熒光定量pcr原理及應(yīng)用(已修改)
2025-01-28 06:17 本頁面
【正文】 實(shí)時(shí) 熒光定量 PCR原理及應(yīng)用 謝建紅 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR的基本原理 ? 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 就是 通過對(duì) PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。 ? 在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)中 ， 引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì) ， 隨著 PCR 反應(yīng)的進(jìn)行 ， PCR 反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì) ， 熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加 。 每經(jīng)過一個(gè)循環(huán) ， 收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào) ， 這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化 ， 從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖 . ? 熒光擴(kuò)增曲線 分為三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段 、熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。 ? 熒光背景信號(hào)階段 ：為擴(kuò)增最初的 10～ 15個(gè)循環(huán) ， 擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋 ， 我們無法判斷產(chǎn)物量的變化 。 ? 平臺(tái)期：擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加 。 PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系 ， 所以根據(jù)最終的 PCR 產(chǎn)物量不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù) 。 ? 指數(shù)期：此期 PCR 產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，因此我們可以選擇在這個(gè)
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