【正文】 地安排與分析多因素試驗(yàn)的方法 實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)：1) 根據(jù)料液比用一定體積的水在一定溫度下加熱一定時(shí)間。2) 抽濾，得提取液。3) 加入過(guò)量Ca (OH)2飽和溶液，靜置沉淀一小時(shí)，得到沉淀，真空抽濾，得到濾餅。4) 濾餅經(jīng)36％鹽酸酸解，用醋酸酯類有機(jī)溶劑萃取。5) 真空干燥，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中把浸提溫度A、浸提料液比B、浸提溫度C作為茶樹(shù)花多酚提取的三個(gè)主要因素，每個(gè)因素比較三個(gè)不同的條件。據(jù)正交試驗(yàn)表進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，得出9組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，再根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)的分析方法比較試驗(yàn)所得出的數(shù)據(jù)，結(jié)合實(shí)際，總結(jié)最佳工藝條件，用最佳工藝條件反復(fù)試驗(yàn)，得出產(chǎn)品，計(jì)算產(chǎn)率。在一定pH條件下，酒石酸亞鐵與茶樹(shù)花多酚類物質(zhì)形成藍(lán)紫色的絡(luò)合物，在波長(zhǎng)540 nm處出現(xiàn)最大吸收，在適當(dāng)?shù)臐舛确秶鷥?nèi)，茶樹(shù)花多酚的量與呈色的深淺成正比，可用分光光度法定量。實(shí)驗(yàn)過(guò)程4實(shí)驗(yàn)過(guò)程 有機(jī)綠茶茶花、布氏漏斗、抽濾機(jī)、分液漏斗、恒溫水浴箱、干燥箱、722型可見(jiàn)分光光度計(jì)、分析天平、試劑Ca(OH)鹽酸、乙酸乙酯、酒石酸顯色溶液、pH=—正交實(shí)驗(yàn)水提法(1)實(shí)驗(yàn)原理花多酚在常溫下呈淺黃或淺綠色粉末，易溶于溫水(40℃～80℃)和含水乙醇中；穩(wěn)定性極強(qiáng)，在pH值4～250℃左右的環(huán)境中，在三價(jià)鐵離子下易分解?；ǘ喾右兹苡谒坝袡C(jī)溶液，可用沸水先將花多酚從茶花中提取出來(lái)，沉淀法的原理是利用花多酚在一定的介質(zhì)條件下可以和某些物質(zhì)絡(luò)合形成沉淀物的性質(zhì)，使其從浸提液中分離出來(lái)，從而與水溶液中咖啡堿、單糖、氨基酸等組分分離，來(lái)提取花多酚。(2)水提法的正交實(shí)驗(yàn)正交試驗(yàn)法就是利用一套規(guī)格化的表(正交表)來(lái)安排試驗(yàn)方案，使得試驗(yàn)次數(shù)盡可能地少；并通過(guò)對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的簡(jiǎn)單分析，有助于在復(fù)雜的影響因素中抓住主要因素，從而找出較好的實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)選擇浸提溫度A、料液比B、提取時(shí)間C，作為花多酚提取的三個(gè)主要因素，見(jiàn)表1和表2。表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表水平因素溫度/℃ A料液比 B時(shí)間/min C1801:20202851:30303751:4040表2 三因素三水平正交實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)號(hào)因素ABC11（80℃）1（1:20）1（20min）21（80℃）2（1:30）2（30min）31（80℃）3（1:40）3（40min）42（85℃）1（1:20）2（30min）52（85℃）2（1:30）3（40min）62（85℃）3（1:40）1（20min）73（75℃）1（1:20）3（40min）83（75℃）2（1:30）1（20min）93（75℃）3（1:40）2（30min） 提取花多酚用分析天平精確稱取有機(jī)綠茶茶花5g，然后用100ml的沸水浸泡并放入80℃恒溫水浴中，放置20min，然后用漏斗過(guò)濾，取其濾液；將1ml濾液用4ml蒸餾水稀釋，再取1ml稀釋的溶液于25ml容量瓶中，加入4ml蒸餾水，5ml酒石酸顯色試劑，；波長(zhǎng)在540nm測(cè)定其分光度；進(jìn)行不同因素的9組實(shí)驗(yàn)，得出數(shù)據(jù)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線圖進(jìn)行比較，計(jì)算出提取率，確定最佳提取因素；在最佳因素條件下進(jìn)行水提取，得到濾液，加入過(guò)量Ca(OH)2飽和溶液，靜置沉淀1小時(shí)，取沉淀；然后用布氏漏斗抽濾，得到濾餅；濾餅經(jīng)36％鹽酸酸解，用乙酸乙酯萃取，經(jīng)干燥得到咖啡因含量在3％以下的高純度花多酚?！