【文章內(nèi)容簡介】 檢測，即可診斷相應(yīng)部位是否存在結(jié)核桿菌的感染。 1．痰或支氣管灌洗液TBDNA檢測可輔助診斷肺結(jié)核病。 2．血液（白細(xì)胞）TBDNA檢測可輔助診斷播散性肺結(jié)核和各臟器的肺結(jié)核病。 3．腦脊液TBDNA檢測可輔助診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病。 4．宮頸拭子或尿液TBDNA檢測可輔助診斷泌尿生殖道結(jié)核病。 5．胸腹水TBDNA檢測可以輔助診斷結(jié)核性胸膜炎。 肺炎衣原體(CP)一 肺炎衣原體(chlamydia pneumonia，CP)感染 肺炎衣原體主要寄生于人類的呼吸道，是引起呼吸道感染的重要病原體之一。人類是肺炎衣原體的惟一宿主。 肺炎衣原體系人與人之間經(jīng)飛沫或呼吸道分泌物傳播，在密切接觸的家庭或在人群密集的醫(yī)院等公共場所更易傳播。其感染擴(kuò)散速度較為緩慢，具有散發(fā)和流行交替出現(xiàn)的特點(diǎn)，在人群中流行可持續(xù)6個(gè)月左右。 CP主要引起青少年急性呼吸道感染，尤其引起兒童的咽炎、鼻竇炎、支氣管炎和肺炎等。潛伏期平均30d左右，起病緩慢，臨床表現(xiàn)為咽痛、聲音嘶啞、發(fā)熱、咳嗽和氣促等癥狀，還可引起心包炎、心肌炎和心內(nèi)膜炎。CP感染所引起的肺炎患者1～2w上呼吸道感染癥狀消失，而咳嗽加重，可持續(xù)1至2個(gè)月。老年患者的臨床表現(xiàn)不易與其他原因引起的肺炎相區(qū)別，持續(xù)性咳嗽是本病的主要特點(diǎn)。半數(shù)肺炎患者常伴有結(jié)膜炎，也可引起肺外癥狀如紅斑結(jié)節(jié)、甲狀腺炎、格林巴利綜合征等。 近年來發(fā)現(xiàn)CP與冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病的發(fā)生有關(guān)。采用免疫組化、分子生物學(xué)和病理學(xué)的研究結(jié)果證實(shí)在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病灶中存在肺炎衣原體。不僅有肺炎衣原體的梨形結(jié)構(gòu)，而且病理切片用抗肺炎衣原體特異單克隆抗體處理后呈陽性。也有資料表明肺炎衣原體的慢性感染及其所形成的免疫復(fù)合物對(duì)冠狀動(dòng)脈的損害，可能是引起冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病病理改變的一個(gè)重要因素之一，但尚需進(jìn)一步證實(shí)。 肺炎衣原體在激發(fā)哮喘中亦可能發(fā)揮作用。 在肺癌、支氣管擴(kuò)張患者中CP的檢出率也相對(duì)較高。 CP感染的患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)大多正常，胸片無特異性，多為單側(cè)下葉浸潤，表現(xiàn)為節(jié)段性肺炎，嚴(yán)重者呈廣泛雙側(cè)肺炎。 二 肺炎衣原體檢測的方法學(xué)討論及熒光探針PCR檢測CPDNA的意義 肺炎衣原體是嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生，必需在活的細(xì)胞內(nèi)才能生長，所以培養(yǎng)條件要求更高也更不容易，一般采用HEp2t和Hela細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)，再用熒光特異性單克隆抗體來鑒定細(xì)胞培養(yǎng)中的肺炎衣原體，但是這種方法周期長，檢出率低，并不適應(yīng)于臨床檢測。 