【導讀】糖提取方法和條件的最佳優(yōu)化組合。并應用乙醇回流法和苯酚-. 有效成分含量的關系。劑，乙醇用量為20倍，提取溫度為80℃，提取3次，每次90min。在此提取條件下，辣木葉總黃酮量為％。中的總黃酮和多糖含量都比較少。圍為%%；不同器官的多糖含量為根中最多.葉柄中最少.其變化范圍為%～％。含量為葉%、葉柄％、莖％。沒有顯著性差異。師的指導下進行的研究工作及取得的成果。對本研究提供過幫助和做出過貢獻的個人或集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。年生木本植物，是一種有獨特經(jīng)濟價值的熱帶植物。已發(fā)現(xiàn)14個種，其(原產于埃塞俄比亞和肯。2次)，每年采集期長達10個月，樹齡可達20年。據(jù)報道其中鈣和蛋白質含。量分別為牛奶的4倍和2倍，鉀是香蕉的3倍，鐵是菠菜的3倍，人體必需的各種氨基酸和微量元素等。在印度，辣木鮮葉作為蔬菜食用，嫩葉類似菠菜。在食品工業(yè)中，辣木油可以作為無毒的食品級安全潤滑油。

　　

【正文】 境對辣木多糖含量的影響 3 2 不同采收期對 辣木 多糖含量的影響 表 20 不同 采收期辣木多糖含量的變化（ n=12） 采收 期 /月 多糖含量 /% 葉 葉柄 莖 7 177。 177。 177。 Dd 8 177。 177。 Dd 177。 Dd 9 177。 177。 Dd 177。 Dd 10 177。 177。 Dd 177。 Dd 11 177。 177。 CDd 177。 注 ： 表中縱向的大寫字母代表同一 器官 不同 采收期 多糖 含量 的 極顯著 性，小寫字母代表同一器官不同采 收期 多糖含量 的顯著性；橫向的大寫字母代表同一采收期不同器官 多糖 含量 的 極顯著 性 ， 小寫字母代表同一采收期不同器官 多糖含量的顯著性 ， 有 相同 字母表示茬異不顯著，不同字母表示差異顯著(P 多重比較采用 Duncan). 比較辣木同一器官，不同采收期的多糖含量 ， 從表 20 可以看出，無論是哪一器官，都是在 11 月采收時多糖含量最高，可 達 ： 葉 ％、葉柄 ％、莖 ％ 。 其中 11 月采收的辣木葉多糖含量與 7 月采收的辣木葉多話 含量 差 異不顯著，但顯看大于 10 月采收的辣木葉多糖含量 。 極顯著大于 9 月采收的 辣木 葉多糖含量 ： 而葉柄和莖的多糖含量在各采收期中差異不顯著，因此 ， 該種植地的 辣木 最佳采收期是 11 月 。 分析辣木同一采收期、不同器官的多糖含量，發(fā)現(xiàn)其辣木葉的多糖含量極顯著大于葉柄和莖的多糖含量。而葉柄和莖之間的多糖含量差異不顯著。 不同管理水平對辣木多糖含量的影響 比較辣木同一管理水平、不同器官的多糖含量 。 其中葉的多糖含量投顯著大于葉柄和莖的多糖含量。而葉柄和莖之問的多糖含量差異不顯著。 綜合表 21 和圖 1 1 17 可以 看出 ： 同一器官在不同的管理水平下其多糖含量均未達到顯著水平，但葉柄和莖在低水平的管理條件下其含量略比在中等和高管理水平條件下的多糖含量高，依次為 ： 低 中 高；葉在中等管理水平下多糖含量最高 。 表 21 不同 管理水平下辣木葉 多糖 含量的變化（ n=27） 器官 多糖 含量 /% 高 中 低 葉 177。 177。 177。 葉柄 177。 177。 177。 莖 177。 177。 177。 注 ： 表中縱向的大寫一母代表 同一 管理水平 不同 器官的 多糖 含量 的 極顯 著性，橫向的大寫字母代表同一器官不同管理水平的辣木多糖含量的極顯著性。有相同字母表示差異不顯著，不同字母表示 異顯著 (P 多重比較采用 Duncan)。