高效液相色譜法ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-02-27 11:26本頁(yè)面
【正文】 陣列（或 CCD陣列，硅靶攝像管等）作為檢測(cè)元件的 UVVIS檢測(cè)器。 很多有機(jī)分子都具紫外或可見(jiàn)光吸收基團(tuán)，有較強(qiáng)的紫外或可見(jiàn)光吸收能力，因此 UVVIS檢測(cè)器既有較高的靈敏度，也有很廣泛的應(yīng)用范圍。離子對(duì)色譜也可采用正相色譜的模式，即可以用硅膠柱，但不如反相色譜效果好，多數(shù)情況下采用反相色譜模式，所以也常稱反相離子對(duì)色譜。 圖 814 2離子排斥色譜法 離子對(duì)色譜 (IPC)也稱離子相互作用色譜，是在流動(dòng)相中加入適當(dāng)?shù)木哂信c被測(cè)離子相反電荷的離子，即 離子對(duì)試劑 ，使之與被測(cè)離子形成中性的離子對(duì)化合物，此離子對(duì)化合物在反相色譜柱上被保留。 圖 813 1離子交換色譜法 ICE的分離機(jī)理是以樹(shù)脂的Donnan排斥為基礎(chǔ)的分配過(guò)程。 （三）離子色譜 （ ion chromatography, IC） IEC使用的是低交換容量的離子交換劑，這種交換劑的表面有離子交換基團(tuán)。主要適合于脂溶性高分子的分離。主要適合于水溶性高分子的分離。 ◆ 流動(dòng)相： 在凝膠色譜中，流動(dòng)相的作用不是為了控制分離，而是為了溶解樣品或減小流動(dòng)相粘度。比固定相孔徑大的溶質(zhì)分子不能進(jìn)入孔內(nèi)，迅速流出色譜柱，不能被分離。 反相 HPLC 非極性固定相和極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系 （二）凝膠色譜 （ gel chromatography） 以多孔性物質(zhì)作固定相，樣品分子受固定相孔徑大小的影響而達(dá)到分離的分離模式。 極性鍵合固定相 鍵合在載體表面的功能分子極性基團(tuán)的有機(jī)分子 非極性鍵合固定相 鍵合在載體表面的功能分子是非極性有機(jī)分子。如農(nóng)藥異構(gòu)體分離、石油中烷、烯、芳烴的分離。 吸附色譜在早期的 HPLC中應(yīng)用得最多，現(xiàn)在，很多以前用吸附色譜分離的物質(zhì)被更方便和更有效的化學(xué)鍵合相反相分配色譜所代替。樣品分子反復(fù)地被吸附，又反復(fù)地被流動(dòng)相分子頂替解吸，隨著流動(dòng)相的流動(dòng)而在柱中向前移動(dòng)。 弱極性有機(jī)溶劑或非極性溶劑與極性溶劑的混合物 硅羥基呈微酸性，易與氫結(jié)合，是吸附的活性點(diǎn) .。 自動(dòng)控制單元 液相色譜分離模式 原理 固定相 流動(dòng)相 基于被測(cè)組分在固定相表面具有吸附作用，且各組分的吸附能力不同，使組分在固定相中產(chǎn)生保留和實(shí)現(xiàn)分離。 數(shù)據(jù)控制系統(tǒng) 將各部件與控制單元連接起來(lái)，在計(jì)算機(jī)上通過(guò)色譜軟件將指令傳給控制單元，對(duì)整個(gè)分析實(shí)現(xiàn)自動(dòng)控制，從而使整個(gè)分析過(guò)程全自動(dòng)化。它可對(duì)分析全過(guò)程（分析條件、儀器狀態(tài)、分析狀態(tài)）進(jìn)行在線顯示，自動(dòng)采集、處理和儲(chǔ)存分析數(shù)據(jù)。如 圖 810是硅膠基質(zhì)的冠醚大分子固定相的結(jié)構(gòu)示意圖，功能層冠醚分子吸附或鍵合在硅膠基質(zhì)的表面。 常用來(lái)作基質(zhì)的有硅膠和有機(jī)高分子聚合物微球。 又稱淤漿填充法，使用專門(mén)的填充裝置。 現(xiàn)在采用的手動(dòng)進(jìn)樣器幾乎都是耐高壓、重復(fù)性好和操作方便的六通閥進(jìn)樣器，其原理與氣相色譜中的相同。 圖 87 主要裝置 進(jìn)樣器 進(jìn)樣器是將樣品溶液準(zhǔn)確送入色譜柱的裝置，分手動(dòng)和自動(dòng)兩種方式。 ? 來(lái)自于四種溶液瓶的四根輸液管分別與真空脫氣裝置的四條流路相接，經(jīng)脫氣后的四種溶液進(jìn)入比例閥，混合后從一根輸出管進(jìn)入泵體。 圖 86 主要優(yōu)點(diǎn)： 主要缺點(diǎn)： 低壓梯度 ： ? 只需一個(gè)高壓泵，在泵前安裝了一個(gè)比例閥，混合就在比例閥中完成。 只要通過(guò)梯度程序控制器控制每臺(tái)泵的輸出，就能獲得任意形式的梯度曲線，而且精度很高，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制。根據(jù)溶液混合的方式可以將梯度洗脫分為高壓梯度和低壓梯度。 2. 梯度洗脫操作 ★ 線性梯度： 在某一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)而均勻增加流動(dòng)相強(qiáng)度 ★ 線性梯度 ： 在某一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)而均勻增加流動(dòng)相強(qiáng)度。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時(shí)間內(nèi)全部洗脫并達(dá)到相互分離，往往要用到梯度洗脫技術(shù)。 圖 84 (2) 隔膜型往復(fù)泵 泡沫 為什么要脫氣 噪音峰 基線起伏 排氣費(fèi)時(shí) 熒光淬滅 pH變化。隔膜泵的死體積?。s），因此，更換流動(dòng)相后平衡快，有利于梯度洗脫。通過(guò)調(diào)節(jié)泵活塞的沖程即可進(jìn)行流量調(diào)節(jié)。
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