【正文】 下完成，因而對溫度的要求不象氣相色譜儀那樣嚴(yán)格。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 四、高效液相色譜儀用檢測器 （一）高效液相色譜檢測器的基本要求和分類 對高效液相色譜儀檢測器的特性要求與氣相色譜基本是一致的，但有兩個問題有必要說明。 。 。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 目前常用的檢測器有兩大類，一類是保持溶質(zhì)在溶劑中，即流動相加已分離組分直接進(jìn)入檢測器檢測，即對洗脫液和組分總體的物性（如折光率、電導(dǎo)率等）進(jìn)行檢測。稱為總體性檢測器。另一類是把從色譜柱流出物的溶質(zhì)和溶劑分開，讓溶質(zhì)單獨(dú)進(jìn)入檢測器，稱為溶質(zhì)性檢測器。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 （二）常用檢測器 由光源、光路系統(tǒng)、測量池、參比池、光電接收元件及電子線路和記錄儀構(gòu)成。其具體結(jié)構(gòu)基本與紫外 可見分光光度計(jì)相同。遵循朗伯 比爾定律。要注意它的樣品池做成細(xì)長的流動型，如 Z型、H型。便于動態(tài)實(shí)時檢測分離組分。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 圖 523 紫外檢測器 第三節(jié) 高相液相色譜儀 圖 524 紫外分光檢測器 第三節(jié) 高相液相色譜儀 光路 出口 樣品＋洗脫液 樣品＋洗脫液 光路 出口 圖 525 紫外檢測器樣品池 (a) “ Z ” 型 (b) “ H ” 型 第三節(jié) 高相液相色譜儀 檢測器可設(shè)計(jì)為單波長紫外檢測器與紫外及可見分光檢測器兩類。一般單波長紫外檢測器常采用較易獲得的兩種波長 254nm及 280nm的單色光。紫外分光檢測器的工作波長可通過調(diào)節(jié)棱鏡或光柵來加以選擇，因而可將檢測器的工作波長選擇在吸收系數(shù)較大波長上，以提高檢測靈敏度。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 檢測器與分光光度計(jì)的主要差異有： ①樣品檢測池體積只有 5μl ～ 8μl ，不致于影響峰形，并做成流動式。 ②檢測靈敏度達(dá) ～ （光度計(jì)為 ～ .）。為提高靈敏度，樣品池做得細(xì)長。 ③對分光后光的單色性、波長精度要求不高，光譜寬度可在 10nm，波長精度可以低至 177。 2nm。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 紫外及可見光檢測器是目前高效液相色譜儀中最常用的檢測器。它具有靈敏度和檢測精度高、線性范圍寬、受流量和溫度波動的影響小、適用于梯度洗脫及不破壞樣品等特點(diǎn)，是一種選擇性檢測器，只能用于在工作波長范圍內(nèi)有吸收的樣品。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 （ RID） 主要由光源系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、接收、放大、記錄系統(tǒng)構(gòu)成。由于各種物質(zhì)具有不同的折射率，一種混合物的折射率又是各組分折射率的平均值，而溶劑和樣品各組分折射率存在一定差異，所以通過檢測折射率的變化，就可以達(dá)到分析樣品各組分的目的。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 接照作用原理可將示差折光檢測器分為反射式和偏轉(zhuǎn)式兩種。 （ 1）反射式示差折光檢測器： 根據(jù)菲涅爾反射原理，相分界面上反射光的強(qiáng)度取決于入射角和相分界面上兩種介質(zhì)的折射率，折射光的強(qiáng)度同樣也受入射角和相分界面上兩種介質(zhì)的折射率的影響。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 第三節(jié) 高相液相色譜儀 1 洗脫液、樣品 棱鏡 L2 D 接收系統(tǒng) 底板 樣品槽 參比槽 L M2 投影系統(tǒng) F M1 S 出口 (a)光路圖 洗脫液或樣品 不銹鋼底板 棱鏡 反射光（不用） 來自光源 L2 接收器 D (b)原理示意圖 圖 526 反射式示差折光檢測器 （ 2）偏轉(zhuǎn)式示差折光檢測器： 根據(jù)折射定律， n1sinθ 1 = n2sinθ 2 （ 5－ 9） 折射角 θ 2取決于入射角 θ 1和相分界面上兩種介質(zhì)的折射率 n n2。