【正文】 87 培養(yǎng)基灌裝流程 ? 確認設(shè)施設(shè)備和各滅菌工藝驗證的完成 ? 確認培養(yǎng)基灌裝的范圍 ? 制訂培養(yǎng)基灌裝方案 ? 培養(yǎng)基選擇 ? 灌裝數(shù)量和灌裝總時間 ? 各步驟間的間隔時間 ? 挑戰(zhàn)試驗的最差條件設(shè)計 ? 人員環(huán)境監(jiān)測計劃 ? 培養(yǎng)條件、時間和設(shè)備 ? 培養(yǎng)基靈敏度試驗 ? 總結(jié)和失敗原因調(diào)查 88 使用范圍 計劃外的驗證 ： 如工藝重大改變，設(shè)施設(shè)備改造等 偏差原因： 無菌實驗失敗，根據(jù)偏差調(diào)查結(jié)果的要求 環(huán)境監(jiān)測結(jié)果明顯反常，根據(jù)偏差調(diào)查結(jié)果的要求 某個區(qū)域的空調(diào)關(guān)閉時間超過驗證的時間段 89 培養(yǎng)基灌裝試驗應(yīng)考慮的因素 ? 培養(yǎng)基的選擇 ? 培養(yǎng)基促生長能力 ? 灌裝數(shù)量 ? 環(huán)境監(jiān)測方案 ? 收集和培養(yǎng) ? 最差條件的挑戰(zhàn) 90 培養(yǎng)基的選擇 ? 適應(yīng)廣譜微生物生長 ? 較好的澄明度，較小的粘度 ? 可除菌過濾 ? 常用培養(yǎng)基： 3％大豆胰蛋白肉湯（ TSB） 粉針劑： ?聚乙二醇，乳糖和 /或肉湯 粘稠的乳膏劑： ?混于肉湯中的瓊脂和羧甲基纖維素 91 培養(yǎng)基促生長能力 ? 靈敏度試驗 取灌裝前、中、后各階段的培養(yǎng)基樣品 枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌、綠膿桿菌、黑曲霉菌、環(huán)境菌 每個菌種接種 2支，計數(shù) 100cfu/瓶 2025176。 C/3035 176。 C 培養(yǎng) 5天內(nèi)生長 92 灌裝數(shù)量 ? 批次量足夠大 ? 灌裝量一般 5000~10000瓶 ? 批量小的 (低于 5000瓶 )以全批數(shù)量灌裝 93 環(huán)境監(jiān)測 ? 全面、全過程檢測 ? 對無菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境的評估 ? 對人員資格的確認 (所有無菌區(qū)工作人員） ? 環(huán)境的清潔：灌裝結(jié)束 4小時內(nèi) 94 收集和培養(yǎng) ? 按灌裝的先后順序軋蓋 ? 翻轉(zhuǎn)接觸所有表面 ? 培養(yǎng)： 2025度 7天， 3035度 7天 ? 在中間轉(zhuǎn)換溫度和培養(yǎng)結(jié)束時 100％燈檢 ? 記錄污染瓶數(shù) ? 記錄丟棄的數(shù)量和原因，不得隨意丟棄 95 最差條件挑戰(zhàn) 儲存時間： 灌裝設(shè)備、灌裝部件、儲罐、無菌物料、藥液在實際灌裝前能夠放置的最長時間 ? 例 1: 用需要再滅菌前的灌裝設(shè)備、灌裝部件、儲罐、無菌物料參與培養(yǎng)基灌裝 ? 例 2:無菌過濾后存放在儲罐內(nèi)的培養(yǎng)基到實際生產(chǎn)時產(chǎn)品的最大儲存時間后再灌裝 96 最差條件挑戰(zhàn) ? 無菌灌裝時間 在培養(yǎng)基灌裝中模擬用時最長的瓶子滿批量生產(chǎn)需要的時間，其中包括正常的干擾時間（換班、設(shè)備維修） ? 灌裝速度和瓶子規(guī)格 ? 灌裝速度和瓶子規(guī)格的關(guān)系 ? 最慢的速度，最大的瓶子規(guī)格 ? 最小的瓶子規(guī)格，最快的速度 97 最差條件挑戰(zhàn) ? 人員 ? 培養(yǎng)基灌裝時模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數(shù) ? 無菌區(qū)工作人員至少每年參與一次培養(yǎng)基灌裝 ? 操作干擾 ? 正常的（灌裝線裝配，稱量調(diào)節(jié)，加膠塞，處理倒瓶，取樣，環(huán)境監(jiān)測） ? 非正常的（設(shè)備故障，灌裝線堵塞，軌道調(diào)節(jié)，拆卸 /替換破損的部件） ? 干擾的次數(shù)應(yīng)該不少于正常生產(chǎn)時發(fā)生的次數(shù) ? 工藝氣體 ? 使用氮氣的，因考慮其不利于微生物生長，以壓縮空氣代替 98 培養(yǎng)基灌裝失敗后的調(diào)查 ? 不管批次量有多大 ,只要培養(yǎng)基灌裝中存在污染就意味著無菌保證有問題 ? 