高管理水平：每株辣木施有機肥 3050 斤；中等管理水平：沒施肥，但在種植地上種了 2 季花生；地管理水平：沒有施肥也沒種其他作物。 圖 15 不同管理水平下辣木葉 多糖 含量的變化 圖 16 不同管理水平下辣木葉柄 多糖 含量的變化 圖 17 不同管理水平下辣木 莖多糖 含量的變化 不同朝向辣木多糖含量的影響 表 22 不同朝向辣木 多糖 含量的變化（ n=4） 朝向 多糖 含量 /% 葉 葉柄 莖 背陽 177。 177。 177。 向陽 177。 177。 177。 注 ： 表中縱向的大寫字母代表同一器官不同方位 多糖 含量的極顯著性，橫向的大寫字母代表同一方位不同器官 多糖 含量的極顯著性。有相同字母表示差異不顯著。不同字母表示差異極顯著（ P 多重比較采用 Duncan）。 由表 22 的結果可以看出 ： 同一器官不同朝 向的多糖含量葉、葉柄、莖均沒有顯著性差異，比較辣木同朝向不同器官的多糖含量發(fā)現(xiàn)，葉的多糖含量顯著大于葉柄和莖的含量，而葉柄和莖的多轄含量差異不顯著 。 4 討論 關于辣木總黃酮提取方法及含量的測定 黃酮類化合物是中藥中一種有顯著生物活性的有效成分。有關它的提取、分離、分析和藥理方面的研究報道很多，對于黃酮類化舍物的分離以及單一黃酮成分的定量分析，常用的 有；氣相色譜法、高效液相色譜法 (HPLC)。 在實際生產和科研過程中 ， 對黃酮類化合物的測定現(xiàn)多用高效液相色譜法，該法專屬性強，準確度高，但樣品處理復雜 ， 儀器昂貴，實驗成本較高。對于評價和監(jiān)測黃酮含量往往采用分光光度法 ， 分光光度法白20 世紀 90 年代以來由于其成本低、便于操作等特點，一直廣泛用于植物中黃酮類 化臺物含量的測定，是一種快捷有效的方法。本實驗結合自身實際情況， 考慮到方法的簡便、快捷以及可行性，選用了分光光度法 。 由于黃酮類化合物與鋁枯形成配臺物，在可見區(qū)能獲得穩(wěn)定的吸收峰 .因此，實驗中選擇鋁配合物顯色體系來測定辣木提取物中黃酮類化合物的含量。研究已有文獻中用于黃酮類化臺物分光光度法的有不同的顯色體系，所選擇的吸收波長也各有不同 。以蘆丁為標準品。用分 光光度法檢測黃酮類化合物所用的顯色劑主要有 NaNO2AL(NO3)3NaOH 顯色體系和 KAcAlCl3 顯色體系。考慮到比色法測定黃酮類化學物質吸收波長時，因溶荊的種類、 PH 值和溶劑含量的不同，波長會發(fā)生明顯的紅移或紫移 。所以宜固定溶劑。實驗中 辣木 中黃酮類化舍物是用醇和酮等溶劑提取的，考慮到保持溶劑的一致性，減少實驗誤差，采用 NaNO2 Al（ NO3） 3NaOH 顯色體系 。 已有文獻 表明 ， 在堿性環(huán)境中，黃酮類化合物與鋁鹽形成配合物，在紫外可見光光譜的 355nm， 389nm， 510nm 處有較大吸收。黃酮 類化合物的紫外光譜圖上主要有兩個吸收帶 ： 環(huán)肉桂酰 系統(tǒng)引起的吸收帶 I(300550nm)和環(huán)苯酰系統(tǒng)引起的吸收帶Ⅱ(240280nm)。在堿性環(huán)境中，若加入錯鹽，則黃酮化合物與鋁鹽形成穩(wěn)定的紅色配合物，帶 1I 會明顯向長波方向移動 (紅移 )，而在 510nm 波長處其它成分干擾小 ， 放選擇 510nm 為測定波長 。 水浴溫度對總黃酮得率的影響表明，并非水浴溫度越高，總黃酮得率就越高 。 低溫和較高溫度都不利于總黃酮的提取 。 溫度過低降低了黃酮的溶解度 ， 不能充分地把材料中的總黃酮提取出來 。 而溫度較高時 .黃酮類化臺物的穩(wěn)定性差， 易發(fā)生氧化作用而失效 ， 造成總黃酮得率降低。