pcr常見問題、原因分析及其對策(編輯修改稿)
2024-08-13 16:30 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 構(gòu)建基因圖譜 ? 復(fù)雜模板擴增 － GC含量高 －二級結(jié)構(gòu) 高保真 ＋ 高擴增效率 特 點 產(chǎn) 品 性 能 高擴增效率 ?天為時代 ： Taq Plus ? TaKaRa： Ex TaqTM 復(fù)雜模板擴增 高保真 ?天為時代 ： Taq Platinum ? Invitrogen： Pfx Platinum Taq High Fidelity 保真度低于 Pfu聚合酶 但擴增效率較高 長片段擴增 ?天為時代 ： Long Taq ? TaKaRa： LA Taq ? Invitrogen： Elongase Amplificaiton System 特別適用于保真度較高的 超長片段擴增 PCR MasterMix 原 理 預(yù)配好的 PCR反應(yīng)液 DNA聚合酶 反應(yīng)緩沖液 dNTP PCR增強劑 PCR Master Mix 特 點 ? 快速簡便 減少加樣誤差和污染 ? 靈敏度高 可擴增低至 2個拷貝的目的模板 ? 特異性強 降低 PCR反應(yīng)的要求， 增強特異性 ? 穩(wěn)定性好 長期放臵活性無改變 適用范圍 ? 大規(guī)?；驒z測 ? 目的基因拷貝數(shù)極低的樣本 ? GC含量高 ,有二級結(jié)構(gòu)的模板 ? 復(fù)雜基因組樣本 ? 可直接檢測菌落 ， 基因點突變檢測 , 或者陽性克隆的篩選 。 PCR技術(shù)簡介 PCR常見問題、原因分析及其解決方案 提高 PCR反應(yīng)特異性的策略 PCR常見問題 ? 無擴增產(chǎn)物 ? 非特異性擴增 ? 拖尾 ? 假陽性 PCR常見問題之一 ? 無擴增產(chǎn)物 1. 模板 :含有抑制物，含量低 2. Buffer對樣品不合適 3. 引物設(shè)計不當(dāng)或者發(fā)生降解 4. 反應(yīng)條件： 退火溫度太高，延伸時間太短 原因 對 策
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