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 第三節(jié) 高相液相色譜儀 圖 527 偏轉(zhuǎn)式示差折光檢測器 記錄儀 光電倍增管 五棱鏡 光源 調(diào)零 光闌 透鏡 參比 樣品 反射鏡 放大器 反射式液槽體積小，在 3～ 5μl ，線性范圍小，為了避免出現(xiàn)全反射現(xiàn)象，需根據(jù)洗脫液和樣品組分的折射率更換入射方的棱鏡。偏轉(zhuǎn)式的線性范圍較寬，不需換液槽，穩(wěn)定性好，但液槽體積大。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 示差折光檢測器是一種非選擇性檢測器。基本上對所有被測對象均有響應(yīng)，且不破壞被測物質(zhì)的性質(zhì)。但靈敏度較低，不適于做痕量分析。也不適于梯度洗脫。因樣品 洗脫液的折射率將隨洗脫液組成變化而變化，從而產(chǎn)生干擾信號。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 某些物質(zhì)在吸收了一定的光能后，會發(fā)射出頻率較低、波長較長的熒光。熒光檢測器就是用紫外光（稱為激發(fā)光）照射樣品，通過光電倍增管檢測樣品所發(fā)出的熒光（稱為發(fā)射光），記錄出色譜圖的。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 熒光檢測器根據(jù)單色器的不同，分為多波長熒光檢測器（由多個濾光片構(gòu)成單色器）和熒光分光檢測器（由光柵構(gòu)成單色器）。熒光檢測器在選擇性和靈敏度方面優(yōu)于紫外檢測器。但它檢測的樣品必須能夠被激發(fā)出熒光，也是一種選擇性檢測器。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 此外，二極管陣列檢測器、氫火焰離子化檢測器、微量吸附熱檢測器等檢測器也是高效液相色譜儀常用的檢測器。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 圖 528 二極管陣列檢測器及其譜圖 第三節(jié) 高相液相色譜儀 五、操作條件的選擇 操作條件的選擇除前面介紹的色譜柱參數(shù)、流動相及固定相的選擇外，還包括以下幾點(diǎn)。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 提高流量可縮短分析時間，但會降低分離度，增加柱壓。應(yīng)根據(jù)樣品的性質(zhì)、樣品量大小、分離目的、選擇的固定相和流動相以及色譜柱的尺寸等因素綜合考慮。分析時，一般選 10ml/min以下。制備時，流量可選大一些。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 一般在室溫下進(jìn)行。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有70％以上的分析是在室溫下進(jìn)行的。當(dāng)然提高溫度可提高分析速度，但也會降低分離度。因此在高效液相色譜儀中，一般均通過流動相的選擇而不是柱溫的調(diào)整來提高分離能力。高溫對固定相的影響也應(yīng)充分考慮。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 高效液相色譜儀分析速度提高的原因之一是采用了高壓。一般可在 ～，最高不能超過。高壓雖可增加分離速度，但會帶來密封、固定相的強(qiáng)度等問題。除高壓技術(shù)外，也可以通過采用高效固定相，縮短柱長的努力來提高分析速度。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 高效液相色譜儀主要追求的是分析速度及分離能力，常只允許極小的進(jìn)樣量，這將有利于這兩項(xiàng)指標(biāo)。進(jìn)樣量一般在 1μg ～ 25μg 之間。一般隨著樣品體積的增加，柱效率會降低。 第三節(jié) 高相液相色譜儀 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 一、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 二、微機(jī)在色譜儀中的功能 目 錄 一、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 色譜分析的目的是得到混合物中各組分的定性與定量結(jié)果，而數(shù)據(jù)處理的最終目的就是給出這些結(jié)果。最基本的方式是繪出色譜圖。在計(jì)算機(jī)介入后，還可提供一些如保留時間、峰高、峰面積、成份比率等文字信息。