乙醇濃度對總黃酮提取的影響是乙醇的濃度越高，總黃酮的得率越低，表明 辣木 中的黃酮類化合物具有一定的水溶性 .80％的乙醇兼有極性、非極性和中等極性的特點 .適合提取混合物成分。另外 .與甲醇相比，用乙醇作溶劑具有無毒、無異味、無殘留、安全性好等優(yōu)點 。 黃酮種類較多包括黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、黃烷酮類等 ， 廣義的范圍還包括查耳酮、嗅酮、異黃烷酮及茶多酚 ， 本實驗只是對辣木的總黃酮進行了提取井初步測定其在不同材料中的含量。進一步可以對菲術中的黃酮種類進行鑒別并測定其 含量。 不同植 物的黃酮種類不同 ， 應用價值也可不相同 ， 關于辣木黃酮的功效及其在臨 床上的應用需進一步深入研究。 關于辣木多糖提取方法及含量的測定 苯酚一硫酸法與蒽酮 硫酸法測定多糖含量的實驗原理基本一致，在文獻 報道 中多糖含量的測定一般采用的都是苯酚 硫酸 法。苯酚 硫酸法的實驗原理為多糖在濃硫酸的作用下水解生成單糖，并迅速脫水成醛，然后與苯酚縮合生成有色化臺物，用分光光度法測定其含量 .本法簡單快速，靈敏度高，顯色穩(wěn)定 ， 重現(xiàn)性好。本實驗首先采用 80％乙醇處理樣品，消除了親脂性雜質、單糖、低聚糖及甙類等成分的干擾，結果可靠。 本研究結果表明，英東生態(tài)園 辣木 種植地的辣木葉換算因子為 ，張濤等 采用苯酚一硫酸法測定辣木葉中多搪?lián)Q算因子為，陳瑞嬌、彭珊珊等 采用 葸酮 硫酸比色法測定辣木葉中多糖換算因子為 ，其測定結果與本研究有較大差異，原因可能與測定方法、辣木產地、辣木葉采集時間、采集部位等因素有關。準確原因還有待進一步研究。 常規(guī)提取植物多搪的方法往往是先用 95％乙醇或甲醇加熱回流提取以除去單糖、低聚糖、甙類等干擾性成分，然后再加水多次抽提其中的多糖類成分。本實驗在提取過程中發(fā)現(xiàn)，如果先加醉回流除雜，再水提則極容易 造成其中的多糖類成分解聚，醇沉時沉淀析出較少甚至沒有㈣。因此，在辣木多塘的提取中應避免長時間高溫抽提 。 最適采用常溫乙醇港漉除雜 .提取液需減壓濃縮。提取時間不宜太長，一般常規(guī)提取為每次 l～ 2h， 造成 辣木 多糖容易解聚的原因可能是其分子量較小的緣故，根據(jù)文獻報道，分子量較小的多糖組分在水溶液系統(tǒng)中的溶解度和聚結穩(wěn)定性較同類大分子量多 糖 優(yōu)越 ， 而在醇等有機溶劑中則相反。 在提取分離多糖過程中應注意外部因素對其生物活性的影 響。多糖鏈是由單糖殘基通過 O醚鍵來連接，自由度與柔性較大，加之多糖鏈上自由羥基很多 ， 易形成氫鍵 ， 使糖鏈間相互締合 。 因此對多糖提取分離過程產生一定的影響。多糖的空問結構與生物活性密切相關，因糖鏈的柔性大和締合性導致易變性，引起構象變化從而影響生物活性 。 溫度、 pH 值、金屬離子和變性荊等能引起構象發(fā)生顯著的變化 ， 當然在一定范圍內去除這些因素也易復性。因此在分離提取時必須考慮提取劑、沉淀劑、溫度、pH 等因素的影響，如稀酸提取時間宜短，溫度不超過 60℃，以肪止糖苷鍵斷裂 ： 而多糖樣品脫水干燥時。溫度稍高則變性，喪失或減低水溶性，影響生物活性。 植物多糖作為免疫增強劑己引起人們的廣泛關注，臨床用于糖屎病和腫瘤病人 的 治療己取得較好療效。 辣木 多糖含量高。推測辣木多糖具有廣泛的應用前景 。 今后應對辣木多糖的藥理功效等作進一步深入研究 。 關于辣木總黃酮含量的影響因素 辣木總黃酮含量器官 間 的差異很大，總黃酮含量最高的是花柄 ， 可達 6 31％；較高的是葉、花和葉柄 ： 根中的總黃酮含量最低 ， 只有 ％?？