實(shí)驗(yàn)微波輔助提取-高效液相色譜法測(cè)定蔬果中的vc含量(編輯修改稿)
2025-02-16 04:22 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ???5. 分離度 (Resolution, R) 同時(shí)反映色譜柱效能和選擇性的一個(gè)綜合指標(biāo)。也稱(chēng)總分離效能指標(biāo)或分辨率。其定義為： 利用此式，可直接從 色譜流出曲線(xiàn)上求出分離度 R。 R= R= R= 響應(yīng)信號(hào) 保留時(shí)間 t, min R 越大，相鄰組分分離越好。當(dāng)R=1.5時(shí)，分離程度可達(dá)99.7%，因此R=1.5通常用作是否分開(kāi)的判據(jù)。 三、 HPLC定性與定量 定性方法 a、保留時(shí)間 b、與結(jié)構(gòu)表征的檢測(cè)器聯(lián)用 定量方法 a、峰高與峰面積 b、外標(biāo)法 c、內(nèi)標(biāo)法 四、 HPLC儀器組成 早期液相色譜，包括 Tswett的工作，都是在直徑 1~5cm, 長(zhǎng)50~500cm的玻璃柱中進(jìn)行的。為保證有一定的柱流速，填充的固定相顆粒直徑多在 150~200 ?m范圍內(nèi)。即使這樣，流速仍然很低 (1 mL/min)，分析時(shí)間仍然很長(zhǎng)！ 當(dāng)加壓增加流速 (真空或空氣泵 )時(shí)，盡管分析時(shí)間減少，但柱塔板高度 H min也相應(yīng)增加了！或者說(shuō)柱效下降了。 為了解決分析時(shí)間及柱效問(wèn)題， 最為有效地增加柱效的唯一方法是減小填充物的粒徑（ 3~10 ?m ）！ 粒徑減小，液體流過(guò)所需壓力增大 高壓裝置 分析對(duì)象及范圍： GC分析只限于氣體和低沸點(diǎn)的穩(wěn)定化合物，這些物質(zhì)占有機(jī)物總數(shù)的 20%； HPLC可以分析高沸點(diǎn)、高分子量的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，這類(lèi)物質(zhì)占有機(jī)物總數(shù)的 80%。 流動(dòng)相的選擇： GC采用的流動(dòng)相中為有限的幾種 “ 惰性 ” 氣體，只起運(yùn)載作用，對(duì)組分作用??； HPLC采用的流動(dòng)相為液體或各種液體的混合，可供選擇的機(jī)會(huì)多。它除了起運(yùn)載作用外，還可與組分作用，并與固定相對(duì)組分的作用產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，即流動(dòng)相對(duì)分離的貢獻(xiàn)很大，可通過(guò)溶劑來(lái)控制和改進(jìn)分離。 操作溫度： GC需高溫； HPLC通常在室溫下進(jìn)行。 HPLC與 GC的比較 1. 儀器結(jié)構(gòu) HPLC儀器包括： ? 高壓輸液裝置 。 ? 進(jìn)樣系統(tǒng) 。 ? 分離系統(tǒng) 。 ? 檢測(cè)系統(tǒng) 。 此外還配有梯度淋洗、自動(dòng)進(jìn)樣和數(shù)據(jù)處理裝置。 主要部件 (1) 高壓輸液泵 ?主要部件之一 ， 壓力： 150～ 350 105 Pa。 ?為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相 （ 10μm） ， 液體的流動(dòng)相高速通過(guò)時(shí) ， 將產(chǎn)生很高的壓力 ， 因此高壓 、 高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一 。 ?應(yīng)具有壓力平穩(wěn) 、 脈沖小 、 流量穩(wěn)定可調(diào) 、 耐腐蝕等特性 (2)梯度淋洗裝置 外梯度 : 利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。 內(nèi)梯度 : 一臺(tái)高壓泵 , 通過(guò)比例調(diào)節(jié)閥 ,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。 (3) 進(jìn)樣裝置 包括自動(dòng)進(jìn)樣和手動(dòng)進(jìn)樣裝置；流路中為高壓力工作狀態(tài)； 通常使用耐高壓的 六通閥 進(jìn)樣裝置 其結(jié)構(gòu)如圖： (4) 色譜分離柱 柱體為直型不銹鋼管，常規(guī)內(nèi)徑 1～ 6 mm，柱長(zhǎng) 5～ 40 cm。發(fā)展趨勢(shì)是 減小填料粒度和柱徑 以提高柱效。 (5) 液相色譜檢測(cè)器 a. 紫外檢測(cè)器 應(yīng)用最廣 ， 對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng) 。 特點(diǎn) ： 靈敏度高； 線(xiàn)性范圍寬； 流通
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1