高效液相色譜法教程-文庫吧資料
2025-05-17 02:20本頁面
【正文】 譜中應用最為廣泛。弱極性鍵合相既可作為正相色譜，也可作為反相色譜。 根據(jù)鍵合相與流動相之間相對極性的強弱，可將鍵合相色譜分為極性鍵合相色譜和非極性鍵合相色譜 。這種固定相是 通過化學反應把各種不同的有機基團鍵合到硅膠（載體）表面的游離羥基上 ，代替機械涂漬的液體固定相。以及流動相經(jīng)過色譜柱的機械沖擊，固定相會不斷流失，即使將流動相預先用固定相液體飽和或在色譜柱前加一個前置柱，使流動相先通過前置柱，再進入色譜柱，但仍難以完全避免固定液的流失。 28 第六節(jié) 化學鍵合相色譜 將固定液機械地涂漬在擔體上組成固定相。 二、流動相 在液液色譜中，除一般要求外，還要求流動相對固定相的溶解度盡可能小， 因此固定液和流動相的性質(zhì)往往處于兩 個極端 ，例如當選擇固定液是極性物質(zhì)時，所選用的流動相 27 第五節(jié) 液液色譜法 通常是極性很小的溶劑或非極性溶劑。因此，液相色譜中，只需幾種不同極性的固定液即可。 由于顆粒小， 26 第五節(jié) 液液色譜法 所以柱效高，是目前使用最廣泛的一種載體。 （ 3）全多孔型微粒載體，由 nm級的硅膠微粒堆積而成，又稱堆積硅珠。常用的載體有下列幾類： （ 1）表面多孔型載體（薄殼型微珠載體），由直徑為 30 ~ 40?m的實心玻璃球和厚度約為 1 ~ 2 ?m的多孔性外層所組成。然而與氣相色譜法不同的是，流動相的種類對分配系數(shù)有較大的影響。 以氣液分配色譜法一樣，這種分配平衡的總結果導致各組分的 差速遷移 ，從而實現(xiàn)分離。流動相與固定相應互不相溶，兩者之間應有一明顯的分界面。 24 第五節(jié) 液液色譜法 液液色譜又稱液液分配色譜。 在液 固色譜中，選擇流動相的 基本原則 是 極性大的試樣用極性較強的流動相，極性小的則用低極性流動相 。例如利用紫外檢測器時，溶 劑要不吸收紫外光。 （ 3）粘度要盡可能小，這樣才能有較高的滲透性和柱效。 三、液 固吸附色譜流動相 液相色譜的流動相必須符合下列要求： （ 1）能溶解樣品，但不能與樣品發(fā)生反應。 各種吸附劑中， 最常用的吸附劑是硅膠，其次是氧化鋁 。酸性吸附劑適于分離堿，如脂肪胺和芳香胺。 極性吸附劑可進一步分為 酸性吸附劑和堿性吸附劑 。極性吸附劑包括硅膠、氧化鋁、氧化鎂、硅酸鎂、分子篩及聚酰胺等。吸附色譜對同系物沒有選擇性（即對分子量的選擇性?。?，不能用該法分離分子量不同的化合物。組分與吸附劑的性質(zhì)相似時，易被吸附，呈現(xiàn)高的保留值；當組分分子結構與吸附劑表面活性中心的剛性幾何結構相適應時， 21 第四節(jié) 液 — 固色譜法 易于吸附。因此，液固色譜法是根據(jù)各組分在固定相上的吸附能力的差異進行分離，故也稱為液固吸附色譜。表層的鍵因缺乏覆蓋層結構而受到擾動。 20 第四節(jié) 液 — 固色譜法 液固色譜的固定相是固體吸附劑。 19 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 （ 4）化學穩(wěn)定性好 （ 5）低粘度（粘度適中） 若使用高粘度溶劑，勢必增高壓力，不利于分離。 （ 3）高純度 由于高效液相色譜靈敏度高，對流動相溶劑的純度也 要求高。所謂溶劑 18 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 的紫外截止波長指當小于截止波長的輻射通過溶劑時， 溶劑對此輻射產(chǎn)生強烈吸收，此時溶劑被看作是光學不 透明的，它嚴重干擾組分的吸收測量。 （ 2）溶劑與檢測器匹配。 二、流動相 由于高效液相色譜中流動相是液體，它對組分有親合力，并參與固定相對組分的競爭，因此，正確選擇流動相直接影響組分的分離度。 這類固定相由于顆 17 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 粒很細（ 5~10?m）， 孔仍然較淺，傳質(zhì)速率快，易實現(xiàn)高效、高速。 由于多孔層厚度薄 ，最大允許量受到限制 。 1. 表面多孔型固定相 它的基體是實心玻璃球 ， 在玻璃球外面覆蓋一層多孔活性材料 ， 如硅膠 、 氧化硅 、 離子交換劑 、 分子篩 、 聚酰胺等 ?？沙惺軌毫ι舷逓??108Pa。如果在二氧化硅表面鍵合各種官能團，可擴大應用范圍，它是目前最廣泛使用的一種固定相。 15 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 一、固定相 高效液相色譜固定相 以承受高壓能力 來分類，可分為 剛性固體和硬膠 兩大類。屬于此類檢測器的有紫外、熒光、電化學檢測器等；另一類是總體檢測器 ，它對試樣和洗脫液總的物理和化學性質(zhì)響應。對檢測器的要求是： 靈敏度高，重復性好、線性范圍寬、死體積小以及對溫度和流量的變化不敏感等 。柱溫一般為室溫或接近室溫。色譜柱一般用內(nèi)部拋光的不銹鋼制成。 二、進樣系統(tǒng) 進樣系統(tǒng)包括進樣口、注射器和進樣閥等，它的作用是把分析試樣有效地送入色譜柱上進行分離。 梯度洗脫的實質(zhì) 是通過不斷地變化流動相的強度，來調(diào)整混合樣品中各組分的 k值，使所有譜帶都以最佳平均 k值通過色譜柱。 梯度洗脫裝置分為兩類： 一類是 外梯度裝置 （又稱低壓梯度），流動
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