【正文】 統(tǒng)包括色譜柱、恒溫器和連接管等部件。其內(nèi)徑為 2 ~ 6mm， 柱長為 10 ~50cm， 柱形多為直形，內(nèi)部充滿微粒固定相。 四、檢測器 檢測器是液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一。 在液相色譜中，有兩種類型的檢測器，一類是 溶質(zhì)性檢 14 第二節(jié) 高效液相色譜儀 測器 ，它僅對被分離組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)。屬于此類檢測器有示差折光檢測器等。 剛性固體以 二氧化硅 為基質(zhì)，可承受 ?108~?109Pa的高壓，可制成直徑、形狀、孔隙度不同的顆粒。 硬膠主要用于離子交換和尺寸排阻色譜中，它由 聚苯乙烯與二乙烯苯基交聯(lián)而成 。 固定相按 孔隙深度 分類，可分為表面多孔型和全多孔型固定相 16 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 兩類。這類固定相的多孔層厚度小 、 孔淺 ， 相對死體積小 ， 出峰迅速 、 柱效亦高；顆粒較大 ， 滲透性好 ， 裝柱容易 ， 梯度淋洗時能迅速達(dá)到平衡 ， 較適合做常規(guī)分析 。 2. 全多孔型固定相 由直徑為 10nm的硅膠微粒凝聚而成 。特別適合復(fù)雜混合物分離及痕量分析。對流動相溶劑的要求是： （ 1）溶劑對于待測樣品，必須具有合適的極性和良好的選 擇性。對于紫外吸收檢測器，應(yīng)注意選 用檢測器波長比 溶劑的紫外截止波長 要長。 對于折光率檢測器，要求選擇與組分折光率有較 大差別的溶劑作流動相，以達(dá)到最高靈敏度。不純的溶劑會引起基線不穩(wěn)，或產(chǎn)生“偽 峰”。常 用的低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等；但粘度過低 的溶劑也不宜采用，例如戊烷和乙醚等，它們?nèi)菀自? 色譜柱或檢測器內(nèi)形成氣泡，影響分離。吸附劑是一些多孔的固體顆粒物質(zhì)，位于其表面的原子、離子或分子的性質(zhì)是多少不同于在內(nèi)部的原子、離子或分子的性質(zhì)的。因此，表層一般處于較高的能級，存在一些分散的具有表面活性的 吸附中心 。 吸附劑吸附試樣的能力，主要取決于吸附劑的比表面積和理化性質(zhì)，試樣的組成和結(jié)構(gòu)以及洗脫液的性質(zhì)等。從而使吸附色譜成為分離幾何異構(gòu)體的有效手段；不同的官能團具有不同的吸附能，因此，吸附色譜可按族分離化合物。 一、液固色譜法固定相 液固色譜法采用的固體吸附劑按其 性質(zhì) 可分為 極性和非極性 兩種類型。非極性吸附劑最常見的是活性炭。酸性吸附劑包括硅膠和硅酸鎂等，堿性吸附劑有氧化鋁、氧化 22 第四節(jié) 液 — 固色譜法 鎂和聚酰胺等。堿性吸附劑則適于分離酸性溶質(zhì)，如酚、羧和吡咯衍生物等。在現(xiàn)代液相色譜中，硅膠不僅作為液固吸附色譜固定相，還可作為液液分配色譜的載體和鍵合相色譜填料的基體。 （ 2）與固定相不互溶，也不發(fā)生不可逆反應(yīng)。 23 第四節(jié) 液 — 固色譜法 （ 4）應(yīng)與所用檢測器相匹配。 （ 5）容易精制、純化、毒性小，不易著火、價格盡量便宜 等。 