高效液相色譜法ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-02-21 11:26本頁(yè)面
【正文】 超臨界狀態(tài)下的 、氧化亞氮、乙烷、三氟甲烷等。 最常用，因?yàn)樗呐R界溫度低（ 31℃ ）、臨界壓力適中（ ）、無毒、便宜，但其缺點(diǎn)是極性太低，對(duì)一些極性化合物的溶解能力較差，所以，通常要用另一臺(tái)輸液泵往流動(dòng)相中添加 15％的甲醇等極性有機(jī)改性劑。 ▲ 色譜柱 ： 液相色譜的填充柱和氣相色譜的毛細(xì)管柱都可以使用，但由于超臨界流體的強(qiáng)溶解能力，所使用的毛細(xì)管填充柱的固定相必須交聯(lián) ▲ 應(yīng)用 ： 從理論上講， SFC既可以象液相色譜一樣分析高沸點(diǎn)和難揮發(fā)樣品，也可象氣相色譜一樣分析揮發(fā)性成分。不過，超臨界流體色譜更重要的應(yīng)用是用來作分離和制備，即超臨界流體萃取。 毛細(xì)管電泳（ capillary electrophoresis, CE）：以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，以電解質(zhì)為電泳介質(zhì)，以毛細(xì)管為分離通道，樣品組分依據(jù)淌度和分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一種色譜方法。它有多種分離模式，可以采用液相色譜中的各種檢測(cè)方法。 CE既可以分離帶電荷的溶質(zhì)，也可以通過毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜等分離模式分析中性溶質(zhì)， CE的高分離效率、高檢測(cè)靈敏度，樣品用量極少等特點(diǎn)使它在生物醫(yī)藥樣品的分析中顯示出突出的優(yōu)越性。 毛細(xì)管電色譜（ capillary electrochromatography, CEC）：以電滲流（或電滲流結(jié)合高壓輸液泵）為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的微柱色譜法。 CEC是液相色譜與毛細(xì)管電泳相結(jié)合的產(chǎn)物，它的分離機(jī)理包含有電泳遷移和色譜固定相的保留機(jī)理，一般而言，溶質(zhì)與固定相間的相互作用對(duì)分離起主導(dǎo)作用。所用色譜柱為填充了HPLC填料的填充型毛細(xì)管柱和管內(nèi)壁涂漬了固定相功能分子的開管毛細(xì)管柱。 CEC還處在發(fā)展階段，目前主要應(yīng)用在藥物、手性化合物和多環(huán)芳烴的分離分析。另外 CEC與質(zhì)譜聯(lián)用既可解決LC/MS的分離效率不高的問題，又可克服 CE/MS中質(zhì)量流量太小的缺陷。 3親和色譜 定義： 利用蛋白質(zhì)或生物大分子等樣品與固定相上生物活性配位體之間的特異親和力進(jìn)行分離的液相色譜方法。 固定相： 將具有生物活性的配位體以共價(jià)鍵結(jié)合到不溶性固體基質(zhì)上制得。 生物活性配位體： 常用的有酶（如底物及其類似物）、輔酶（如類固醇）、抗體（植物激素）、激素（如糖和多糖）、抗生素（核苷酸）等。 基質(zhì) ： 通常為凝膠，許多無機(jī)和有機(jī)聚合物都可形成凝膠，如瓊脂糖衍生物、多孔玻璃。 分離過程： 在分離過程中涉及疏水相互作用、靜電力、范德華力和立體相互作用。在鍵合了某類配體的親和色譜柱上加入含生物活性大分子的樣品，只有柱中配位體有明顯親和性的生物大分子才會(huì)被吸附，這些生物分子只有在改變流動(dòng)相的組成時(shí)才會(huì)被洗脫。 應(yīng)用 ： 親和色譜主要用于蛋白質(zhì)和生物活性物質(zhì)的分離與制備。 以激光的輻射壓力為驅(qū)動(dòng)力，將待分離組分（或物質(zhì)顆粒）按幾何尺寸大小予以分離的一種色譜分離技術(shù)。 激光色譜是 1995年剛剛提出的新的色譜方法，盡管尚無商品儀器，但可預(yù)言其在生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)l(fā)揮重要作用，如分離高分子聚合物微球、生物細(xì)胞、生物大分子、肽、 DNA、線粒體。從理論上講，可以實(shí)現(xiàn)單個(gè)蛋白質(zhì)分子的檢測(cè)。 3激光色譜 原理 應(yīng)用 欲分離的粒子隨流動(dòng)相（粒子溶液本身）以一定的流速流經(jīng)毛細(xì)管，將一定功率的激光束聚焦于毛細(xì)管的出口，激光束的入射方向與粒子的流動(dòng)方向相反，但都與毛細(xì)管同軸。這時(shí)，溶質(zhì)同時(shí)受到流動(dòng)相的推動(dòng)力激光束壓力的作用。溶質(zhì)的折光指數(shù)大于溶劑的，因此粒子受輻射壓力作用而聚焦于激光束的中心線上，當(dāng)溶質(zhì)受到壓力大于流動(dòng)相推力時(shí)，粒子就會(huì)發(fā)生反轉(zhuǎn)并獲得一定加速度，直至受到的流動(dòng)相阻力與壓力相等時(shí)，溶質(zhì)才會(huì)停留。因?yàn)椴煌瑤缀纬叽绲娜苜|(zhì)粒子受到激光輻射的作用力不同，它們?cè)诿?xì)管中的停留位置也就不同，從而達(dá)到分離。 可以用配有顯微物鏡的電視攝像機(jī)記錄分離結(jié)果。 檢測(cè) 分離過程 HPLC在不同領(lǐng)域的主要應(yīng)用 HPLC幾乎在所有學(xué)科領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用，可以用于絕大多數(shù)物質(zhì)成分的分離分析，它和氣相色譜都是應(yīng)用最廣泛的儀器分析技術(shù)， HPLC在部分領(lǐng)域的主要分析對(duì)象物質(zhì)列于 表 84。 液相色譜分離模式的選擇 分離方式是按固定相的分離機(jī)理分類的，選定了固定相（色譜柱）基本上就確定了分離方式。當(dāng)然，即使同一根色譜柱，如果所用流動(dòng)相和其它色譜條件不同，也可能成為不同的分離方式。選擇分離方式大體上可以參照 圖 820。 首頁(yè) 液相色譜儀流程圖 返回 目錄
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