血清學(xué)方法檢測肺炎衣原體特異性抗體，微量免疫熒光（MIF）試驗(yàn)檢測肺炎衣原體較為敏感。凡雙份血清抗體滴度增高4倍或以上；或單位血清特異性IgM抗體≥ 1：16或IgG抗體≥1：512，有一定的診斷價(jià)值。 分子生物學(xué)檢測，采用限限制性內(nèi)切酶Pst I 對(duì)肺炎衣原體的DNA進(jìn)行酶切后，可獲得一條474bp的DNA片段，而沙眼衣原體和鸚鵡熱衣原體卻沒有這種DNA片段。實(shí)際上由于標(biāo)本中病原體的數(shù)目很少，酶切的方法往往是在細(xì)胞培養(yǎng)或PCR擴(kuò)增后進(jìn)行。但是酶切方法由于成本較高且操作復(fù)雜，并不適用于臨床檢測。 近年來發(fā)展起來的熒光探針PCR方法，直接擴(kuò)增患者痰液、鼻洗液、咽拭子或支氣管洗液等標(biāo)本中（取材用深部痰液，小兒用吸痰器吸取深部痰液效果最好，用鼻咽拭子需要在上腭懸雍垂后部涂擦取分泌物拭子）肺炎衣原體的特異性核酸片段，操作簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)，同時(shí)避免了常規(guī)PCR技術(shù)操作復(fù)雜和擴(kuò)增產(chǎn)物污染帶來的假陽性等問題，被迅速應(yīng)用于肺炎衣原體感染的臨床檢測。同樣熒光探針PCR檢測還可用于觀察肺炎衣原體感染的治療效果，有效治療后，標(biāo)本中CPDNA的拷貝數(shù)會(huì)相應(yīng)地下降或轉(zhuǎn)陰。肺炎支原體(MP)一 肺炎支原體(mycoplasma pneumonia，MP)感染 在正常人和動(dòng)物的上呼吸道分泌物中可分離出多種支原體，說明絕大多數(shù)支原體構(gòu)成人和動(dòng)物的正常菌群。而目前所能確定引起人類呼吸道感染性疾病的也只有肺炎支原體，主要引起人類支原體肺炎。 MP主要引起呼吸道外源性感染，一般通過飛沫傳播，一個(gè)四季均可發(fā)病，但多發(fā)生在夏末秋初季節(jié)，以1～15歲人群發(fā)病率較高，占小兒肺炎的20%左右，在人口密集場所或區(qū)域可達(dá)50%。嬰幼兒發(fā)病率最高，占25～69%，病情嚴(yán)重者可發(fā)生死亡。 MP感染主要引起支原體肺炎，其病變?yōu)橥|(zhì)性肺炎，亦可合并支氣管肺炎，故曾稱為原發(fā)性非典型性肺炎。潛伏期約為2～3w，臨床癥狀有不規(guī)則發(fā)燒，體溫可達(dá)39℃，熱程在1～3w左右。臨床癥狀輕重不一，主要表現(xiàn)為頭痛，刺激性咳嗽。嬰幼兒病情較重，發(fā)病急，病程長，以呼吸困難為主，主要癥狀一般在10d后減輕，由于局部炎癥導(dǎo)致的咳嗽持續(xù)時(shí)間較長，并引起支氣管壁肥厚。 支原體肺炎約占非細(xì)菌性肺炎的1/3以上，或各種原因引起的肺炎的10%。MP感染與小兒支氣管炎哮喘密切相關(guān)。 除支原體肺炎外，尚可引起肺外感染，咽喉炎、鼻炎、中耳炎、氣管炎和支氣管炎等。 實(shí)驗(yàn)室檢查周圍血白細(xì)胞一般正?；蛴休p度增多。 胸部X線改變多種多樣，最常見的是兩肺下葉片狀支氣管肺炎。二 肺炎支原體檢測的方法學(xué)討論及熒光探針PCR檢測MPDNA的意義 肺炎支原體可從咳痰或咽拭子中培養(yǎng)出來，培養(yǎng)條件要求較高，分離和鑒定需1～2w，許多醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室無法做此項(xiàng)檢查，且周期太長，陽性率低，因此對(duì)臨床幫助不大。 