【正文】 DPPH清除能力的VC當量由圖43可知，隨乙醇液濃度從0%增加到40%時，大青葉提取液對DPPH自由基的清除能力呈快速上升趨勢；乙醇濃度為40%~80%時，清除能力較高，清除能力達到78%~84%，且清除能力呈緩慢增長趨勢且差異不大。乙醇濃度為40%清除能力最高， %，清除能力越強說明其抗氧化活性越強，因此乙醇濃度為40%時，大青葉提取液的抗氧化活性最強；當提取液濃度進一步增加時，清除能力急劇下降。（2）超聲時間對DPPH自由基清除能力的影響圖45：超聲時間對DPPH自由基的清除能力圖46：超聲時間對DPPH清除能力的VC當量由圖45可知，隨著超聲時間的延長大青葉提取液對DPPH清除能力先增大后減小。在20 min~80 min時，清除能力呈快速上升的趨勢；到80min~120 min時清除能力較高，超聲時間為80min時清除能力達到最高，% 。（3）超聲溫度對DPPH自由基清除能力的影響圖47：超聲溫度對DPPH自由基的清除能力圖48：超聲溫度對DPPH清除能力的VC當量 由圖47可知，隨著溫度的升高大青葉提取液對DPPH清除能力先增大后減小。在超聲溫度為30℃~60℃時，清除能力呈快速增大的趨勢。超聲溫度為60℃~80℃時清除能力較高且差異不大，清除能力最高達到79%左右。（4）料液比對DPPH自由基清除能力的影響圖49：料液比對DPPH自由基的清除能力圖410：料液比對DPPH清除能力的VC當量 由圖49可知，隨著料液比的增大，大青葉提取液對DPPH清除能力先增大后減小。當料液比為1:10~1:30時清除能力呈上升趨勢；當料液比為1: 30時清除能力最高， %；料液比繼續(xù)增大后，清除能力呈急劇下降趨勢。 總結測定大青葉提取液對DPPH清除能力，可知乙醇濃度因素對大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果非常顯著，說明乙醇濃度是主要影響因素；而超聲時間、超聲溫度和料液比對大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果明顯，說明這三個因素起是次要影響因素；并且發(fā)現(xiàn)當測定的大青葉總黃酮含量越大時，對DPPH清除能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測大青葉中起抗氧化活性的物質主要是黃酮類化合物。說明總黃酮類成分的含量與其抗氧化活性成正比，具有較好的一致性。+自由基能力的測定ABTS在脂溶性和水溶性的溶劑中均可適用，并且方法與DPPH一樣的簡便可靠，因而也是一種廣泛使用測定抗氧化能力的方法, ABTS最初由Miller發(fā)明，當時使用的方法為在ABTS存在的情況下，由過氧化氫激活高鐵肌紅蛋白。后來這種方法由Re改進，采用過硫酸鉀與ABTS形成藍綠色的生色基團，加入抗氧化劑后，溶液顏色變淺，變淺程度與抗氧化劑的清除自由基能力成正比例.該方法是以這種水溶性的自由基引發(fā)劑為顯色劑。ABTS與過硫酸鉀反應生成穩(wěn)定的藍綠色陽離子自由基ABTS+，向其中加入被測物質，如果該物質中存在抗氧化成分，則該物質會與ABTS+發(fā)生反應而使反應體系褪色，然后在ABTS+這種自由基的最大吸光波長下(一般選擇734nm) 檢測吸光度的變化來反映物質的抗氧化能力。、藥品及試劑 實驗儀器ALZO4型電子分析天平：上海梅特勒托利多儀器有限公司。pH計：上海梅特勒托利多儀器有限公司。723可見分光光度計：上海菩華科技儀器有限公司。DK512型電熱恒溫水浴鍋：上海森信實驗儀器有限公司。容量瓶(250mL、100mL、25mL)、比色管(10mL)。燒杯、移液管、吸耳球。ABTS[2,2azinobis (3ethylbenzthiazoline6sulfpnic acid)，即2,239。聯(lián)氮雙(3乙基苯并噻唑啉6磺酸)]VC（Ascrobic acid，維生素 C，抗壞血酸）為分析純；無水乙醇，蒸餾水, 高硫酸鉀+測定 ABTS+自由基的配制參考Thoo等的方法略加修改，用無水乙醇定容，搖勻，濃度7mmol/L；7mmol/L ABTS+，在室溫、避光黑暗的條件下靜置過夜反應12~16h，形成ABTS+自由基儲備液。該儲備液在室溫，避光的條件下穩(wěn)定。用前用無水乙醇稀釋成工作液，（177。），再裝入棕色試劑瓶中，放入冰箱4℃進行冷藏，以備用。