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正文內(nèi)容

熒光定量pcr原理及應(yīng)用(編輯修改稿)

2025-02-12 06:17 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 。 其他定量方法 熒光定量 PCR檢測(cè)模式 ? 熒光定量 PCR的理論基礎(chǔ):均基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移 ( FRET)的原理 , 即當(dāng)一個(gè)熒光基團(tuán)與一個(gè)淬滅基團(tuán)的距離鄰近時(shí) ( < 10nm),就會(huì)發(fā)生熒光能量轉(zhuǎn)移 , 淬滅基團(tuán)會(huì)吸收熒光基團(tuán)在激發(fā)光作用下的激發(fā)熒光 , 從而使其發(fā)不出熒光 。 但如果熒光基團(tuán)一旦與淬滅基團(tuán)分開(kāi) , 淬滅作用即消失 。 檢測(cè)模式 ? SYBR Green I 檢測(cè)模式 : SYBR Green I 是一種結(jié)合于小溝中的雙鏈 DNA 結(jié)合染料。與雙鏈 DNA 結(jié)合后,其熒光大大增強(qiáng)。 ?在 PCR 反應(yīng)體系中,加入過(guò)量 SYBR 熒光染料, SYBR 熒光染料特異性地?fù)饺? DNA 雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。 SYBR Green I 工作原理 ? 缺點(diǎn): PCR反應(yīng)中的非特異性擴(kuò)增或引物二聚體也會(huì)產(chǎn)生熒光,通常本底較高,引起假陽(yáng)性。 ? 優(yōu)點(diǎn)
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