生化3第三章核酸化學(xué)-閱讀頁
2025-01-31 10:36本頁面
【正文】 pGp+2Gp+2Cp+A 外切酶 : 如： SPDase 5’ pGGCCGAoH3’ pGp+2Gp+2Cp+A 末端標(biāo)記 （二）酶的部分降解及產(chǎn)物的分離 尿素柱層析 雙向電泳 凝膠電泳 （三）小片段核苷酸的順序測(cè)定 按序降解法 核酸酶外切酶部分降解法 核酸內(nèi)切酶降解法 （四） .由小片段核苷酸的順序推測(cè) RNA分子順序 pAGCUG pAGCU +G pAGCUG pAGC+U+G pAG+C+U+G pA+G+C+U+G VPDase （一） RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu) 四 .RNA的高級(jí)結(jié)構(gòu) ?占 RNA總量的 15％ ?一種氨基酸對(duì)應(yīng)最少一種 RNA ?分子量 25000左右，大約由 70－ 90個(gè)核苷酸組成，沉降系數(shù)為 4S左右。 ?339。 （二） tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu) 第三節(jié) DNA的分子結(jié)構(gòu) 一、 DNA的 一級(jí)結(jié)構(gòu)及測(cè)定 二 .DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu) nm 小溝 大溝 雙螺旋 DNA的結(jié)構(gòu)參數(shù) 類型 旋轉(zhuǎn)方向 結(jié)晶狀態(tài) 螺旋直徑（ nm） 螺距（ nm） 每轉(zhuǎn)堿基對(duì)數(shù)目 堿基對(duì)間垂直距離（ nm） 堿基旋轉(zhuǎn)角度 A－ DNA B－ DNA C DNA z－ DNA 右 75%Na+ 右 92%Na + 右 66%Li + 左 人工合成 11 10 12 36186。 60186。 RNA在 。 RNA蛋白，溶于 ，高鹽不溶。 以 A260/A280進(jìn)行定性、定量 DNA和 RNA溶液中加入溴化乙錠（ EB），在紫外下發(fā)出熒光 四、核酸的變性與復(fù)性 （一） . 變性 變性 :穩(wěn)定核酸雙螺旋次級(jí)鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)破壞，變成單鏈結(jié)構(gòu)的過程。 變性表征 : 生物活性部分喪失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加（增色效應(yīng)） 變性因素 : pH（ ）變性劑（脲、甲酰胺、甲醛），低離子強(qiáng)度 加熱 熱變性和 Tm : DNA的變性過程 是突變性的，它在很窄的溫度區(qū)間內(nèi)完成。 一般 DNA的 Tm值在 7085?C之間。 G和 C的含量高， Tm值高。 DNA復(fù)性后，一系列性質(zhì)將得到恢復(fù)，但是生物活性一般只能得到部分的恢復(fù)，具有減色效應(yīng)。變性的 DNA緩慢冷卻時(shí)可復(fù)性，因此又稱為 “ 退火 ” 。 濾膜 :硝酸纖維素濾膜， DEAE纖維素濾膜 印跡種類 : Southern blotting:（ 1975） Northern blotting:（ 1979， Alwine) （ 1979， Towbin,ImmunoblottingWestern。這樣形成的新分子稱為雜交 DNA分子 。 1990年 10月，美國政府決定出資 30億美元，用 15年時(shí)（ 19912022）完成 HGP。承擔(dān) 3號(hào)染色體短臂D3S3610至端粒 30M b區(qū)域 3000萬 bp} HGP的研究?jī)?nèi)容 : 。 。 HGP的目標(biāo)： 基因的表達(dá)調(diào)節(jié)，癌癥發(fā)生的機(jī)制及治療，人類疾病的防治， 醫(yī)療，制藥，人口素質(zhì)，環(huán)境等。 ：改進(jìn)和創(chuàng)新了 DNA序列測(cè)定的方法，降低了測(cè)定成本。 ：現(xiàn)已測(cè)定了上百中模式生物的 DNA全序列，如酵母、線蟲、擬南芥、黑猩猩、 、血吸蟲、楊樹，正在進(jìn)行的小鼠、果蠅等。 三 .HGP面臨的挑戰(zhàn)
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