熒光定量pcr原理及應用(編輯修改稿)
2025-02-12 06:17 本頁面
【文章內容簡介】 。 其他定量方法 熒光定量 PCR檢測模式 ? 熒光定量 PCR的理論基礎：均基于熒光共振能量轉移 （ FRET)的原理 ， 即當一個熒光基團與一個淬滅基團的距離鄰近時 （ ＜ 10nm)，就會發(fā)生熒光能量轉移 ， 淬滅基團會吸收熒光基團在激發(fā)光作用下的激發(fā)熒光 ， 從而使其發(fā)不出熒光 。 但如果熒光基團一旦與淬滅基團分開 ， 淬滅作用即消失 。 檢測模式 ? SYBR Green I 檢測模式 ： SYBR Green I 是一種結合于小溝中的雙鏈 DNA 結合染料。與雙鏈 DNA 結合后，其熒光大大增強。 ?在 PCR 反應體系中，加入過量 SYBR 熒光染料， SYBR 熒光染料特異性地摻入 DNA 雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與 PCR 產物的增加完全同步。 SYBR Green I 工作原理 ? 缺點： PCR反應中的非特異性擴增或引物二聚體也會產生熒光，通常本底較高，引起假陽性。 ? 優(yōu)點
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