實時熒光定量pcr技術(shù)的原理及應(yīng)用realtimequantitative-資料下載頁
2024-09-29 09:20本頁面
【導(dǎo)讀】實時熒光定量PCR的方法應(yīng)用。定量PCR的實驗要素。平臺定量PCR儀器介紹。在PCR結(jié)束后對終點產(chǎn)物進行定量分析。實時定量PCR技術(shù)：。熒光閾值是在熒光擴增曲線上人為設(shè)定的一個。熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定的域值時所。對DNA模板沒有選擇性。使用方便--不必設(shè)計復(fù)雜探針??已知拷貝數(shù)的質(zhì)粒DNA，做系列稀釋。含有和待測樣品相同擴增片段的cDNA. 內(nèi)標(biāo)通常是β-actin、內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組。可以使用8連排管或96孔板，
【正文】 ● DNA純度： OD260/OD280=， ~ 間 ● DNA用量： ng –100 ng ● RNA純度： OD260/OD280= ● cDNA用量： 1100 ng 總 RNA反轉(zhuǎn)錄的 cDNA取 1 uL 標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋方法 復(fù)管測試 ●樣品和標(biāo)準(zhǔn)品都要重復(fù) ●重復(fù)次數(shù)須遵循統(tǒng)計學(xué)要求 平臺 PCR儀介紹 ABI 7500 fast 使用 96孔板，樣品量大， 儀器穩(wěn)定，結(jié)果分析直觀 ABI試劑 ROX校正物理方面的誤差：槍的誤差（如試劑體積）、耗材質(zhì)量（如管蓋厚度、透光性能不一致）所導(dǎo)致的光能損失、儀器穩(wěn)定性（如孔間、批間溫度的波動） Rn= Normalization = Reporter / Referenc Rotor gene 6500HRM 36孔 (普通透明 )或者 72孔(特殊 ) 離心式檢測 可以做 HRM。 MJ Opticon 2 可以使用 8連排管或 96孔板，軟件操作簡單 謝謝！
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