剖醽嗚F分光光度法(1) 檢測(cè)原理在一定pH條件下，酒石酸亞鐵與茶樹(shù)花多酚類物質(zhì)形成藍(lán)紫色的絡(luò)合物，在波長(zhǎng) 540 nm處出現(xiàn)最大吸收，在適當(dāng)?shù)臐舛确秶鷥?nèi)，茶樹(shù)花多酚的量與呈色的深淺成正比，可用分光光度法定量。(2) 配制試劑酒石酸亞鐵溶液：（FeSO47H2O）(C4H4O6NaK4H2O），混合后加蒸餾水溶解，定容到100ml。pH ： Na2HPO4 KH2PO4，混合后加蒸餾水溶解，定容到250ml。(3) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，用蒸餾水溶解移入250ml的容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻。、 50ml容量瓶中，各加水至10ml，再加酒石酸亞鐵溶液10ml，混勻后用1㎝比色皿，以空白試劑作參比，于波長(zhǎng)540nm處測(cè)定吸光度 A，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 結(jié)果與討論 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的記錄數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)表3和圖4。表3 標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度濃度(mg/mL)吸光度A00圖4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 正交實(shí)驗(yàn)，測(cè)定其吸光度，根據(jù)所測(cè)吸光度再?gòu)臉?biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品的含量。數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。表4 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào)因素花多酚含量mg/LABC11（80℃）1（1:20）1（20min）21（80℃）2（1:30）2（30min）31（80℃）3（1:40）3（40min）42（85℃）1（1:20）2（30min）52（85℃）2（1:30）3（40min）62（85℃）3（1:40）1（20min）73（75℃）1（1:20）3（40min）83（75℃）2（1:30）1（20min）93（75℃）3（1:40）2（30min）k1k2k3R（k值為某因素取某一水平時(shí)相應(yīng)三個(gè)實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值。R為極差，是k1，k2，k3中最大值與最小值之間差的絕對(duì)值，每一列算出的極差大小，反映了該列所排因素選取的水平變動(dòng)對(duì)指標(biāo)影響的大小。）1) 各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響大小從表4可以看出：R值的大小決定了各因素作用的大小。第一列A較大，第三列C較小，這反映了因素A水平變動(dòng)時(shí)，指標(biāo)波動(dòng)最大，因素C的水平變動(dòng)時(shí)，指標(biāo)波動(dòng)很小。根據(jù)R值，各因素的影響順序?yàn)?ABC，可以判斷溫度對(duì)花多酚浸出量的影響最大。2) 每個(gè)因素水平的確定這應(yīng)該由k值決定，k值越大最終產(chǎn)率與含量越高，所以A因素取A1，B因素應(yīng)該取B3，C因素應(yīng)該取C2，因此從表4得出結(jié)論，要得到最高含量的最佳實(shí)驗(yàn)條件是A1 B3 C2。3) 每個(gè)因素的各水平對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響大小1. 提取溫度為75℃、80℃、85℃。當(dāng)提取溫度從75℃提高到80℃時(shí)含量有所提高，而提高到85℃時(shí)含量反而有所下降。所以最佳提取溫度應(yīng)該為80℃。2. 物料比為1:20，1:30，1:40?；ǘ喾雍渴请S著物料比增加而增加，所以最佳物料比是1:40。3. 提取時(shí)間是20min，30min，40min。當(dāng)時(shí)間從20min增加到30min時(shí)含量有所提高，而提高到40min時(shí)含量反而有所下降。所以最佳提取時(shí)間是30min。