普通染色法不易著色。由于沒有細(xì)胞壁，具有較大的可塑性,呈現(xiàn)高度的多態(tài)性，形態(tài)學(xué)方法難以鑒別。 冷凝集試驗(yàn)，僅有50%左右患者出現(xiàn)陽性，且此反應(yīng)為非特異性，呼吸道合胞病毒感染、腮腺炎、流感等也可出現(xiàn)冷疑集素效價(jià)的升高，故只能做為輔助診斷。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，免疫熒光法、金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法等都是用血清學(xué)水平檢測抗體，IgG(+)不能區(qū)分既往感染與現(xiàn)癥感染，IgM(+)的出現(xiàn)是急性近期感染的標(biāo)志，有一定的診斷價(jià)值，有報(bào)道顯示IgM的陽性率不過30%，IgM()并不能排除MP感染。 近年來有應(yīng)用單克隆抗體采用ELISA雙抗體夾心法檢測支原體肺炎患者的痰、鼻洗液和支氣管洗液中的42kDa多肽或190kDa P1蛋白抗原的報(bào)道。實(shí)際上，這些標(biāo)本中病原體抗原的含量極微，不易檢出，使得直接檢測蛋白抗原的方法應(yīng)用受限。 熒光探針PCR通過直接擴(kuò)增痰液、鼻洗液、咽拭子或支氣管洗液等標(biāo)本中（取材用深部痰液，小兒用吸痰器吸取深部痰液效果最好,用鼻咽拭子需要在上腭懸雍垂后部涂擦取分泌物拭子） 肺炎支原體核酸，具有快速、敏感度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，為支原體的檢測和實(shí)驗(yàn)研究開辟了一個(gè)廣闊的前景。 熒光探針PCR檢測還可用于觀察肺炎支原體感染的治療效果，據(jù)報(bào)道，有效治療2～3w后，PCR檢測可全部轉(zhuǎn)陰。淋病奈瑟菌(NG)一 淋病奈瑟菌(neisseria gonorrhoeae，NG)感染 淋病奈瑟菌俗稱淋球菌，是人類淋病的病原菌，人是淋球菌的唯一宿主。 淋球菌主要通過性接觸傳播，侵入尿道和生殖道，其潛伏期為2～5d，引起人類泌尿生殖系統(tǒng)黏膜的急性或慢性化膿性感染，是我國目前流行的發(fā)病率最高的性傳播病癥，也是導(dǎo)致不育原因之一。 成人感染初期，一般引起男性前尿道炎，女性尿道炎與子宮頸炎?；颊甙Y狀為：尿痛、尿頻、尿道流膿、宮頸可見膿性分泌物等。如進(jìn)一步擴(kuò)散到生殖系統(tǒng)，引起慢性感染，如男性發(fā)生前列腺炎，精囊，精索炎和附睪炎；女性出現(xiàn)前庭大腺炎和盆腔炎等。母親患有淋球性陰道炎時(shí)或子宮頸炎時(shí)，嬰兒出生時(shí)易患上淋球菌性結(jié)膜炎。 人對(duì)淋球菌感染無天然抵抗力，多數(shù)患者可以自愈，并出現(xiàn)特異IgG、IgM、IgA，但是免疫不持久，再感染和慢性患者普遍存在。 目前，淋病的發(fā)病趨勢為高收入階層發(fā)病下降，普通收入階層發(fā)病率增加，大城市人口感染逐漸下降，中小城市人口感染增加，淋病從城市走向農(nóng)村，農(nóng)村病人增多。 由于病人多隱瞞病史(接觸史)，給診斷帶來困難，延誤治療。二 淋球菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷及熒光探針定量檢測NGDNA的意義 （一）涂片：將患者膿性分泌物涂片，革蘭氏染色后鏡檢，如在中性粒細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)有革蘭氏陰性雙球菌時(shí)，結(jié)合臨床癥狀和病史（接觸史），有診斷價(jià)值。