⑴參照品VC標準溶液的制備及測試，分別量8ml至10ml的比色管中用無水乙醇定容至刻度線，、、。+，反應30min,在734nm測出吸光值，用無水乙醇代替待測液作為對照，用無水乙醇作空白，重復三組。 清除率=[(AcAi)/Ac]100% 式中，Ac： mL 無水乙醇加 ABTS+ 自由基溶液的吸光度； Ai： mL 待測液加 ABTS+自由基溶液的吸光度。⑵測試數(shù)據(jù)及標準曲線的繪制表51：VC標準曲線測定數(shù)據(jù)C（umol/ml）吸光度清除率/%0 1 2 3 4 5 6 7 8 以吸光度A 為縱坐標,濃度c為橫坐標,繪制標準曲線。用最小二乘法進行線性擬合,得c與A 的線性回歸方程以及相關系數(shù)R2。圖51：VC含量與吸光度的關系圖52：VC含量與吸光度的關系取提液4ml至10ml的比色管中用60%。,分別置于10mL 試管中，再分別加入配置好的ABTS+,搖勻，反應30min后，分別在734nm處測定其吸光度。代入標準曲線回歸方程可得濃度數(shù)據(jù)（以VC為參比）,三次結果取平均值。經(jīng)換算后得樣品自由基清除率和當量。+自由基能力的影響（1）乙醇濃度對清除ABTS+自由基能力的影響圖53：乙醇濃度對清除ABTS+自由基能力圖54：乙醇濃度對清除ABTS+自由基能力的VC當量 由圖53可知，隨乙醇液濃度從0%增加到40%時，大青葉提取液對清除ABTS+自由基能力呈快速上升趨勢；乙醇濃度為40%~80%時，清除能力較高，且清除能力呈緩慢增長趨勢且差異不大。乙醇濃度為40%清除能力最高， %，清除能力越強說明其抗氧化活性越強，因此乙醇濃度為40%時，大青葉提取液的抗氧化活性最強；當乙醇液濃度進一步增加時，清除能力急劇下降。（2）超聲時間對清除ABTS+自由基能力的影響圖55：超聲時間對清除ABTS+自由基能力圖56：超聲時間對清除ABTS+自由基能力的VC當量由圖55可知，隨著超聲時間的延長大青葉提取液對清除ABTS+自由基能力先增大后減小。在20 min~100 min時，清除能力呈上升的趨勢；到80min~100 min時清除能力達到較高且相差不大，清除能力為87~88% ；隨著時間的繼續(xù)延長清除能力呈急劇下降的趨勢。（3）超聲溫度對清除ABTS+自由基能力的影響圖57：超聲溫度對清除ABTS+自由基能力圖58：超聲溫度對清除ABTS+自由基能力的VC當量由圖57可知，隨著溫度的升高大青葉提取液對清除ABTS+自由基能力先增大后減小。在超聲溫度為30℃~60℃時，清除能力呈上升的趨勢。超聲溫度為60℃時清除能力最高，%左右；隨著溫度的繼續(xù)上升清除能力呈下降的趨勢。 （4）料液比對清除ABTS+自由基能力的影響圖59：料液比對清除ABTS+自由基能力圖510：料液比對清除ABTS+自由基能力的VC當量由圖59可知，隨著料液比的增大，大青葉提取液對清除ABTS+自由基能力先增大后減小。當料液比為1:10~1:30時清除能力呈上升趨勢；當料液比為1: 30時清除能力最高；料液比繼續(xù)增大后，清除能力呈下降趨勢。 總結測定大青葉提取液對清除ABTS+自由基能力，可知乙醇濃度和超聲溫度因素對大青葉提取液清除ABTS+自由基能力影響效果非常顯著，說明這兩個因素是主要影響因素；而超聲時間、料液比對大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果一般，說明這兩個因素起是次要影響因素；并且發(fā)現(xiàn)當測定的大青葉總黃酮含量越大時，對清除ABTS+自由基能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測大青葉中起清除自由基的物質主要是黃酮類化合物。以上實驗看出，在單因素實驗條件下，分析測定的總黃酮含量、總酚含量、抗DPPH、抗ABTS+ 結果，確定大青葉總黃酮提取的最佳提取工藝條件為當乙醇濃度為40%，超聲波作用時間為80min，超聲溫度為60℃，料液比為1:30。此條件下，大青葉提取物的總黃酮得率、總酚得率、清除DPPH自由基的清除率、清除ABTS+自由基的清除率都很明顯的提高。⑴大青葉總黃酮含量測定結果小結分析測定大青葉總黃酮的含量，發(fā)現(xiàn)乙醇濃度和超聲溫度對大青葉總黃酮提取率影響效果非常顯著，說明這兩個因素對大青葉總黃酮提取率是主要影響因素；而超聲溫度對大青葉總黃酮提取率影響效果明顯，說明超聲時間對大青葉總黃酮提取率是次要影響；料液比對大青葉總黃酮提取率效果不明顯，說明料液比對大青葉總黃酮的提取率影響不大。