高效液相色譜法ppt課件-在線瀏覽
2025-04-10 11:26本頁面
【正文】 ▲活塞向里移動(dòng)時(shí)，入口單向閥關(guān)閉，出口單向閥打開，流動(dòng)相被壓出活塞缸，流向色譜柱。偏心凸輪短半徑端對(duì)應(yīng)的活塞向外伸，使該活塞的下單向閥打開吸入流動(dòng)相，同時(shí)，半徑端所對(duì)應(yīng)的另一活塞被推入，使其上單向閥打開，并將流動(dòng)相送至色譜柱。 不必使用消除脈沖的阻尼器，避免了阻尼器的壓力消耗，但缺點(diǎn)是設(shè)備成本較高，流量調(diào)節(jié)也比單活塞泵復(fù)雜?；钊c油接觸，當(dāng)活塞往復(fù)運(yùn)動(dòng)時(shí)，隔膜受到油壓的作用，對(duì)流動(dòng)相部分產(chǎn)生“吸引”或“推壓”，使流動(dòng)相部分的單向閥吸液或排液，從而獲得穩(wěn)定的液流。 隔膜泵的活塞不直接與流動(dòng)相接觸，故不存在活塞密封墊磨損對(duì)流動(dòng)相的污染。隔膜泵的缺點(diǎn)是結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，價(jià)格較貴，和單活塞機(jī)械往復(fù)泵一樣，也產(chǎn)生脈沖，也需要配置阻尼裝置來消除脈沖。 圖 85 梯度洗脫裝置 在進(jìn)行多成分的復(fù)雜樣品的分離時(shí)，經(jīng)常會(huì)碰到前面的一些成分分離不完全，而后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰型較差。 1. 為什么要進(jìn)行梯度洗脫？ 在液相色譜中流速（壓力）梯度和溫度梯度效果不大，而且還會(huì)帶來一些不利影響，因此，液相色譜中通常所說的梯度洗脫是指流動(dòng)相梯度，即在分離過程中改變流動(dòng)相的組成或濃度。 梯度洗脫時(shí)，流動(dòng)相的輸送就是要將幾種組成的溶液混合后送到分離系統(tǒng)，因此，梯度洗脫裝置就是解決溶液的混合問題，其主要部件除高壓泵外，還有混合器和梯度程序控制器。 ? 高壓梯度 ： 一般只用于二元梯度，即用兩個(gè)高壓泵分別按設(shè)定的比例輸送 A和 B兩種溶液至混合器，混合器是在泵之后，即兩種溶液是在高壓狀態(tài)下進(jìn)行混合的。 使用了兩臺(tái)高壓輸液泵，使儀器價(jià)格變得更昂貴，故障率也相對(duì)較高，而且只能實(shí)現(xiàn)二元梯度操作。比例閥在泵在常壓（低壓）下混合，混合往往容易形成氣泡，所以低壓梯度通常配置在線脫氣裝置。多元梯度泵的流路可以部分空置。 密封性好，死體積小，重復(fù)性好，進(jìn)樣時(shí)引起色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動(dòng)要很小。 特點(diǎn) 色譜柱 構(gòu)成 色譜填料 色譜柱管 色譜柱 圖 88 在硬臺(tái)面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入 50100mg填料，然后垂直臺(tái)面墩 1020次。 圖 89 2. 色譜柱的填充 干法填充 濕法填充 常稱作載體或擔(dān)體，通常制備成數(shù)微米至數(shù)十微米粒徑的球形顆粒，它具有一定的剛性，能承受一定的壓力，對(duì)分離不起明顯的作用，只是作為功能基團(tuán)的載體。 3. 填料的結(jié)構(gòu) 基質(zhì) 是通過化學(xué)或物理的方法固定在基質(zhì)表面的、對(duì)樣品分子的保留起實(shí)質(zhì)作用的有機(jī)分子或功能團(tuán)。 ? 微孔型（或凝膠型） ? 大孔型（全多孔型） ? 薄殼型 ? 表面多孔型 圖 811 3. 填料的物理結(jié)構(gòu) 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)與自動(dòng)控制單元 又稱色譜工作站。一些配置了積分儀或記錄儀的老型號(hào)液相色譜儀在很多實(shí)驗(yàn)室還在使用，但近年新購置的色譜儀，一般都帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，使用非常方便。也有的色譜儀沒有設(shè)計(jì)專門的控制單元，而是每個(gè)單元分別通過控制部件與計(jì)算機(jī)相連，通過計(jì)算機(jī)分別控制儀器的各部分。 固定相通常是活性硅膠、氧化鋁、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固體吸附劑。流動(dòng)相溶劑在吸附劑表面形成單分子或雙分子吸附層，當(dāng)樣品分子進(jìn)入色譜柱，樣品主要靠氫鍵結(jié)合力吸附到硅羥基上，與流動(dòng)相分子競爭吸附點(diǎn)。因?yàn)椴煌臉悠贩肿釉诠潭ㄏ啾砻娴奈侥芰Σ煌?，因而吸?解吸的速度不同，被洗脫的時(shí)間也就不同，使得各組分相互分離。由于硅羥基活性點(diǎn)在硅膠表面常按一定幾何規(guī)律排列，因此吸附色譜用于結(jié)構(gòu)異構(gòu)體分離和族分離仍是最有效的方法。 （一）分配色譜 原理 基于樣品分子在流動(dòng)相和固定相間的溶解度不同 鍵合固定相 以化學(xué)鍵合將功能分子結(jié)合到惰性載體上。 正相 HPLC 由極性固定相和非極性流動(dòng)相所組成的 HPLC體系 。樣品分子與固定相之間不存在相互作用力（吸附、分配和離子交換等）。比固定相孔徑小的分子進(jìn)入孔內(nèi)而產(chǎn)生保留，溶質(zhì)分子體積越小，進(jìn)入固定相孔內(nèi)的機(jī)率越大，停留（保留）的時(shí)間也就越長 圖 812 原理 ◆ 固定相 ： 化學(xué)惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝膠、親水凝膠、無機(jī)多孔材料。 ◆ 凝膠過濾色譜（ gel filtration chromatography, GFC）： 以水或緩沖溶液作流動(dòng)相的凝膠色譜法。 ◆ 凝膠滲透色譜（ gel permeation ch
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