高效液相色譜法：特指一種用液體為流動(dòng)相的色譜分離分析方(已修改)
2025-10-09 06:16 本頁(yè)面
【正文】 高效液相色譜法： 特指一種用液體為流動(dòng)相的色譜分離分析方法。它在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、化學(xué) 鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測(cè)器等新實(shí) 驗(yàn)技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。 高壓： 150350*105 Pa 高效：大于 30000塔板 /米 高靈敏： 109g （紫外檢測(cè)）、 1011g （熒光檢測(cè)） ? 第三章 高效液相色譜分析法 HPLC （ High Pertormance Liquid Chromatography， ） ? 167。 21 高效液相色譜法的特點(diǎn) 一 、 HPLC與 GC差別 1． 分析對(duì)象的區(qū)別 GC：適于能氣化 、 熱穩(wěn)定性好 、 且沸點(diǎn)較 低的樣品；但對(duì)高沸點(diǎn) 、 揮發(fā)性差 、 熱穩(wěn)定性差 、 離子型及高聚物的樣 品 ， 尤其對(duì)大多數(shù)生化樣品不可檢測(cè) 占有機(jī)物的 20% HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品 （ 包括 有機(jī)介質(zhì)溶液 ） ， 不受樣品揮發(fā)性和 熱穩(wěn)定性的限制 ， 對(duì)分子量大 、 難 氣化 、 熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分 子和離子型樣品均可檢測(cè) 用途廣泛 ， 占有機(jī)物的 80% 2． 流動(dòng)相差別的區(qū)別 GC：流動(dòng)相為惰性 ， 氣體組分與流動(dòng)相無(wú)親合作用 力 ， 只與固定相有相互作用 。 HPLC：流動(dòng)相為液體 ， 流動(dòng)相與組分間有親合作用 力 ， 能提高柱的選擇性 、 改善分離度 ， 對(duì)分離起 正向作用 。 且流動(dòng)相種類(lèi)較多 ， 選擇余地廣 ， 改 變流動(dòng)相極性和 pH值也對(duì)分離起到調(diào)控作用 ， 當(dāng) 選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相 也可以增大分離選擇性 。 3． 操作條件差別 GC：加溫操作 HPLC：室溫；高壓 （ 液體粘度大 ， 峰展寬小 ） 1． 貯液罐 （ 濾棒 ， 可濾 去顆粒狀物質(zhì) ） 2． 高壓泵 （ 輸液泵 ） 3． 進(jìn)樣裝置 4． 色譜柱 —— 分離 5． 檢測(cè)器 —— 分析 6． 廢液出口或組分收集器 7． 記錄裝置 ? 二、高效液相色譜儀流程圖 三 、 HPLC的特點(diǎn)和實(shí)際應(yīng)用 利用其高柱效 （ n=104片 /米 ） ， 有效分離極復(fù)雜 體系中的痕量組分 。 正相色譜分離有機(jī)溶劑中的物質(zhì) 反相色譜分離水溶液中的物質(zhì) 生化物質(zhì) 。 用離子型固定相建立的離子交換色譜和離子對(duì) 色譜法分析離子型體的含量 。 （ 蛋白質(zhì) 、 氨 基酸 、 常見(jiàn)陰陽(yáng)離子等 ） 利用多孔凝膠固定相建立空間排阻色譜法可分
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