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 是目前用得比較廣泛的一種裝置。它通過將樣品信號定量轉(zhuǎn)換為電壓信號，推動計(jì)錄筆記錄出色譜圖。但保留時間、峰高、峰面積等參數(shù)需要人工的方式來處理。使用不是特別方便，分析結(jié)果也不是很準(zhǔn)確。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 積分儀主要有兩種：模擬和數(shù)字積分儀。其主要功能是求色譜圖上各峰的峰面積。在色譜分析時，被分析物的濃度和含量通常與峰面積存在線性關(guān)系。積分儀可以更準(zhǔn)確地計(jì)算出色譜峰面積，為定量分析打下良好的基礎(chǔ)。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 微機(jī)的發(fā)展使積分儀已漸被色譜數(shù)據(jù)處理站（ chromatographic data system）取代。它包括硬件和軟件兩個部分，硬件部分除普通或?qū)Ｓ玫奈C(jī)外，還通過接口電路將色譜儀與微機(jī)聯(lián)為一體。軟件部分主要有系統(tǒng)、控制、采樣軟件和各種數(shù)據(jù)處理軟件包。除進(jìn)行色譜數(shù)據(jù)處理外，還參與儀器的自動控制。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 圖 529 色譜界面 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 二、微機(jī)在色譜儀中的功能 峰檢測方式有：①峰處理方式：波形處理、基線校正、不完全分離成分的分離、拖尾峰上峰的分析、線性化；② 計(jì)算峰高；③峰面積積分。 斜率檢測，電平檢測，保留時間測定。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 可以進(jìn)行總和校正、成分比率、移動平均，線性多項(xiàng)式演算等數(shù)據(jù)計(jì)算。 可以實(shí)現(xiàn)程序升溫、程序變流速、程序變壓、閥門切換、流路切換、衰減程序、大氣壓平衡等一系列程序操作。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 內(nèi)部電池支撐內(nèi)存保存，磁盤的輸入、輸出。 可以按照預(yù)先的設(shè)定，自動控制色譜工作過程中的操作條件。 自動標(biāo)定保留時間、死時間、峰高等基本參數(shù)。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 可檢測出各種異常工作情況，顯示信息，報(bào)警并自動關(guān)閉儀器。 （ 1）分析器異常：保留時間、基線異常、重復(fù)性不良、不能校準(zhǔn)、校正系數(shù)異常、氫焰滅火、載氣壓力下降、標(biāo)準(zhǔn)氣斷、過壓和溫度過高等。 （ 2）信息處理器自己診斷。 （ 3）濃度上限監(jiān)視。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) （ 1）記錄器輸出色譜圖、棒圖、趨勢圖等。 （ 2）數(shù)據(jù)計(jì)算機(jī)輸出、打印記錄。 （ 3）報(bào)警輸出、自動停機(jī)。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 計(jì)算機(jī)化的色譜儀有如下優(yōu)點(diǎn)： 。 。 。 。 ，發(fā)現(xiàn)故障，指示故障源和發(fā)出報(bào)警信號，停機(jī)。 、壓力等變化引起的誤差。 第四節(jié) 色譜儀的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)膬上嗪推渌僮鲄?shù) ,多組分混合物樣品在色譜系統(tǒng)中可以實(shí)現(xiàn)分析。 氣相色譜儀利用載氣作為流動相，具有高分辨率、高速度、高靈敏度及選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，但要求樣品也必須為氣態(tài)。 本章內(nèi)容小結(jié) 高效液相色譜儀用溶劑作為流動相，需要的樣品是液態(tài)的，溶劑的選擇范圍也遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了載氣，操作基本上可以在室溫的條件下完成，比較適合自然狀態(tài)下大多數(shù)樣品的分析。 本章內(nèi)容小結(jié) 結(jié)束 !