熒光定量pcr的原理及應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-06-17 14:14 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 Excitation Q Excitation 雙標(biāo)記探針（ Taqman Probe） 優(yōu)點(diǎn)： ?對(duì)目標(biāo)序列有很高的特異性，在病原微生物特異性檢測(cè)上有獨(dú)特優(yōu)勢(shì) ?設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性好 缺點(diǎn)： 只適合于一種特異目標(biāo)的檢測(cè)，相對(duì)價(jià)格略高 雙標(biāo)記探針（ Taqman Probe） 熒光定量 PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線 ?查詢目的基因序列 ?選擇合適的熒光標(biāo)記方法 選染料法則購買 SyBr Green I或相應(yīng)試劑盒；探針法則設(shè)計(jì)并合成熒光探針 ? 設(shè)計(jì)特異引物或探針 引物設(shè)計(jì)的一般原則： ?產(chǎn)物長(zhǎng)度在 80300bp之間 ?產(chǎn)物 GC含量在 5060%之間 ?引物的 GC含量在 5060%之間，熔解溫度在 5565℃ 之間 ?應(yīng)避免引物中有連續(xù)的 G或 C，但推薦在引物的末端含有 G或 C Primer nceWarning=True 熒光定量 PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線 ? 實(shí)驗(yàn)時(shí)先對(duì)普通 PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在條帶特異的情況下才能采用染料法進(jìn)行熒光定量 PCR實(shí)驗(yàn) ? 注意 ? 模板濃度：在普通 PCR基礎(chǔ)上可以稀釋 10~100倍 ? 引物濃度： ~ 181。M （一般略低于 PCR引物量） ? 熒光物質(zhì)濃度：按說明書操作，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果優(yōu)化 ? 加樣準(zhǔn)確性：避免微小加樣 熒光定量 PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線 ? 模板
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