高效液相色譜法教程(參考版)
2025-05-13 02:20本頁面
【正文】 。 47 色譜法基本要求 1. 掌握色譜法的分類，色譜流出曲線及有關術語； 2. 掌握色譜法的基本理論，了解柱效的影響因素； 3. 掌握分離度與柱效、選擇因子、容量因子、分析時間之間關系； 4. 了解定性、定量分析方法； 5. 掌握氣相色譜流程及氣相色譜儀的結構； 6. 掌握氣相色譜固定相的特性； 7. 掌握檢測器性能指標的描述方法； 8. 掌握液相色譜儀的基本結構及基本概念； 48 色譜法基本要求 9. 了解液相色譜法的主要類型及固定相、流動相的選擇。 二、溶解度 水溶性樣品最好用離子交換色譜法和液液分配色譜法；微溶于水，但在酸或堿存在下能很好電離的化合物，也可用離子交換色譜法；油溶性樣品或相對非極性的混合物，可用液 固色譜法。相對分子質(zhì)量在 200 ~ 2021的化合物，可用液固吸附、液 液分配和離子交換色譜法。 選擇色譜分離方法的主要根據(jù) 是樣品的相對分子質(zhì)量的大小，在水中和有機溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學結構等物理、化學性質(zhì)。 （ 3） 剛性凝膠 如多孔硅膠、多孔玻璃等，它們既可用水溶性溶劑，又可用有機溶劑作流動相，可在較高壓強和較高流速下操作。 （ 2） 半剛性凝膠 如高交聯(lián)度的聚苯乙烯。 43 第八節(jié) 排阻色譜法 （ 1） 軟性凝膠 如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠都具有較小的交聯(lián)結構，其微孔能吸入大量的溶劑，并能溶漲到它干體的許多倍。 排阻色譜的固定相一般可分為 軟性、半剛性和剛性凝膠 三類。因此，大的組分分子在色譜柱中停留時間較短，很快被洗脫出來，它的洗脫體積很 42 第八節(jié) 排阻色譜法 小，小的組分分子在色譜柱中停留時間較長，洗脫體積較大，直到所有孔內(nèi)的最小分子到達柱出口，完成按分子大小而分離的洗脫過程。對不同大小的組分分子，可分別滲入到凝膠孔內(nèi)的不同深度，大個的組分分子可以滲入到凝膠的大孔內(nèi)，但進不了小孔甚至于完全被排斥。 排阻色譜的色譜柱的 填料是凝膠 ，它是一種表面惰性，含有許多不同尺寸的孔穴或立體網(wǎng)狀物質(zhì)。 二、流動相 離子交換樹脂的流動相最常使用水緩沖溶液，有時也使用有機溶劑如甲醇或乙醇同水緩沖溶液混合使用，以提高特殊的選擇性，并改善樣品的溶解度。 40 第七節(jié) 離子交換色譜法 陰離子交換樹脂具有與樣品中陰離子交換的基團。 陽離子交換樹脂又可分為強酸性和弱酸性樹脂 。 按結合的基團不同，離子交換樹脂可分為陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂。交聯(lián)度一般控制在 4 ~ 16%范圍內(nèi)，高度交聯(lián)的樹脂較硬而且脆，但選擇性較好。 39 第七節(jié) 離子交換色譜法 典型的離子交換樹脂是由苯乙烯和二乙烯苯交聯(lián)共聚而成。 一、固定相 離子交換色譜常用的固定相為離子交換樹脂。 38 第七節(jié) 離子交換色譜法 離子交換色譜以離子交換樹脂為固定相，樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。 （ 3）鍵合固定相對不太強的酸及各種極性的溶劑都有很好的化學穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。一方面通過控制化學鍵合反應，可以把不同的有機基團鍵合到硅膠表面上，從而大大提高了分離的選擇性；另一方面可以 37 第六節(jié) 化合鍵合色譜法 通過改變流動相的組成合乎種類來有效地分離非極性、極性和離子型化合物。其分離原理與離子交換色譜一樣，只是填料是一種新型的離子交換劑而已。 該法主要用于分離異構體，極性不同的化合物，特別是用來分離不同類型的化合物。組分的分配比 K值，隨其極性的增加而增大，但隨流動相中極性調(diào)節(jié)劑的極性增大（或濃度增大）而降低。通常用于分離極性化合物。最常用的有氰基（ C N）、 氨基（ NH2）、二醇基（ DIOL） 鍵合相。 在反相鍵合相色譜中，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。顯然，這兩種作用力之差，決定了分子在色譜中的保留行為。當用水與有機溶劑所組成的極性溶劑為流動相來分離有機化合物時，一方面，非極性組分分子或組分分子的非極性部分，由于疏溶劑的作用，將會從水中被“擠”出來，與固定相上的疏水烷基之間產(chǎn)生締合作用。 分配色譜的作用機制是假設混合溶劑（水 +有機溶劑）中極性弱的有機溶劑吸附于 非極性烷基配合 基表面，組分分子在流動相中與被 非極性烷基配合 基 所吸附的液相中進行分 33 第六節(jié) 化合鍵合色譜法 配。 32 第六節(jié) 化合鍵合色譜法 二、反相鍵合相色譜法 在反相色譜中，一般采用非極性鍵合固定相，如硅膠 C18H37（簡稱 O D S或 C18）硅膠 苯基等，用強極性的溶劑為流動相，如甲醇 /水，乙腈 /水，水和無機鹽的緩沖液等。 （ 4）硅氧烷型（ =SiOSiC=） 鍵合相 將硅膠與有機氯硅烷或烷氧基硅烷反應制備。 （ 3）硅碳型（ =SiC=） 鍵合相 將硅膠表面氯化后，使 SiCl鍵轉化為 SiC鍵。 （ 2）硅氮型（ =SiN=） 鍵合相 如果用 SOCl2將硅膠表面的羥基先轉化成鹵素（氯化），再與各種有機胺反應，可以得到各種不同極性基因的鍵合相。反應生成單分子層鍵合相。在鍵合反應之前，要對硅膠進行酸洗、中和、 30 第六節(jié) 化合鍵合色譜法 干燥活化等處理，然后再使硅膠表面上的硅羥基與各種有機物或有機硅化合物起反應，制備化學鍵合固定相。反相色譜在現(xiàn)代液相色
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