實(shí)驗(yàn)微波輔助提取-高效液相色譜法測(cè)定蔬果中的vc含量-資料下載頁(yè)
2025-01-20 04:22本頁(yè)面
【正文】 50%CH3OH +50H2O 40%CH3OH +60H2O 由于分析物組成復(fù)雜，以某一組成的流動(dòng)相可能使部分待測(cè)物得到好的分離，但同時(shí)出使其它待測(cè)物的分離不令人滿意！實(shí)際工作中采用程序升溫 （ GC） 和梯度淋洗 （ LC） 來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題。 色譜分離中的問(wèn)題 梯度洗脫 2簡(jiǎn)單維護(hù) 為什么溶劑和樣品要過(guò)濾 ? 溶劑和樣品過(guò)濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。 色譜柱 ：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。 儀器 ：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。 樣品過(guò)濾頭 的類(lèi)型： 30 mm內(nèi)徑：適用于大進(jìn)樣量的過(guò)濾，材料有纖維素 ,醋酸纖維，聚四氟乙烯。處理樣品體積少于 50μl。 13 mm內(nèi)徑：適用于范圍廣的過(guò)濾，材料為纖維素。 3 mm內(nèi)徑：適用于小進(jìn)樣量的過(guò)濾，處理樣品體積為 7μl。 濾膜類(lèi)型 ： 聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無(wú)任何可溶物。 醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑；適用于水溶液。 尼龍 66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可用于強(qiáng)酸， 70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。 再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機(jī)溶劑。 流動(dòng)相使用前為什么要脫氣？ 流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理 ，以除去其中溶解的氣體（如 O2），防止在洗脫過(guò)程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無(wú)法分析。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用 FLD，可能會(huì)造成熒光猝滅。 常用的脫氣方法有： 氦氣脫氣法：利用氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。 加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。 抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。 超聲脫氣法：流動(dòng)相用超聲波振蕩 1015 min，此法效果最差。 在線真空脫氣法：利用膜滲透技術(shù)， 在線脫氣，智能控制，無(wú)需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。 如何防止溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑過(guò)濾器的堵塞及堵塞后的處理 溶劑的污染以及藻類(lèi)的生長(zhǎng)會(huì)堵塞溶劑過(guò)濾器，從而影響泵的運(yùn)行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（ pH=47）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑過(guò)濾器的堵塞。 A：嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過(guò)濾。 B：勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液 C：如果應(yīng)用許可，可在溶劑中加入 . D: 在溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣，隔絕空氣。 E： 避免使溶劑瓶暴露在直射陽(yáng)光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。 堵塞后的處理法方法： 將過(guò)濾頭從組件中取下，在硝酸（ 10%35%）中浸泡 1 h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。 三、高效液相色譜實(shí)驗(yàn) ?實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? ?實(shí)驗(yàn)內(nèi)容； ?實(shí)驗(yàn)要求。 掌握高效液相色譜法（ HPLC）的基本原理和儀器結(jié)構(gòu)； 熟悉 HPLC方法建立； 了解 HPLC的發(fā)展和應(yīng)用趨勢(shì)。 微波輔助萃取（ MAE） 實(shí)際樣品測(cè)定 Vc的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 ?預(yù)習(xí)：回答 What? Why? How?隨機(jī)提問(wèn)方式； ?蔬果樣品可自備； ?遲到必究； ?善始善終完成實(shí)驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)成績(jī)：預(yù)習(xí) 10%+實(shí)驗(yàn) 40%+報(bào)告 30%+考試 20% 謝 謝 ！
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