設(shè)計合理、操作適當(dāng)?shù)臒o菌灌裝污染水平應(yīng)為零 灌裝瓶數(shù) 結(jié)果判斷 5000 如有 1瓶污染，調(diào)查并再驗證 5000~10000 如有 1瓶污染，調(diào)查并重復(fù)培養(yǎng)基灌裝 如有 2瓶污染，調(diào)查并考慮再驗證 10000 如有 1瓶污染，進行調(diào)查 如有 2瓶污染，調(diào)查并考慮再驗證 99 培養(yǎng)基灌裝失敗后的調(diào)查 ? 環(huán)境和人員監(jiān)測數(shù)據(jù) ? 滅菌記錄和設(shè)備校驗記錄 ? 灌裝區(qū)域清潔消毒記錄 ? 人員培訓(xùn)記錄 ? 高效過濾器完整性測試記錄 ? 壓差記錄 ? 溶液除菌過濾器完整性測試記錄 ? 污染菌來源 ? 丟棄的培養(yǎng)基灌裝瓶 ? 灌裝時的干擾活動 ? 其他偏差和干擾活動 100 容器密封性驗證 ? 目的：保證滅菌過程后和產(chǎn)品有效期內(nèi)密封系統(tǒng)的完整性 ? 密閉系統(tǒng)：安瓿或容器 /膠塞系統(tǒng) ? 方法： ? 物理方法：染料檢漏法，鹽水滲入法，高壓電極檢測機 ? 微生物檢測法： ? 氣溶膠法 ? 將灌裝培養(yǎng)基的壓蓋容器放置在充滿微生物的氣溶膠腔室內(nèi)，保持一定溫度、壓力、濕度和時間 ? 微生物浸泡法 ? 將灌裝培養(yǎng)基的壓蓋容器倒置在一定濃度的特定微生物的溶液內(nèi)，保持一段時間 101 微生物浸泡法操作步驟 ?菌液 ?待確認密封口 ?支架 ?培養(yǎng)基 ?容器 ? 選擇試驗菌種（大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、粘質(zhì)沙雷氏菌） ? 制備菌懸液 ? 一接種環(huán)置 10ml TSB中 3035度培養(yǎng) 1618小時，再置于1000 ml TSB中培養(yǎng) 2224小時，濃度不小于 106/ml ? 準(zhǔn)備灌裝有培養(yǎng)基的西林瓶（按正常程序軋鋁蓋） ? 試驗： ? 將鋁蓋去除 ? 倒置于菌懸液中 4小時 ? 取出后消毒外表面 ? 培養(yǎng) 7天，每天觀察生長情況 ? 培養(yǎng)基的陽性試驗 102 粉針劑、凍干粉針、小容量注射劑工藝驗證的異同 粉針劑 凍干粉針 小容量注射劑 相同點 遵循一般驗證程序 設(shè)計，安裝，運行，性能，產(chǎn)品 基本范圍相同：布局設(shè)計，建筑材質(zhì)，環(huán)境級別，HEPA， 工藝用水，純蒸汽，清洗滅菌去熱原設(shè)備及程序，氣體系統(tǒng)，人員，包裝，無菌工藝，產(chǎn)品工藝 不同點 無菌粉末的處理，分裝機，培養(yǎng)基灌裝程序 凍干機，無菌過濾器 洗烘灌封機，不一定是最終滅菌產(chǎn)品 103 無菌工藝的再驗證 ? 法規(guī)性和定期性的再驗證 ? 計量器具（每年一次） ? 培養(yǎng)基灌裝（每年兩次） ? 高效過濾器泄漏試驗（每年兩次） ? 關(guān)鍵滅菌設(shè)備及滅菌程序（滅菌釜，熱隧道，凍干機，儲液罐）（每年一次） ? 人員（每年一次） ? 變更引起的再驗證 ? 變更應(yīng)評估對產(chǎn)品質(zhì)量可能的影響 ? 原料，包材 ? 工藝參數(shù)或路線 ? 設(shè)備改變或重大維修 ? 處方改變，批量改變 ? 偏差、質(zhì)量事故等 104 不同品種共線生產(chǎn)的驗證要求 ? 評估不同品種共線生產(chǎn)的風(fēng)險，制定控制措施 ? 核心是防止交叉污染 ? 制訂有效的清潔規(guī)程 ? 拆卸、清洗、干燥、儲存、裝配 ? 清潔劑的選擇 ? 清潔驗證 ? 確定殘留物限度標(biāo)準(zhǔn)（化學(xué) /微生物） ? 確定取樣點和檢驗方法 ? 日常監(jiān)控和再驗證 105 常見問題 ? “無菌工藝驗證包括工藝無菌性驗證和產(chǎn)品驗證”，是否可以理解為在產(chǎn)品注冊申報時就已形成本產(chǎn)品的完整的工藝規(guī)程中規(guī)定的各項參數(shù)的驗證？ ? 在生產(chǎn)過程中，無菌灌裝線上沉降碟的放置是否應(yīng)在所用操作開始前完成？ ? 沉降碟需要暴露多長時間？ ? 動態(tài)沉降菌檢測中，等結(jié)果出來已經(jīng)是 23天后了，如何根據(jù)結(jié)果進行判斷？ 106 ? 壓縮空氣的微生物檢測如何很好的進行？ ? 請問如何建立警戒限或糾偏限？有無相關(guān)的計算公式或技術(shù)要求？ ? 無菌檢查不合格時，如有真菌不合格的情況，可能有哪些原因？最有可能的原因是什么？ 107 謝謝！ 108