為了獲得合適的溶劑極性，常采用兩種、三種或更多種不同極性的溶劑混合起來使用，如果樣品組分的分配比 k值范圍很廣則使用梯度洗脫。 在液液色譜中，一個液相作為流動相，而另一個液相則涂漬在很細(xì)惰性載體或硅膠上作為固定相。分配色譜過程與兩種互不相溶的液體在一個分液漏斗中進(jìn)行的溶劑萃取相類似。分配系數(shù)（ K） 或分配比（ k）小的組分，保留值小，先流出柱。 25 第五節(jié) 液液色譜法 一、固定相 液液色譜的固定相由載體和固定液組成。 （ 2）全多孔型載體，由硅膠、硅藻土等材料制成，直徑 30 ~ 50 ?m的多孔型顆粒。這種載體粒度為 5 ~ 10 ?m。 由于液相色譜中，流動相參與選擇作用，流動相極性的微小變化，都會使組分的保留值出現(xiàn)較大的差異。 如 ?， ?? — 氧二丙腈（ ODPN）， 聚乙二醇（ PEG）， 十八烷（ ODS） 和角鯊?fù)楣潭ㄒ旱取? 以極性物質(zhì)作為固定相，非極性溶劑作流動相的液液色譜，稱為 正相分配色譜 ，適合于分離極性化合物； 反之，如選用非極性物質(zhì)為固定相，而極性溶劑為流動相的液液色譜稱為 反相分配色譜 ，這種色譜方法適合于分離芳烴、稠環(huán)芳烴及烷烴等化合物。盡管選用與固定液不互溶的溶劑作流動相，但在色譜過程中固定液仍會有微量溶解。 70年代初發(fā)展了一種新型的固定相 —化學(xué)鍵合固定相。這不僅避免了液體固定相流失的困擾，還大大改善了固定相的功能，提高了分離的選擇性，化學(xué)鍵合色譜適用于分離幾 29 第六節(jié) 化合鍵合色譜法 乎所有類型的化合物。在極性鍵合相色譜中，由于流動相的極性比固定相極性要小，所以極性鍵合相色譜屬于正相色譜。但通常所說的反相色譜系指非極性鍵合色譜。 一、化學(xué)鍵合固定相法 化學(xué)鍵合固定相一般都采用硅膠（薄殼型或全多孔微粒型）為基體。鍵合相可分為四種鍵型： （ 1）硅酸酯型（ =SiOC=） 鍵合相 將醇與硅膠表面的羥基進(jìn)行酯化反應(yīng)，在硅膠表面形成（ =SiOC=） 鍵合相。一般用極性小的溶劑洗脫，分離極性化合物。 31 第六節(jié) 化合鍵合色譜法 可用非極性或強極性的溶劑作為流動相。在這類固定相中，有機基團直接鍵合在硅膠表面上。這類鍵合相具有相當(dāng)?shù)哪蜔嵝院突瘜W(xué)穩(wěn)定性，是目前應(yīng)用最為廣泛的鍵合相。 目前，對于反相色譜的保留機制還沒有一致的看法，大致有兩種觀點：一種認(rèn)為屬于分配色譜，另一種認(rèn)為屬于吸附色譜。 吸附色譜的作用機制是把非極性的烷基鍵合相，看作是在硅膠表面上覆蓋了一層鍵合的十八烷基的“分子毛”，這種“分子毛”有強的 疏水特性 。另一方面，被分離物的極性部分受到極性流動相的作用，使它離開固定相，減少保留值，此即解締過程。 一般地，固定相的烷基配合基或分離分子中非極性部分 34 第六節(jié) 化合鍵合色譜法 的表面積越大，或者流動相表面張力及介電常數(shù)越大，則締合作用越強，分配比也越大，保留值越大。 三、正相鍵合色譜法 在正相色譜中，一般采用極性鍵合固定相，硅膠表面鍵合的是極性的有機基團， 鍵合相的名稱由鍵合上去的基團而定 。 流動相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機溶劑，如烴類溶劑，或其中加入一定量的極性 35 第六節(jié) 化合鍵合色譜法 溶劑（如氯仿、醇、乙腈等）