shenghua第3章核酸化學(xué)(參考版)
2025-01-09 14:48本頁(yè)面
【正文】 常用的核酸分子雜交技術(shù)有： 原位雜交 、 斑點(diǎn)雜交 、Southern雜交及 Northern雜交等 。 不同來(lái)源的 ， 具有大致相同互補(bǔ)堿基順序的核酸片段稱為 同源順序 。 在核酸雜交分析過(guò)程中 ， 常將已知順序的核酸片段用放射性同位素或熒光標(biāo)記 。她的身上有兩組 DNA——— 其中一組占主導(dǎo)地位，而另一組只出現(xiàn)在某些器官中，但這組 DNA恰好遺傳給了孩子們 環(huán)境科學(xué)與工程系 環(huán)境科學(xué)與工程系 加熱 雙鏈 DNA 單鏈 DNA 雜交 雜化雙鏈 在退火條件下 ,不同來(lái)源的 DNA互補(bǔ)鏈形成雙鏈 ,或 DNA單鏈和 RNA單鏈的互補(bǔ)區(qū)形成 DNARNA雜合雙鏈的過(guò)程稱為 分子雜交 (molecular hybridization) 。這樣的人原本應(yīng)該是個(gè)雙胞胎，但在母體的子宮中，兩個(gè)受精卵子相融合，形成了帶有兩種截然不同基因的一個(gè)胎兒。簡(jiǎn)單地說(shuō)， 凱倫就是她自己的雙胞胎姐妹 。菲切爾德： 2022年發(fā)現(xiàn) ?母子 DNA不同 ?母子基因完全不符 幸福母親突變嫌犯 ?再生孩子證明清白 不料又被懷疑代孕 ?相似案例揭開(kāi)謎團(tuán)雙胞胎 DNA集一身 ?美國(guó)波士頓：凱倫 基因指紋 親子鑒定： 準(zhǔn)確率達(dá) %。 此外 ，DNA的復(fù)性也與它本身的組成和結(jié)構(gòu)有關(guān) 。 ?分子量越大復(fù)性越難 。 將熱變性的 DNA驟然冷卻時(shí) ， DNA不可能復(fù)性 。 ?復(fù)性后 ,核酸的紫外吸收降低 ,這種現(xiàn)象被稱作 減色效應(yīng) . ?DNA復(fù)性后，一系列性質(zhì)將得到恢復(fù)，但是生物活性一般 只能得到部分的恢復(fù) 。 ?G和 C的含量高， Tm值高。 環(huán)境科學(xué)與工程系 ?一般 DNA的 Tm值在 7085?C之間。 熱變性和 Tm DNA的變性過(guò)程是突變性的，它在很窄的溫度區(qū)間內(nèi)完成。 而 RNA變性后，約增加 %。 ?利用紫外吸收的變化，可以檢測(cè)核酸變性的情況。 溫度升高 、 酸堿度改變 、 甲醛和尿素等的存在均可引起核酸的變性 。 核酸的變性并不涉及磷酸二酯鍵的斷裂 ，所以它的一級(jí)結(jié)構(gòu) (堿基順序 )保持不變。 五、核酸的變性、復(fù)性與雜交 環(huán)境科學(xué)與工程系 1. 核酸的變性 ?定義： 核酸的變性是指核酸雙螺旋區(qū)的多聚核苷酸鏈間的 氫鍵斷裂 ，變成單鏈結(jié)構(gòu)的過(guò)程。 ?根據(jù)作用方式又分作兩類： 核酸外切酶 核酸內(nèi)切酶 ?在分子生物學(xué)研究中最有應(yīng)用價(jià)值的是 限制性核酸內(nèi)切酶 。在 RNA水解時(shí)， 2′OH首先進(jìn)攻磷酸基，在斷開(kāi)磷酯鍵的同時(shí)形成環(huán)狀磷酸二酯，再在堿的作用形成水解產(chǎn)物。 例如，在 mol/L NaOH溶液中， RNA幾乎可以完全水解 ，生成 2′或 3′磷酸核苷； DNA在同樣條件下則不受影響。 環(huán)境科學(xué)與工程系 四、核酸的水解 環(huán)境科學(xué)與工程系 1. 酸或堿水解 ? 核酸分子中的 磷酸二酯鍵 可在酸或堿性條件下水解切斷。DNA沒(méi)有這種作用。 如 DNA的等電點(diǎn)為 4～ ， RNA的等電點(diǎn)為 2～ 。 ? mRNA分子中每三個(gè)相鄰的核苷酸組成一組 ， 在蛋白質(zhì)翻譯合成時(shí)代表一個(gè)特定的氨基酸 ， 這種核苷酸三聯(lián)體稱為 遺傳密碼 （ coden） 環(huán)境科學(xué)與工程系 核酸的性質(zhì) 環(huán)境科學(xué)與工程系 ?一、一般理化性質(zhì) ? ?DNA為 白色纖維狀 固體； RNA為 白色粉末狀 固體 ? ?均溶于水； 不溶于一般有機(jī)溶劑 ，在 70%乙醇 中形成 沉淀 ； ? 在 和 1~2MNacl中 DNA蛋白 溶解度 低 溶解度 高 RNA蛋白 溶解度 高 溶解度 低 ? DNA粘度 很大 RNA粘度 小得多 ? 均很強(qiáng) 二、核酸的兩性性質(zhì)及等電點(diǎn) 環(huán)境科學(xué)與工程系 ? 與蛋白質(zhì)相似，核酸分子中既含有 酸性基團(tuán)（磷酸基） 也含有 堿性基團(tuán)（氨基）， 因而核酸也具有兩性性質(zhì)。 ?真核生物 mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 大多數(shù) 真核 成熟的mRNA分子具有典型的 5’端的 7甲基鳥(niǎo)苷三磷酸（ m7GTP ） 帽子結(jié)構(gòu)和 3’ 端的 多聚腺苷酸（ polyA） 尾巴結(jié)構(gòu) 。 環(huán)境科學(xué)與工程系 大腸桿菌 16S rRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu) 環(huán)境科學(xué)與工程系 mRNA的結(jié)構(gòu)與功能 環(huán)境科學(xué)與工程系 ?mRNA可形成 局部 雙螺旋結(jié)構(gòu)的二級(jí)結(jié)構(gòu) 。 ?在真核生物中 ， rRNA有四種： 5S， ， 18S，28S。 ?在原核生物中 ， rRNA有三種： 5S， 16S， 23S。 環(huán)境科學(xué)與工程系 1 2 3 葉子 反密碼子環(huán) 反密碼子 載運(yùn)氨基酸 臂 稀有堿基 tRNA的三葉草型二級(jí)結(jié)構(gòu) tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu) —倒 L形 環(huán)境科學(xué)與工程系 rRNA的結(jié)構(gòu)與功能 ?rRNA是細(xì)胞中 含量最多 的 RNA， 占總量的 80%。 環(huán)境科學(xué)與工程系 tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu) ?tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)由于局部雙螺旋的形成而呈
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