高效液相色譜法教程-資料下載頁
2025-05-09 02:20本頁面
【正文】 38 第七節(jié) 離子交換色譜法 離子交換色譜以離子交換樹脂為固定相，樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時，組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆交換，根據(jù)組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。 一、固定相 離子交換色譜常用的固定相為離子交換樹脂。目前常用的離子交換樹脂分為三種形式 ：一是常見的純離子交換樹脂；第二種是玻璃珠等硬芯子表面涂一層樹脂薄層構(gòu)成的表面層離子交換樹脂；第三種為大孔徑網(wǎng)絡型樹脂 。 39 第七節(jié) 離子交換色譜法 典型的離子交換樹脂是由苯乙烯和二乙烯苯交聯(lián)共聚而成。其中，二乙烯苯起到交聯(lián)和加牢整個結(jié)構(gòu)的作用，其含量決定了樹脂交聯(lián)度的大小。交聯(lián)度一般控制在 4 ~ 16%范圍內(nèi)，高度交聯(lián)的樹脂較硬而且脆，但選擇性較好。在基體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上引入各種不同酸堿基團作為可交換的離子基團。 按結(jié)合的基團不同，離子交換樹脂可分為陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂。 陽離子交換樹脂上具有與陽離子交換的基團。 陽離子交換樹脂又可分為強酸性和弱酸性樹脂 。強酸性陽離子交換樹脂所帶的基團為 SO3H+ ，其中 SO3和有機聚合物牢固結(jié)合形成固定部分， H+是可流動的能為其它陽離子所交換的離子。 40 第七節(jié) 離子交換色譜法 陰離子交換樹脂具有與樣品中陰離子交換的基團。 陰離子交換樹脂也可分為強堿性和弱堿性樹脂。 二、流動相 離子交換樹脂的流動相最常使用水緩沖溶液，有時也使用有機溶劑如甲醇或乙醇同水緩沖溶液混合使用，以提高特殊的選擇性，并改善樣品的溶解度。 41 第八節(jié) 排阻色譜法 排阻色譜法也稱空間排阻色譜或凝膠滲透色譜法，是一種根據(jù)試樣分子的尺寸進行分離的色譜技術(shù)。 排阻色譜的色譜柱的 填料是凝膠 ，它是一種表面惰性，含有許多不同尺寸的孔穴或立體網(wǎng)狀物質(zhì)。凝膠的孔穴僅允許直徑小于孔開度的組分分子進入，這些孔對于流動相分子來說是相當大的，以致流動相分子可以自由地擴散出入。對不同大小的組分分子，可分別滲入到凝膠孔內(nèi)的不同深度，大個的組分分子可以滲入到凝膠的大孔內(nèi)，但進不了小孔甚至于完全被排斥。小個的組分分子，大孔小孔都可以滲入，甚至進入很深，一時不易洗脫出來。因此，大的組分分子在色譜柱中停留時間較短，很快被洗脫出來，它的洗脫體積很 42 第八節(jié) 排阻色譜法 小，小的組分分子在色譜柱中停留時間較長，洗脫體積較大，直到所有孔內(nèi)的最小分子到達柱出口，完成按分子大小而分離的洗脫過程。 尺寸排阻色譜被廣泛應用于大分子的分級，即用來分析大分子物質(zhì)相對分子質(zhì)量的分布。 排阻色譜的固定相一般可分為 軟性、半剛性和剛性凝膠 三類。 所謂凝膠，指含有大量液體（一般是水）的柔軟而富有彈性的物質(zhì)，它是一種經(jīng)過交聯(lián)而具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體。 43 第八節(jié) 排阻色譜法 （ 1） 軟性凝膠 如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠都具有較小的交聯(lián)結(jié)構(gòu)，其微孔能吸入大量的溶劑，并能溶漲到它干體的許多倍。它們適用于水溶性作流動相，一般用于小分子質(zhì)量物質(zhì)的分析，不適宜在高效液相色譜中。 （ 2） 半剛性凝膠 如高交聯(lián)度的聚苯乙烯。常以有機溶劑作流動相。 （ 3） 剛性凝膠 如多孔硅膠、多孔玻璃等，它們既可用水溶性溶劑，又可用有機溶劑作流動相，可在較高壓強和較高流速下操作。 44 第九節(jié) 色譜分離方法的選擇 要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能多的 了解樣品的有關性質(zhì)，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點及其應用范圍 。 選擇色譜分離方法的主要根據(jù) 是樣品的相對分子質(zhì)量的大小，在水中和有機溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學結(jié)構(gòu)等物理、化學性質(zhì)。 一、相對分子質(zhì)量 對于相對分子質(zhì)量較低（一般在 200以下），揮發(fā)性比較好，加熱又不易分解的樣品，可以選擇氣相色譜法進行分析。相對分子質(zhì)量在 200 ~ 2021的化合物，可用液固吸附、液 液分配和離子交換色譜法。相對分子質(zhì)量高于 2021，則 45 第九節(jié) 色譜分離方法的選擇 可用空間排阻色譜法。 二、溶解度 水溶性樣品最好用離子交換色譜法和液液分配色譜法；微溶于水，但在酸或堿存在下能很好電離的化合物，也可用離子交換色譜法；油溶性樣品或相對非極性的混合物，可用液 固色譜法。 三、化學結(jié)構(gòu) 若樣品中包含離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物（例如配位體及有機螯合劑），可首先考慮用離子交換色譜，但空間排阻和液液分配色譜也 46 第九節(jié) 色譜分離方法的選擇 都能順利地應用于離子化合物；異構(gòu)體的分離可用液固色譜法；具有不同官能團的化合物、同系物可用液液分配色譜法；對于高分子聚合物，可用空間排阻色譜法。 47 色譜法基本要求 1. 掌握色譜法的分類，色譜流出曲線及有關術(shù)語； 2. 掌握色譜法的基本理論，了解柱效的影響因素； 3. 掌握分離度與柱效、選擇因子、容量因子、分析時間之間關系； 4. 了解定性、定量分析方法； 5. 掌握氣相色譜流程及氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)； 6. 掌握氣相色譜固定相的特性； 7. 掌握檢測器性能指標的描述方法； 8. 掌握液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及基本概念； 48 色譜法基本要求 9. 了解液相色譜法的主要類型及固定相、流動相的選擇。 。
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