涂片法對(duì)于典型的男性淋病患者，檢出率較高，但是對(duì)于女性患者，由于其分泌物中脫落細(xì)胞和抗酸桿菌等間雜其中，使得背景難以辨認(rèn)，檢出率很低，容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。 （二）培養(yǎng)：標(biāo)本在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可出現(xiàn)典型菌落。氧化酶試驗(yàn)陽性。取典型菌落作細(xì)菌涂片可見到革蘭陰性雙球菌，即可診斷。但是淋球菌抵抗力極弱，離開宿主后很容易死亡，不容易分離培養(yǎng)成功。 （三）熒光探針PCR技術(shù)直接對(duì)可疑患者分泌物中的淋球菌DNA進(jìn)行基因擴(kuò)增，可在短時(shí)間內(nèi)快速、準(zhǔn)確地直接從臨床各種標(biāo)本中檢出含量極低的病原菌。對(duì)女性疑似淋球菌引起的各種炎癥的診斷及鑒別診斷起決定性作用；對(duì)男性疑似淋球菌引起的各種炎癥的診斷和鑒別診斷有著重要意義。 （四）在淋球菌的傳播中，癥狀輕者或無癥狀的淋球菌感染者是更重要的傳染源，熒光探針PCR檢測的優(yōu)勢還在于可對(duì)這一部分患者做到早期診斷和鑒別診斷，對(duì)預(yù)防和治療性病意義重大。 （五）同樣，淋球菌DNA檢測也可用于療效考核。有效的抗菌治療后，標(biāo)本中淋球菌DNA拷貝數(shù)會(huì)相應(yīng)下降，在治愈后轉(zhuǎn)陰。解脲脲原體(UU)一 解脲脲原體（ureaplasma urealyticum，UU）感染 解脲脲原體又叫解脲支原體、溶脲脲原體，是支原體的一種，因?yàn)槟軌蚝铣赡蛩孛阜纸饽蛩囟，F(xiàn)已明確解脲脲原體是引起性傳播疾病的病原體之一。解脲脲原體的主要致病原因是掠奪宿主細(xì)胞膜固醇等脂類營養(yǎng)，分解尿素，產(chǎn)生大量毒性代謝產(chǎn)物氨類，損害細(xì)胞，并可促進(jìn)局部形成結(jié)石。 在非淋球菌性尿道炎中，除衣原體外，解脲脲原體的感染占第二位，有30～40%的男性尿道炎是由解脲脲原體感染所致。解脲脲原體可形成繼發(fā)感染，也是一些淋病患者治愈后仍有后遺癥的原因之一。 大量的研究證明解脲脲原體與自然流產(chǎn)、先天缺陷、死胎和不孕癥有關(guān)。自然流產(chǎn)1～8次婦女的宮頸分泌物或流產(chǎn)胎兒組織解脲脲原體的檢出率為68%，其中流產(chǎn)超過4次以上者檢出率高達(dá)80%，%。國內(nèi)對(duì)2181例不孕患者研究報(bào)道，解脲脲原體檢出率明顯高于對(duì)照組。%，%，說明不孕癥與解脲脲原體感染高度相關(guān)。 解脲脲原體感染除引起男性非淋性尿道炎、前列腺炎、附睪炎外，還被認(rèn)為與男性不育相關(guān)，男性不育患者精液中，%。檢出率隨精子數(shù)減少和精子活動(dòng)力下降而升高。 有研究證明解脲脲原體引起不孕癥的原因可能是：①吸附于精子表面，阻礙精子運(yùn)動(dòng)；②產(chǎn)生神經(jīng)氨酸酶樣物質(zhì)，干擾卵子與精子的結(jié)合；③解脲脲原體與精子有共同抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體對(duì)精子造成損傷。