生化3第三章核酸化學(xué)-文庫吧資料
2025-01-22 10:36本頁面
【正文】 A U G : 堿基 ,核苷 ,核苷酸之間的分離采用 SephadexG10/G25 洗脫次序：核苷酸 核苷 堿基 核苷一磷酸 ,核苷二磷酸 ,核苷三磷酸的分離采用柱層析和 薄層層析法分離 . 柱層析洗脫次序 AMP ADP ATP 薄層層析遷移次序 AMP ADP ATP : 五 .核酸及其組分含量的 測定與純度測定 （一） .核酸含 量的測定方法 1ug/ml DNA A260 = 1A260 = 50 Ug/ml DNA 1ug/ml RNA A260 = 1A260 = 40 Ug/ml RNA (20250ug RNA,40400ug DNA) 苔黑酚法：苔黑酚 +核糖 +濃 HCl+FeCl3 綠色 A670680 二苯胺法：二苯胺 +脫氧核糖 +濃 H2SO4 藍(lán)色 A595620 (10100ug 核酸 ) EB( )染色 , 最小檢出量 1ng VitC H3PO4 +鉬酸銨 黃色磷鉬酸銨 磷鉬藍(lán) A650660 （二） . 核酸純度的 測定 測定 A260與 A280 A260 A280 = DNA: ≥ RNA: A260 A280 第六節(jié) 核酸研究的常用技術(shù) 一 .DNA的凝膠電泳 （一）瓊脂糖凝膠電泳 (分離 ,測量 ,回收 ,印跡 ) （二） PAGE電泳 1. PAGE濃度及選擇 2. PAGE電泳的分辨率 （三）影響凝膠電泳 Rf值的因素 二 .印跡技術(shù)與分子雜交 （一） .印跡技術(shù) 概念 :核酸的雜交中，經(jīng)過凝膠電泳分離的 DNA/RNA分子，雜交之前通過毛細(xì)管吸附作用 /電導(dǎo)作用將凝膠中 DNA/RNA分子原封不動地轉(zhuǎn)移到濾膜上。 將熱變性的 DNA驟然冷卻至低溫時(shí)， DNA不可能復(fù)性。因而測定 Tm值，可反映 DNA分子中 G, C含量，可通過經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算：（ G+C)%=()* （二） . 核酸的復(fù)性 變性核酸的互補(bǔ)鏈在適當(dāng)?shù)臈l件下，重新締合成為雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程稱為 復(fù)性 。 DNA的 Tm值與分子中的 G和 C的含量有關(guān)。因此，通常將紫外吸收的增加量達(dá)最大量一半時(shí)的溫度稱熔解溫度，用Tm表示。核酸的的一級結(jié)構(gòu) (堿基順序 )保持不變。 PH的溶解性 二 .兩性性質(zhì) : 胸腺嘧啶 核苷酸兩性離解及等電點(diǎn) 三、核酸的紫外吸收特性 在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵體系，因而具有獨(dú)特的紫外線吸收光譜，一般在 260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組份定性和定量測定的依據(jù)。 性 微 溶于水，不溶于有機(jī)溶劑 ,水中 溶解度 DNA達(dá) 2%， RNA達(dá) 4% DNA蛋白，溶于 1mol/L Nacl ，低鹽不溶。 HDNA 三、 DNA的三級結(jié)構(gòu) DNA雙螺旋的進(jìn)一步扭曲構(gòu)成三級結(jié)構(gòu)，負(fù)超螺旋 原核 雙鏈環(huán)狀DNA（ dcDNA） 病毒 單鏈環(huán)狀DNA（ scDNA） 單鏈線性DNA（ ssDNA） 第四節(jié) 核酸及核苷酸的性質(zhì) 一、溶解性 DNA在 。 38186。末端都具有 CpCpAOH的結(jié)構(gòu)。 ?分子中含有較多的修飾成分。 多聚核苷酸的表示方式 DNA RNA 二、 RNA的降解 RNA的化學(xué)降解 ?堿降解： RNA用稀堿降解產(chǎn)物為 2’核苷酸和 3’核苷酸混合物。稀有堿基的種類很多，大部分是上述堿基的甲基化產(chǎn)物。 DNA所含的糖為 βD2脫氧核糖；
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