高效液相色譜法進展及其在衛(wèi)生檢驗中的應用孫成均-資料下載頁
2025-05-02 06:14本頁面
【正文】 an University 依據(jù)： GB/T —2022 食品中山梨酸、苯甲酸的測定 方法概要：試樣加熱除去二氧化碳和乙醇，調(diào) pH至中性，過濾后用 HPLC測定。 Sichuan University C O O H苯甲酸 C H 3C CC CHHHHC O O H山梨酸 Sichuan University 色譜條件： ?色譜柱 C18柱， 250mm ， 10181。m ?流動相 :甲醇： :95； ?流速 : 1ml/min； ?檢測波長： 230nm； ?柱溫： 25℃ 。 Sichuan University 方法概要：保健食品中的 8種水溶性維生素在稀鹽酸溶液中超聲波提取，經(jīng)微孔濾膜過濾后用反相高效液相色譜法測定。 Sichuan University 幾種主要的水溶性維生素 N+SNNN H 2CH 3CH 2 C H3C H 2 C H 2 O H Cl ClH.NNN HNCH3CH3CH2OOCHCHCHC H2O HO HO HO HNC H2O HC H2O HOHCH3 ClH.NC O O H維生素 B1 維生素 B2（核黃素） 維生素 B6（鹽酸吡哆醇） 煙酸 葉酸 Sichuan University NNHNNONH 2C H 2 N H C O N HC C O O HH O O C C H 2 C H 2HNNHNNONH 2C H 2 N H C O N HC C O O HH O O C C H 2 C H 2HO OO HOHH O C HC H 2 O H維生素 C NNHNNONH2C H2N H C O N HC C O O HH O O C C H2C H2H葉酸 Sichuan University 色譜條件 線 性 梯 度 洗 脫 。 流 動 相 A 為 （ ） ， B為甲醇 ， 進樣時 ， 線性變化為 20min時的A＋ B＝ 50＋ 50；然后 ， B為 100%， 30min時 ， 再還原為 A+B＝ 90＋ 10。 流速 1ml/min。 檢測波長切換程序 ：0～ 10min， 266nm（ VC， VB1， VB6， 煙酸和煙酰胺 ） ；10～ 15min（ 葉酸 ） ， 278nm； 15~18min（ VB12） ，360nm； 18~20min（ VB2） ， 266nm。 柱溫：室溫 。 Sichuan University 8種水溶性維生素的色譜圖 Sichuan University 參考依據(jù)：國家標準 GB/T 方法概要 樣品中脂溶性維生素經(jīng)皂化過程與脂肪分離，再用石油醚萃取后，用高效液相色譜，紫外檢測器定量測定。 Sichuan University 主要的脂溶性維生素 C H2OHC H3CH3C H3C H3維生素 D3 C H 2C H 3C H 3C H 3 C H 3C H 2 O H維生素 A OC H 3C H 3CH 3C H 3C H 3C H 3 C H 3C H 3OHH H維生素 E Sichuan University 樣品處理方法 取 10g樣品 ， 置 250ml平底燒瓶 ， 加 30 ml水 。對含淀粉樣品 ， 須先經(jīng)淀粉酶水解 。 于樣液中加入沒食子酸乙醇液和 50% KOH，回流 30min， 冷卻后 ， 轉(zhuǎn)入分液漏斗 ， 用石油醚萃取 。 萃取液用水洗至中性 ， 通過無水硫酸鈉過濾干燥 ， 在 40℃ 和 N2下 ， 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干 (不能蒸干 )， 用石油醚定容 10ml。 取 2ml放入試管 A，7ml放入試管 B， N2吹干 ， A中加 5ml甲醇 ， 測VitAE， B加 1ml正己烷 ， 測 VitD。 Sichuan University 維生素 A和 E的測定條件 ?儀器條件：色譜柱： 25cm ， ODS色譜柱。流動相為甲醇。流速為 。檢測波長：維生素 A為 325nm；維生素 E為290nm。 Sichuan University 維生素 D的測定條件 色譜柱 25cm ， C18色譜柱。流動相為甲醇。流速為 1ml/min。柱溫為 20℃ 。波長為 265nm。注射體積為50μL。 Sichuan University 12種農(nóng)藥殘留測定 方法概要：將樣品搗碎 ， 用乙酸乙酯超聲提取 ， 經(jīng)Florisil固相萃取柱凈化 、 正己烷－二氯甲烷 （ 1： 1，v/v） 洗脫 、 氮氣吹干濃縮 、 甲醇定容后用高效液相色譜柱分離 、 紫外檢測 ， 外標法峰面積定量 。 Sichuan University 測定的 12種農(nóng)藥 二嗪農(nóng)、氧化樂果、辛硫磷、甲基對硫磷、稻豐散、氯氟胺氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、芐氯菊酯、氰戊菊酯、二甲戊樂靈。 Sichuan University 儀器及條件 ? 色譜柱 ： ODS C18柱， 5μ， 250 ；流動相為乙腈 水；梯度洗脫程序： 50％乙腈（ v/v） 0～ 10min線性上升至 64％乙腈，然后10min～ 64%乙腈變?yōu)?67％，～ 35min內(nèi)乙腈由 67％上升至 94％；流速， ；柱溫， 25℃ ； ? 紫外檢測，波長切換程序 ：在 0～ 10min波長為 200nm， 10～ 13 min為 272nm， 13～ 16min為 230nm， 16～ 22min為 289nm， 22～ 238nm，其余時間波長為 206nm。 Sichuan University ?樣品采集與處理 稱取攪碎樣品 ， 加入乙酸乙酯和足量無水硫酸鈉劇烈振搖除去水分 ， 超聲提取 ， 上清液抽濾 ， 殘渣重復超聲提取一次 。 濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （ 35℃ 水浴 ）揮干 ， 用少量二氯甲烷溶解殘渣 ， 樣液用Florisil固相萃取小柱凈化 ， 然后用 7ml正己烷－二氯甲烷 （ 1： 1， v/v） 淋洗 ， 收集流出物 。35℃ 水浴弱氮氣流下?lián)]干 ， 用 殘渣 。 15000rpm離心 2min后色譜測定 。 Sichuan University 12種農(nóng)藥標準圖譜 Sichuan University
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