pcr技術(shù)及其應(yīng)用(編輯修改稿)
2024-08-31 22:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 R擴增 1. 細胞或組織固定：細胞經(jīng)固定和乙醇通透化處理后便適于一般 PCR試劑 （ 包括引物和 Taq酶 ） 進入 2. PCR擴增細胞內(nèi)目的片段 3. 原位雜交檢測擴增產(chǎn)物 mRNA表達 原位ＰＣＲ分析基因表達的組織特異性 熒光定量 PCR（ realtime PCR)分析基因表達水平 通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針 ,對PCR產(chǎn)物進行標(biāo)記跟蹤 ,實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程 ,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對結(jié)果進行分析 ,計算待測樣品的初始模板量。 內(nèi)摻式染料 SYBR Green I 序列特異性探針 Taqman Molecular Beacons Dual Probes(FRET) 引物特異性探針 Amplifluor (Intergen) 5’ 3’ 5’ 3’ SG SG SG SG SG Excitation Emission SYBRGreen I 反向 PCR (reverse PCR) 擴增已知序列兩側(cè)的未知序列 用反向的互補引物來擴增兩引物以外的 DNA片段，對某個已知 DNA片段兩側(cè)的未知序列進行擴增。 未知序列 未知序列 已知序列 已知序列 未知序列 未知序列 限制酶 限制酶 連接酶 實時熒光定量 PCR儀 梯度 PCR儀 普通 PCR儀 材料：含 儀器：微量移液器及吸頭、 PCR儀及 PCR管 瓊脂糖凝膠電泳設(shè)備 試劑： 10XPCR 反應(yīng)緩沖液 25mmol/L MgCl2 10mmol/L dNTP 10μ mol/L 引物 1和引物 2 二、實驗材料、儀器和 試劑 （ 50181。l體系）： 10 X PCR反應(yīng)緩沖液 25mmol/L MgCl2 10mmol/L dNTP 10μmol/L 引物 1 10μmol/L引物 2 模板 DNA TaqE 補充水 三、操
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