二 熒光探針定量PCR方法檢測UUDNA的意義 對(duì)UU感染的病原學(xué)診斷通?？捎煤啽愕呐囵B(yǎng)法和免疫熒光抗體來檢測，但陽性率偏低，而且費(fèi)時(shí)。培養(yǎng)法檢測是利用脲原體能合成尿素酶分解尿素產(chǎn)生氨，使液體培養(yǎng)基pH值增高，酚紅指示劑變色。一些非致病的脲原體或培養(yǎng)過程中的污染都可能導(dǎo)致假陽性的結(jié)果。熒光探針定量PCR方法通過直接檢測可疑患者生殖道分泌物或尿液中的UUDNA，具有高度的敏感性和特異性，提高了陽陽性檢出率。 病原體的診斷只是為臨床提供某種依據(jù)，而病原體感染后的發(fā)病時(shí)間和病情輕重均與病原體數(shù)量有關(guān)，這就要求定量結(jié)果。熒光探針定量PCR不僅可以對(duì)病原體的感染進(jìn)行診斷，還可以通過檢測用藥前后病人UUDNA拷貝數(shù)的變化監(jiān)控病情發(fā)展。有報(bào)道顯示，對(duì)解脲脲原體感染患者治療2w后復(fù)查，陽性患者UUDNA水平拷貝數(shù)有明顯下降，%，治療3w后復(fù)查，則轉(zhuǎn)陰率達(dá)76%，提示UU對(duì)目前臨床常用于治療性病的抗生素有一定的耐藥性，應(yīng)持續(xù)治療3w以上。采用熒光探針定量PCR檢測UUDNA，具有快速、特異性高、定量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，避免盲目用藥，即減少病人痛苦，縮短病程，又減輕了病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，可以為臨床評(píng)價(jià)療效提供依據(jù)。沙眼衣原體(CT)一 沙眼衣原體(chlamydia trachomatis, CT)感染 沙眼衣原體嚴(yán)格寄生在細(xì)胞內(nèi)，具有獨(dú)特的發(fā)育周期。不僅可致眼部和肺部的感染，也是性傳播疾病的主要病原體。近年來在歐美等國，沙眼衣原體的感染率和危害性，已超過淋球菌而居性傳播疾病之首。在我國，在非淋球菌性尿道炎中，沙眼衣原體的感染居首位。 沙眼衣原體侵入機(jī)體后主要在粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)繁殖，且抑制宿主細(xì)胞代謝。衣原體在繁殖過程中產(chǎn)生的毒性代謝產(chǎn)物可引起細(xì)胞毒性反應(yīng)及變態(tài)反應(yīng)，造成病理損傷。 沙眼衣原體感染后機(jī)體免疫反應(yīng)不強(qiáng)，維持時(shí)間短，易形成隱匿性感染，往往可反復(fù)感染。所引起的泌尿生殖系感染對(duì)男性來說主要是尿道炎，未經(jīng)治療的男性患者多數(shù)轉(zhuǎn)變成慢性感染，周期性加重，或合并附睪炎和前列腺炎。在女性，可引起尿道炎、宮頸炎、嚴(yán)重者可并發(fā)輸卵管炎及盆腔炎，妨礙妊娠并可導(dǎo)致生殖能力的損害。圍產(chǎn)期母兒傳播可致新生兒肺炎，沙眼衣原體母兒傳播率高達(dá)30%—70%。 CT引起的泌尿生殖道感染常合并淋球菌的混合感染，淋球菌對(duì)衣原體的繁殖有激活和刺激作用。二 沙眼衣原體檢測的方法學(xué)討論及熒光探針PCR檢測CTDNA的意義 目前沙眼衣原體的診斷由于受經(jīng)濟(jì)等因素的影響限制，大部分醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室多采用金標(biāo)法或ELISA法檢測沙眼衣原體的相應(yīng)抗體，雖然具有