實驗微波輔助提取-高效液相色譜法測定蔬果中的vc含量(已修改)
2025-02-01 04:22 本頁面
【正文】 主講教師：肖 小 華 微波輔助提取 高效液相色譜法 測定蔬果中的維生素 C含量 實驗學(xué)時： 5 學(xué)時 實驗名稱： 實驗?zāi)康?、?nèi)容及要求 高效液相色譜簡介 HPLC的使用與維護 High Performance Liquid Chromatography 一、高效液相色譜法 ?歷史回顧； ?基本原理與概念； ?HPLC定性與定量方法； ?HPLC儀器組成。 一、歷史回顧 色譜法早在 1903年由俄國植物學(xué)家茨維特分離植物色素時采用； 40年代， TLC，紙色譜，柱層析； 50年代， GC出現(xiàn)使色譜具備分離和在線分析功能； 60年代末 HPLC出現(xiàn)，使色譜分析范圍進一步擴大； 1．新型固定相和檢測器 2．聯(lián)用儀器： GCMS， HPLCMS 3．智能化發(fā)展 19371972年， 35年中有 12個 Nobel獎是與色譜研究相關(guān)的！ ? 固定相 —— CaCO3顆粒 ? 流動相 —— 石油醚 色帶 色譜（ Chromatography）一詞來源于希臘語中 “ chroma”=color。 “graphein”=write 二、 基本原理 當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時，與固定相發(fā)生相互作用。由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中流出。 ? 與適當(dāng)?shù)闹髾z測方法結(jié)合，實現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測； ? 兩相及兩相的相對運動構(gòu)成了色譜法的基礎(chǔ)。 色譜法分類 1． 按兩相分子的聚集狀態(tài) 分： 氣體 固體 氣 固色譜 氣體 液體 氣 液色譜 氣相色譜 液相色譜 液體 固體 液 固色譜 液體 液體 液 液色譜 2．按 固定相的固定方式 分： 平面色譜 紙色譜 薄層色譜 高分子薄膜色譜 柱色譜 填充柱色譜 毛細管柱色譜 3． 按 分離機制 分： 分配色譜 ：利用分配系數(shù)的不同 吸附色譜 ：利用物理吸附性能的差異 離子交換色譜 ：利用離子交換原理 空間排阻色譜 ：利用排阻作用力的不同 ? 優(yōu)點： “ 三高 ” 、 “ 一快 ” 、 “ 一廣 ” ? 缺點： 高 選擇性 —— 可將性質(zhì)相似的組分分開 高效能 —— 反復(fù)多次利用組分性質(zhì)的差異 產(chǎn)生很好分離效果 高 靈敏度 —— 10111013 g，適于痕量分析 分析速度 快 —— 1 min1 hr。一次可以測多種樣品 應(yīng)用范圍 廣 —— 氣體，液體、固體物質(zhì)化學(xué)衍生化再色譜分離、分析 對未知物分析的定性專屬性差 需要與其他分析方法聯(lián)用 (GCMS,LCMS) 一些基本概念 1. 分配系數(shù) (partition factor) K 組分在固定相和流動相間發(fā)生的吸附、脫附，或溶解、揮發(fā)的過程叫做分配過程。在一定溫度下，組分在兩相間分配達到平衡時的濃度比，稱為分配系數(shù)，用 K 表示，即： Ms ccK ??組分在流動相中的濃度組分在固定相中的濃度分配系數(shù)是色譜分離的依據(jù)。 2. 分配比 (partition radio) k
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