通過總黃酮的提取工藝的優(yōu)化，%%，優(yōu)化效果顯著。⑵測定大青葉總酚含量結果總結分析測定大青葉總酚含量結果可知，乙醇濃度和超聲溫度對大青葉總酚提取率影響效果非常顯著，說明這兩個因素對大青葉總酚提取率起主要影響因素；而超聲溫度和料液比對大青葉總黃酮提取率影響效果一般，說明這兩個因素對大青葉總酚提取率起到次要影響。并發(fā)現(xiàn)總黃酮提取率和總酚提取率具有一致性，即總黃酮提取量率時總酚的提取率也高，由此推測大青葉中總酚類化合物主要是黃酮類化合物。通過單因素實驗的優(yōu)化過程，%%，優(yōu)化效果顯著。⑶測定大青葉清除DPPH自由基能力的測定分析測定大青葉提取液對DPPH自由基清除能力結果，可知乙醇濃度因素對大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果非常顯著，說明乙醇濃度是主要影響因素；而超聲時間、超聲溫度和料液比對大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果明顯，說明這三個因素起是次要影響因素；通過單因素實驗的優(yōu)化過程，大青葉清除DPPH%%，優(yōu)化效果顯著。并且發(fā)現(xiàn)當測定的大青葉總黃酮含量越大時，對DPPH清除能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測大青葉中起抗氧化活性的物質主要是黃酮類化合物。說明總黃酮類成分的含量與其抗氧化活性成正比，具有較好的一致性。⑷測定大青葉提取液清除ABTS+自由基能力的測定分析測定大青葉提取液對清除ABTS+自由基能力結果，可知乙醇濃度和超聲溫度因素對大青葉提取液清除ABTS+自由基能力影響效果非常顯著，說明這兩個因素是主要影響因素；而超聲時間、料液比對大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果一般，說明這兩個因素起是次要影響因素；并且發(fā)現(xiàn)當測定的大青葉總黃酮含量越大時，對清除ABTS+自由基能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測大青葉中起清除自由基的物質主要是黃酮類化合物。通過單因素實驗的優(yōu)化過程，大青葉提取液清除ABTS+%%，優(yōu)化效果顯著。⑸相關性分析用Excel軟件中的CORREL函數(shù)對實驗的中總黃酮得率、總酚得率、清除DPPH自由基的清除率、清除ABTS+自由基的清除率四個指標進行相關性分析。表61：相關性分析表乙醇濃度因素超聲時間因素總酚得率%總黃酮得率%ABTS+清除率%總酚得率%總黃酮得率%ABTS+清除率%總黃酮得率%ABTS+清除率%DPPH清除率%超聲溫度因素料液比因素總酚得率%總黃酮得率%ABTS+清除率%總酚得率%總黃酮得率%ABTS+清除率%總黃酮得率%ABTS+清除率%DPPH清除率%由表61可知，活性成分總黃酮總酚含量與抗氧化活性具有正相關性。 DPPH和ABTS+自由基的清除能力在考察的4個因素時皆呈正相關性，推測具有DPPH和ABTS+自由基清除活性的可能是同一類活性成分；在料液比因素下，黃酮和總酚含量與抗氧化活性皆呈負相關或極弱相關，說明雖然隨著料液比的增加抗氧化物質傳遞，但隨著提取時間和料液比達到平衡后，黃酮和酚類成分便開始分解。致謝 本論文是在材料與化工學院化工系徐靜老師的悉心指導下完成的，從論文的選題、文獻的查閱、試驗方案的設計、實驗結果的分析討論直到論文的撰寫都傾注了徐老師的極大心血。這幾個月的理論知識學習和試驗階段都得到了徐老師很多的關心和幫助。徐老師淵博的知識，嚴謹?shù)闹螌W態(tài)度，忘我的敬業(yè)精神和親切隨和的態(tài)度，都給了我很大的影響，使我受益非淺。在此，謹向我的指導老師徐靜老師表示最誠摯的感謝和崇高的敬意!在論文試驗過程中，應用化學系梁振益老師給予了熱心指導和幫助，在此向他表示衷心的感謝!另外，在試驗過程中，周婧師姐和劉鳳霞、夏家燕等同學也給予了很大的幫助，在此謹向各位表示最真摯的感謝!我要特別感謝我的家人多年來對我學業(yè)上的理解、支持、關心和無