綜上所述，通過(guò)正交試驗(yàn)的優(yōu)化，并通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析，可得出提取花多酚的最佳提取溫度為80℃，最佳物料比是1:40，最佳提取時(shí)間為30min。在溫度為80℃，物料比是1:40，提取時(shí)間為30min因素條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，超過(guò)其他各組花多酚含量。所以，溫度80℃，物料比1:40，提取時(shí)間30min確實(shí)為最佳提取因素。展望5展望多酚不僅是一種新型的天然抗氧化劑，具有保鮮防腐，無(wú)毒副作用，食用安全。有防降解的作用，還具有明顯的抗衰老、消除人體過(guò)剩的自由基，去脂減肥，降低血糖、血脂和膽固醇，預(yù)防心血管疾病，抑制腫瘤細(xì)胞等藥理功能，防治艾滋病，防齲護(hù)齒，抑制口臭，有助于預(yù)防和治療輻射傷害，有助于抑制和抵抗病毒菌，有助于美容護(hù)膚，抗過(guò)敏，防腹瀉，抗流感，增強(qiáng)免疫力，解煙毒等多種功效。茶有其鮮明的抗衰老，保健作用，“飲茶”也已成為一種潮流。從茶葉中提取的天然產(chǎn)物花多酚因其對(duì)人體有益，同時(shí)具有廣泛的藥理功能，近年來(lái)受到廣泛的關(guān)注。開(kāi)發(fā)出在食品、油脂、日用化工中的作用后，人們一直致力于研究它在醫(yī)藥衛(wèi)生保健方面的新作用。21世紀(jì)是生物工程的世紀(jì)，人們不斷呼吁綠色環(huán)保，特別是在促進(jìn)人體健康天然藥物領(lǐng)域，提出了更高的要求?；ǘ喾忧∏】梢詽M足人們的這一要求。目前日本、美國(guó)、中國(guó)等都在研究花多酚，我國(guó)是茶葉的故鄉(xiāng)，茶葉資源豐富。但技術(shù)相對(duì)滯后，大多進(jìn)行粗提取和粗加工，花多酚的精加工特別是在醫(yī)藥中的應(yīng)用還處于研究開(kāi)發(fā)階段。相信隨著人們對(duì)花多酚研究的不斷深入，花多酚將日益更好地發(fā)揮它應(yīng)有的作用。尤其是老茶葉、茶葉枝條、茶樹(shù)根以及茶葉生產(chǎn)過(guò)程中的副產(chǎn)品以及下腳材料等沒(méi)有多少市場(chǎng)價(jià)值的為可再生綠色資源，如果進(jìn)行深加工為其它高附加值產(chǎn)品，不僅可以得到較高的利潤(rùn)，而且對(duì)于資源的成分利用也有著深遠(yuǎn)的意義。花多酚是一類具有多酚羥基的物質(zhì)，在一定條件下可與金屬離子發(fā)生顯色反應(yīng)用于定量，酒石酸亞鐵比色分光光度法是測(cè)定花多酚含量的國(guó)標(biāo)方法。在利用茶葉為原料提取制備粗花多酚的工藝中，溶劑提取法和沉淀法是使用最廣泛的傳統(tǒng)提取方法。但大量的茶葉廢料和其加工下腳料沒(méi)有得到很好的利用，造成了巨大的損失。其提取率一般在15%以下，而茶葉花多酚的含量一般為20%～30%，有的高達(dá)30%以上，由此可見(jiàn)其提取率還是較低的。單一的浸提方法所獲得的花多酚的得率都較低，不能高效地利用茶葉中的花多酚，是對(duì)資源的一種浪費(fèi)。同時(shí)，隨著對(duì)花多酚的抗氧化、防突變等功能的認(rèn)識(shí)，對(duì)高純度花多酚產(chǎn)品的需求也會(huì)越來(lái)越多，如何進(jìn)一步提高得率是花多酚提取過(guò)程中面對(duì)的一個(gè)重要問(wèn)題。目前國(guó)內(nèi)外花多酚粗品的提取的方法主要有：溶劑萃取法、離子沉淀法、樹(shù)脂吸附分離法、超臨界流體萃取法、超聲波浸提方法、微波浸提法等等。在這些提取花多酚的方法中，每種方法都有它各自的針對(duì)性和使用范圍，使用時(shí)要根據(jù)各自的情況而定。本文采用的是溶劑提取法，近年來(lái)對(duì)花多酚含量測(cè)定方法也很多，光度法測(cè)定花多酚常用的有酒石酸亞鐵比色法、近紅外光譜法、差式分光光度法、三波長(zhǎng)光度法等。希望更多的人進(jìn)行多酚類物質(zhì)提取工藝的優(yōu)化，從而用最優(yōu)的條件得到盡可能多的產(chǎn)品。參考文獻(xiàn)[1] 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在此，我還要感謝在一起愉快的度過(guò)大學(xué)生活的應(yīng)用化學(xué)60802班的同學(xué)們，正是由于你們的陪伴和支持，才使我的大學(xué)生活豐富多彩、意義非凡，為我今后的人生道路打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。在論文即將完成之際，我的心情無(wú)法平靜，從開(kāi)始進(jìn)入課題到論文的順利完成，有多少可敬的師長(zhǎng)、同學(xué)、朋友給了我無(wú)言的幫助，在這里請(qǐng)接受我誠(chéng)摯的謝意!最后我還要感謝培養(yǎng)我長(zhǎng)大含辛茹苦的父母，謝謝你們！