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正文內(nèi)容

實時熒光定量pcr技術(shù)的原理及應(yīng)用realtimequantitative(編輯修改稿)

2024-11-04 09:20 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 ve Quantification, RQ) 基因在不同組織中的表達差異 藥物療效考核 耐藥性研究 絕對定量與相對定量的定義 絕對定量通過標(biāo)準(zhǔn)品定量 ?絕對定量的標(biāo)準(zhǔn)樣品: 已知拷貝數(shù)的質(zhì)粒 DNA,做系列稀釋。 標(biāo)準(zhǔn)樣品的種類: ? ?含有和待測樣品相同擴增片段的克隆質(zhì)粒 ? ?含有和待測樣品相同擴增片段的 cDNA ? ?PCR的產(chǎn)物 絕對定量:從熒光到拷貝數(shù) 相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量 ?內(nèi)標(biāo)( Endogenous Control)通常是 βactin、GAPDH基因等看家基因 ?在細(xì)胞中的表達量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小 ?內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量 相對定量:參照因子 Calibrator 相對定量分析方法 1 ΔΔCt 前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴增效率接近 100%且偏 差在 5%以內(nèi) 用內(nèi)參基因的 CT值歸一目標(biāo)基因的 CT值: ΔCT( test)= CT ( target,test) CT
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