傸S酮含量最高和最低的器官相差達近 12 倍。因此，以提取辣木黃酮為目的是要注意原材料器官的選擇 ， 葉片是辣木的重要產品器官之一，葉片中的總黃酮含量僅次于花柄，可達 %。從葉片中提取黃酮是要注意選擇 45d 左右的壯齡葉， 擴展中 的幼葉和開始老化的葉黃酮含量都會下降。 在研究辣木黃酮含量和環(huán)境因素的關系時我們發(fā)現(xiàn)，凡是使辣木生長速度加快的條件都會引起黃酮含量的降低。如快速生長的幼葉的黃酮含量低于接近成熟的壯齡葉；最適于生長的季節(jié) 9月份的黃酮含量低于生長趨于停頓的 11 月份；不施肥的低肥力水平管理區(qū)的黃酮含量低于施肥的高肥力水平管理區(qū) 。 這些結果表明，黃酮在 辣木 體內的合成速度和辣木的生長速度不成比例，也就是說，緩慢的生長更有利于 辣木 黃酮的積累。所以在以獲得黃酮為目的的辣木栽培時 .為了追求最大的經(jīng)濟效益，要兼顧生物量和黃酮含量兩個方面。既不 能片面追求生物量的最大化，也不能片面追求黃酮含量的最大化。應該追求單位面積生物量乘以黃酮含量的最大化。 關于辣木多糖含量的影響因素 辣木多糖含量的器官問差異也很大。多糖含量在不同器官的分布與黃酮明顯不同，多糖含量最高的器官是根，可達 %，顯著高于其他器官 ， 而根卻是黃酮 含量 最低的器官 ： 辣木多塘含量較高的器官是花、果實和葉片 ： 葉柄中的多糖含量最少，只有％，與其他器官差異極顯著。多糖含量最高和最低的器官相差達 倍，沒有黃酮的差異大。 辣木多糖含量與葉齡、采收期、施肥水平的關系與黃酮一致，即凡是生長速度快的時期或栽培措旃，辣木所古的多糖含量都比較低 ： 生長趨緩或肥力永平較低對，辣木多糖含量較高。因此， 以獲得多糖為目的的辣木栽培除考慮不同器官的多糖含量外 。 生物產量和多糖含量兩個因素也要兼顧。 賀玉林等對黨參質量變異的研究表明，黨參不同產地、不同加工方式和生長年限的多塘含量不同 .其質量也有所差異 。 由于多糖的構成成分和大小的不同種類也比較多，推測不同葉齡、不同采收期、不同管理水平、不同器官的多糖種類也可能有差異 。關于辣木多糖的種類、分子量、功效以及它們與環(huán)境、栽培條件的關系等問題都有待進一步研究。 5 結論 影響辣木總黃酮含量的因素和大小為 ： 提取次數(shù) 提取溫度 乙醇用量 提取時間 .通過單因素試驗和正交試驗優(yōu)選得辣木總黃酮提取的最佳條件為；用 70%的乙醇作為提取溶劑，以 20倍的用量 。 在 80℃的水浴條件下，提取 3 次，每次 提取條件下，辣木總黃酮量為 %通過實驗反復驗證此條件是有效的。 影響辣木多糖 含量 的因素和大小為 ： 提取次數(shù) 提取時間 溶劑用量 提取溫度。通過單因素試驗和正交試驗優(yōu)選的辣木多耱提取的最佳條件為 ： 以 15倍的溶劑用量 .在 90℃ 水浴條件下，提取 3 次 。 每次 ， 辣木 多糖量為 ％。并通過實驗反復驗證此條件是有效的。 不同葉齡葉片的 辣木 有效成分含量為 ： 隨著葉齡的增長，辣木葉片的總黃酮含量呈不規(guī)律變化，簸木葉片的多糖含量呈遞 增趨勢。當葉齡增長到 45d 時，辣木葉片的有效成分含量達最高，其中總黃酮含量為 ％ ， 多糖含量為 ％ 。 不同器官的辣木有效成分含量變化趨勢為；總黃酮含量依次為花柄 葉 花 葉柄 莖 果 果莢 種子 根 ， 其中花柄中的總黃酮含量最高，可達 ％，根中的黃酮含量最少，只有％，總黃酮含量最高和最 低的器官相差達近 12 倍 ； 多糖含量依次為根 花 果 葉 花柄 種子 果莢 莖 葉柄 .根中多糖含