻(xiàn)率為 7％； ?法國： GENOSCOPE研究中心，貢獻(xiàn)率為 ％； ?德國： IMB等研究中心，貢獻(xiàn)率為 ％； ?中國：華大基因等，貢獻(xiàn)率為 1％； 一、人類基因組計(jì)劃 ? 2022,12,18日，水稻基因組由中國領(lǐng)銜完成。美國的人類基因組計(jì)劃總體規(guī)劃是：擬在 15年內(nèi)至少投入 30億美元，進(jìn)行對人類全基因組的分析。 四、核酸測序的研究方法 Sanger雙脫氧鏈終止法 四、核酸測序的研究方法 Gilbert化學(xué)斷裂法 四、核酸測序的研究方法 DNA片段一端用放射性標(biāo)記，用堿基特異性的化學(xué)反應(yīng)裂解 DNA，通過標(biāo)定末端與斷裂位點(diǎn)之間的距離來確定堿基的位置。 紫外法 1977年兩位學(xué)者分別提出了 化學(xué)斷裂法 和雙脫氧鏈終止法 。 如果 OD260/230≥，否則樣品中含有雜多糖。 三、核酸的分析 純 DNA的 OD260/280≥。 溫度 0C 70 80 100 90 A 260 大腸桿菌 DNA在不同 KCl濃度下的 Tm 5．熔解溫度 6．摩爾磷吸光系數(shù) 二、核酸的分離 核酸的分離原則： ?盡量簡化操作 ， 縮短提取過程； ?減少化學(xué)物質(zhì)對核酸的降解； ?減少核酸的生物降解； ?減少物理因素對核酸的降解 。因?yàn)?GC比 AT更穩(wěn)定（氫鍵）。 變性的相對量 溫度 0C 60 80 100 0 Tm Tm Tm 100% Poly d(AT) Poly d(GC) DNA 5．熔解溫度 Tm值的大小與下列因素有關(guān)： （ 1） DNA的均一性 （ 2） GC含量 （ 3）介質(zhì)中的離子強(qiáng)度 5．熔解溫度 （ 1） DNA的均一性： 一般均一性越高， Tm值的變動(dòng)范圍越小。 ⑤選擇最佳的復(fù)性溫度，溫度太高會使核酸發(fā)生變性，而溫度過低會使錯(cuò)配的兩鏈無法分開。 ③核酸鏈內(nèi)重復(fù)序列多，易形成互補(bǔ)配對，復(fù)性速度較快。 高溫變性 緩慢冷卻 熱復(fù)性 急速冷卻 復(fù)性失敗 4．變性與復(fù)性 （ 復(fù)性） 4．變性與復(fù)性 （ 復(fù)性） 影響核酸復(fù)性速度的因素很多： ①核酸濃度越高，隨機(jī)碰撞的頻率越高，復(fù)性速度越快。 高溫變性 緩慢冷卻 熱復(fù)性 退火 4．變性與復(fù)性 （復(fù)性） DNA復(fù)性后，許多物化性質(zhì)又得到恢復(fù)，生物活性可以得到部分恢復(fù)。 ?變性因素： 熱變性、酸堿變性和化學(xué)變性等。 2．粘度與沉降特性 嘌呤堿與嘧啶堿有共軛雙鍵，使堿基核苷、核苷酸和核酸在 240～ 290nm紫外波段有一強(qiáng)烈的吸收峰，最大吸收值在 260nm附近。 不同相對分子質(zhì)量的核酸沉降速度不同。 1．相對分子質(zhì)量 DNA能被乙醇和異戊醇沉淀。 核酸在 pH4時(shí)，帶負(fù)電荷 等電點(diǎn)（ pI）： pI＝ pKa1＋ pKa2 2 DNA的相對分子質(zhì)量較大，一般為 106～ 109 bp，大多數(shù) DNA為線性分子，分子極不對稱，雖然其長度可達(dá)厘米級但分子的直徑只有納米級。 DNA能被乙醇和異戊醇沉淀。 稀有堿基 二、 RNA的高級結(jié)構(gòu) 第五節(jié) 核酸的性質(zhì)及分離、分析 一、核酸的理化性質(zhì)
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1