熒光定量pcr的原理及應用(編輯修改稿)
2025-06-17 14:14 本頁面
【文章內容簡介】 Excitation Q Excitation 雙標記探針（ Taqman Probe） 優(yōu)點： ?對目標序列有很高的特異性，在病原微生物特異性檢測上有獨特優(yōu)勢 ?設計簡單，準確性好 缺點： 只適合于一種特異目標的檢測，相對價格略高 雙標記探針（ Taqman Probe） 熒光定量 PCR實驗技術路線 ?查詢目的基因序列 ?選擇合適的熒光標記方法 選染料法則購買 SyBr Green I或相應試劑盒；探針法則設計并合成熒光探針 ? 設計特異引物或探針 引物設計的一般原則： ?產(chǎn)物長度在 80300bp之間 ?產(chǎn)物 GC含量在 5060%之間 ?引物的 GC含量在 5060%之間，熔解溫度在 5565℃ 之間 ?應避免引物中有連續(xù)的 G或 C，但推薦在引物的末端含有 G或 C Primer nceWarning=True 熒光定量 PCR實驗技術路線 ? 實驗時先對普通 PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，在條帶特異的情況下才能采用染料法進行熒光定量 PCR實驗 ? 注意 ? 模板濃度：在普通 PCR基礎上可以稀釋 10~100倍 ? 引物濃度： ~ 181。M （一般略低于 PCR引物量） ? 熒光物質濃度：按說明書操作，根據(jù)實驗結果優(yōu)化 ? 加樣準確性：避免微小加樣 熒光定量 PCR實驗技術路線 ? 模板
高考資料相關推薦
鄂ICP備17016276號-1