【文章內(nèi)容簡介】 轉(zhuǎn)變?yōu)槎磐弑?。不同化合物??差別可以很大。 另外， ?還會受環(huán)境（如溫度、溶劑等）的影響，例如，降低溫度可導致一個化合物的 ?增大，提高溫度可導致一個化合物的 ?降低。 32 量子產(chǎn)率 由于熒光的非單色性、各向的不均勻性和二級發(fā)射等原因，熒光量子產(chǎn)率的直接測定的重復性往往較差。因此，實際測量中大多采用的是 相對法 ，即用一已知其熒光量子產(chǎn)率的參比化合物在相同條件下對照測定，并可通過公式計算目標化合物的熒光量子產(chǎn)率： ? = ?s[Iεscs/(Isεc)] ?s、 εs、 cs和 Is分別是參照物的熒光量子產(chǎn)率（已知）、摩爾消光系數(shù)、溶液濃度和熒光強度； ?、 ε 、 c和 I分別是被測物的熒光量子產(chǎn)率（未知）、摩爾消光系數(shù)、溶液濃度和熒光強度。 參照物 應是 ?已知 、 無自吸收 、 無濃度猝滅 、 在被測物所用溶劑中可溶 、 易純化 、 穩(wěn)定 和 對雜質(zhì)不敏感 的物質(zhì)。常用的參照物如羅丹明 B和喹啉硫酸氫鹽等。 33 熒光產(chǎn)生的條件 化合物能夠產(chǎn)生熒光的 必要條件 是： 它 吸收光子發(fā)生多重性不變的躍遷時所吸收的能量小于斷裂其最弱的化學鍵所需要的能量 。 另外，化合物要能發(fā)生熒光，其結(jié)構(gòu)中必須有 熒光基團 。 熒光基團 都是 含有不飽和鍵 的基團，當這些基團是分子的共軛體系的一部分時，則該化合物可能產(chǎn)生熒光。 34 影響熒光的主要因素 ： 可使化合物熒光增強的基團被稱為 熒光助色團 。一般為 給電子取代基 ，如 NH OH等。相反， 吸電子基團如 COOH、 CN等將減弱或抑制熒光的產(chǎn)生，被稱為 熒光消色團 。 35 影響熒光的主要因素 增加共平面的稠合環(huán)的數(shù)目，特別是當稠合環(huán)以線型排列時，將有利于體系內(nèi) ?電子的流動，從而使體系發(fā)生躍遷所需吸收的能量降低，進而有利于熒光的產(chǎn)生。 ： 剛性增強后，將減弱分子的振動，從而使分子的激發(fā)能不易因振動而以熱能形式釋放；另外，分子剛性的增加常有利于增加分子的共平面，從而有利于增大分子內(nèi) ?電子的流動性，也就有利于熒光的產(chǎn)生。 ： 36 影響熒光的主要因素 根據(jù)電子躍遷規(guī)則， S1態(tài)的電子組態(tài)是（ ?， ?*）態(tài)時，有利于熒光的產(chǎn)生，當 S1態(tài)的電子組態(tài)是（ n， ?*）態(tài)時，不利于熒光的產(chǎn)生。 ： 重原子具有增強系間竄越的作用，將增大從 S1態(tài)向 T1態(tài)的系間竄越的速率常數(shù)和量子產(chǎn)率，從而導致降低熒光量子產(chǎn)率。 ： 37 影響熒光的主要因素 增加溶劑的極性，一般有利于熒光的產(chǎn)生。 ： 降低體系溫度可以提高熒光量子產(chǎn)率。 ： 如氫鍵、吸附、溶劑粘度增加等均可提高熒光的量子產(chǎn)率，這都可用減少了分子的熱振動和增加了分子的剛性來解釋。 ： 38 39 熒光光譜儀的原理、操作及數(shù)據(jù)處理 40 在實驗樣品受到激發(fā)的情況下，通過選擇合適的探測器和工作模式，記錄下發(fā)射光強與激發(fā)源特性、樣品特性以及溫度、時間、空間、能量等相關(guān)特性之間的關(guān)系，以此來更好的研究或利用發(fā)光過程。 熒光光譜儀的基本原理 41 樣品準備 塊狀固體 1. 為了獲取盡可能理想的光譜，減小內(nèi)外表面因素的干擾，最好 切成規(guī)則形狀，并進行拋光 。 2. 如果要做系列樣品特性的對比，應盡量在 尺寸和光潔度 上將其制為同一規(guī)格 。 4. 對于與各項異性有關(guān)的測試，務必要注意 光軸（或 x,y,z 軸）的位置 。 5. 對于有 自吸收 特性的樣品要注意其對測試結(jié)果的影響。 42 樣品準備 粉體和微晶 1. 避免混入諸如濾紙纖維、膠水等雜質(zhì) ，以免其發(fā)光對測試結(jié)果產(chǎn)生影響。 2. 樣品應盡量保存在 不會引入雜質(zhì)又防潮避光 的樣品管（盒）中。 3. 對于強光下不穩(wěn)定的化合物，測試時應特別注意 控制入射光的強度 ，避免破壞樣品。 4. 粉體和微晶樣品一般夾在 石英玻璃片 進行測試。 43 液體 樣品準備 1. 溶液樣品盡量使用 透明的玻璃化溶液 ，避免在這種匯聚式光路中由于比色皿中溶液的前后吸收不均導致的光譜失真問題。 2. 為安全起見，對于使用揮 發(fā)性劇毒溶劑 的測試，一定要有合適的防護 。 3. 易揮發(fā)、易變質(zhì) 的溶液最好 現(xiàn)配現(xiàn)測 。 4. 液體樣品一般放在 帶蓋石英比色皿 （與紫外測試所用比色皿不同，為側(cè)面全透明型）中進行測試。 44 測試準備 由于物質(zhì)的發(fā)射特性和吸收特性是緊密相關(guān)的，所以提前做好吸收譜可以有效縮短熒光測試的摸索時間。 對于不知道相關(guān)特性的樣品，吸收譜的測試比熒光光譜的測試要容易很多。 所以，建議大家 先測一下樣品的吸收譜，并從中找出感興趣的吸收峰和特性 ，在熒光測試時以便參考。 45 光譜測試 電源 —— 燈源 根據(jù)吸收譜中感興趣的峰確定激發(fā)波長，選擇合適的發(fā)射譜波長范圍、濾光片、光路狹縫、掃描速度等進行發(fā)射譜的掃描。 根據(jù)發(fā)射譜中感興趣的峰確定發(fā)射波長，選擇合適的激發(fā)譜波長范圍、濾光片、光路狹縫、掃描速度等進行激發(fā)譜的掃描。 46 根據(jù)激發(fā)譜中感興趣的峰確定激發(fā)波長，選擇合適的發(fā)射譜波長范圍、濾光片、光路狹縫、掃描速度等進行發(fā)射譜的掃描。 4步循環(huán)掃描得到理想的光譜圖。 光源 —— 電源 光譜測試 47 濾光片的選擇 ： 紫外濾光片、可見濾光片、紅外濾光片； ： 帶通濾光片、截止濾光片、分光濾光片、中性密度濾光片、反射濾光片； 帶通型 ： 選定波段的光通過，通帶以外的光截止。 短波通型 (又叫低波通 )：短于選定波長的光通過，長于該波長的光截止。 比如紅外截止濾光片， IBG650。 長波通型 (又叫高波通 )：長于選定波長的光通過，短于該波長的光截止 比如紅外透過濾光片， IPG800. 濾光片的分類 48 濾光片的選擇 為了消除剩余入射光對熒光光譜產(chǎn)生影響，我們通常要選擇合適的 長波通型截止濾光片 。 激發(fā)波長一定要小于發(fā)