高效液相色譜法教程-在線(xiàn)瀏覽
2025-07-12 02:20本頁(yè)面
【正文】 池，最后和洗脫液一起排入流出物收集器。色譜圖是定性、定量和評(píng)價(jià)柱效高低的依據(jù)。 溶劑貯存器一般由玻璃、不銹鋼或氟塑料制成，容量為 1到 2 L， 用來(lái)貯存足夠數(shù)量、符合要求的流動(dòng)相。由于液相色譜儀所用色譜柱徑較細(xì)，所填固定相粒度很小，因此，對(duì)流動(dòng)相的阻力較大，為了使流動(dòng)相能較快地流過(guò) 10 第二節(jié) 高效液相色譜儀 色譜柱，就需要高壓泵注入流動(dòng)相。此外，還應(yīng)耐腐蝕，密封性好。 恒流泵是能給出恒定流量的泵，其流量與流動(dòng)相粘度和柱滲透無(wú)關(guān)。 11 第二節(jié) 高效液相色譜儀 3. 梯度洗脫裝置 梯度洗脫 就是在分離過(guò)程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續(xù)改變它們之間的比例，從而使流動(dòng)相的強(qiáng)度、極性、 pH值或離子強(qiáng)度相應(yīng)地變化，達(dá)到提高分離效果，縮短分析時(shí)間的目的。 另一類(lèi)是 內(nèi)梯度裝置 （又稱(chēng)高壓梯度），將兩種溶劑分別用泵增壓后，按電器部件設(shè)置的程序，注入梯度混合室混 12 第二節(jié) 高效液相色譜儀 合，再輸至柱系統(tǒng)。它在液相色譜中所起的作用相當(dāng)于氣相色譜中的程序升溫，所不同的是，在梯度洗脫中溶質(zhì) k值的變化是通過(guò)溶質(zhì)的極性、 pH值和離子強(qiáng)度來(lái)實(shí)現(xiàn)的，而不是借改變溫度（溫度程序）來(lái)達(dá)到。 13 第二節(jié) 高效液相色譜儀 三、分離系統(tǒng) 分離系統(tǒng)包括色譜柱、恒溫器和連接管等部件。其內(nèi)徑為 2 ~ 6mm， 柱長(zhǎng)為 10 ~50cm， 柱形多為直形，內(nèi)部充滿(mǎn)微粒固定相。 四、檢測(cè)器 檢測(cè)器是液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一。 在液相色譜中，有兩種類(lèi)型的檢測(cè)器，一類(lèi)是 溶質(zhì)性檢 14 第二節(jié) 高效液相色譜儀 測(cè)器 ，它僅對(duì)被分離組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)。屬于此類(lèi)檢測(cè)器有示差折光檢測(cè)器等。 剛性固體以 二氧化硅 為基質(zhì)，可承受 ?108~?109Pa的高壓，可制成直徑、形狀、孔隙度不同的顆粒。 硬膠主要用于離子交換和尺寸排阻色譜中，它由 聚苯乙烯與二乙烯苯基交聯(lián)而成 。 固定相按 孔隙深度 分類(lèi)，可分為表面多孔型和全多孔型固定相 16 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動(dòng)相 兩類(lèi)。這類(lèi)固定相的多孔層厚度小 、 孔淺 ， 相對(duì)死體積小 ， 出峰迅速 、 柱效亦高；顆粒較大 ， 滲透性好 ， 裝柱容易 ， 梯度淋洗時(shí)能迅速達(dá)到平衡 ， 較適合做常規(guī)分析 。 2. 全多孔型固定相 由直徑為 10nm的硅膠微粒凝聚而成 。特別適合復(fù)雜混合物分離及痕量分析。對(duì)流動(dòng)相溶劑的要求是： （ 1）溶劑對(duì)于待測(cè)樣品，必須具有合適的極性和良好的選 擇性。對(duì)于紫外吸收檢測(cè)器，應(yīng)注意選 用檢測(cè)器波長(zhǎng)比 溶劑的紫外截止波長(zhǎng) 要長(zhǎng)。 對(duì)于折光率檢測(cè)器，要求選擇與組分折光率有較 大差別的溶劑作流動(dòng)相，以達(dá)到最高靈敏度。不純的溶劑會(huì)引起基線(xiàn)不穩(wěn)，或產(chǎn)生“偽 峰”。常 用的低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等；但粘度過(guò)低 的溶劑也不宜采用，例如戊烷和乙醚等，它們?nèi)菀自? 色譜柱或檢測(cè)器內(nèi)形成氣泡，影響分離。吸附劑是一些多孔的固體顆粒物質(zhì)，位于其表面的原子、離子或分子的性質(zhì)是多少不同于在內(nèi)部的原子、離子或分子的性質(zhì)的。因此，表層一般處于較高的能級(jí)，存在一些分散的具有表面活性的 吸附中心 。 吸附劑吸附試樣的能力，主要取決于吸附劑的比表面積和理化性質(zhì)，試樣的組成和結(jié)構(gòu)以及洗脫液的性質(zhì)等。從而使吸附色譜成為分離幾何異構(gòu)體的有效手段；不同的官能團(tuán)具有不同的吸附能，因此，吸附色譜可按族分離化合物。 一、液固色譜法固定相 液固色譜法采用的固體吸附劑按其 性質(zhì) 可分為 極性和非極性 兩種類(lèi)型。非極性吸附劑最常見(jiàn)的是活性炭。酸性吸附劑包括硅膠和硅酸鎂等，堿性吸附劑有氧化鋁、氧化 22 第四節(jié) 液 — 固色譜法 鎂和聚酰胺等。堿性吸附劑則適于分離酸性溶質(zhì)，如酚、羧和吡咯衍生物等。在現(xiàn)代液相色譜中，硅膠不僅作為液固吸附色譜固定相，還可作為液液分配色譜的載體和鍵合相色譜填料的基體。 （ 2）與固定相不互溶，也不發(fā)生不可逆反應(yīng)。 23 第四節(jié) 液 — 固色譜法 （ 4）應(yīng)與所用檢測(cè)器相匹配。 （ 5）容易精制、純化、毒性小，不易著火、價(jià)格盡量便宜 等。 為了獲得合適的溶劑極性，常采用兩種、三種或更多種不同極性的溶劑混合起來(lái)使用，如果樣品組分的分配比 k值范圍很廣則使用梯度洗脫。 在液液色譜中，一個(gè)液相作為流動(dòng)相，而另一個(gè)液相則涂漬在很細(xì)惰性載體或硅膠上作為固定相。分配色譜過(guò)程與兩種互不相溶的液體在一個(gè)分液漏斗中進(jìn)行的溶劑萃取相類(lèi)似。分配系數(shù)（ K） 或分配比（ k）小的組分，保留值小，先流出柱。 25 第五節(jié) 液液色譜法 一、固定相 液液色譜的固定相由載體和固定液組成。 （ 2）全多孔型載體，由硅膠、硅藻土等材料制成，直徑 30 ~ 50 ?m的多孔型顆粒。這種載體粒度為 5 ~ 10 ?m。 由于液相色譜中，流動(dòng)相參與選擇作用，流動(dòng)相極性的微小變化，都會(huì)使組分的保留值出現(xiàn)較大的差異。 如 ?， ?? — 氧二丙腈（ ODPN）， 聚乙二醇（ PEG）， 十八烷（ ODS） 和角鯊?fù)楣潭ㄒ旱取? 以極性物質(zhì)作為固定相，非極性溶劑作流動(dòng)相的液液色
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