【正文】 DPPH清除能力的VC當(dāng)量由圖43可知，隨乙醇液濃度從0%增加到40%時(shí)，大青葉提取液對(duì)DPPH自由基的清除能力呈快速上升趨勢(shì)；乙醇濃度為40%~80%時(shí)，清除能力較高，清除能力達(dá)到78%~84%，且清除能力呈緩慢增長(zhǎng)趨勢(shì)且差異不大。乙醇濃度為40%清除能力最高， %，清除能力越強(qiáng)說(shuō)明其抗氧化活性越強(qiáng)，因此乙醇濃度為40%時(shí)，大青葉提取液的抗氧化活性最強(qiáng)；當(dāng)提取液濃度進(jìn)一步增加時(shí)，清除能力急劇下降。（2）超聲時(shí)間對(duì)DPPH自由基清除能力的影響圖45：超聲時(shí)間對(duì)DPPH自由基的清除能力圖46：超聲時(shí)間對(duì)DPPH清除能力的VC當(dāng)量由圖45可知，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)大青葉提取液對(duì)DPPH清除能力先增大后減小。在20 min~80 min時(shí)，清除能力呈快速上升的趨勢(shì)；到80min~120 min時(shí)清除能力較高，超聲時(shí)間為80min時(shí)清除能力達(dá)到最高，% 。（3）超聲溫度對(duì)DPPH自由基清除能力的影響圖47：超聲溫度對(duì)DPPH自由基的清除能力圖48：超聲溫度對(duì)DPPH清除能力的VC當(dāng)量 由圖47可知，隨著溫度的升高大青葉提取液對(duì)DPPH清除能力先增大后減小。在超聲溫度為30℃~60℃時(shí)，清除能力呈快速增大的趨勢(shì)。超聲溫度為60℃~80℃時(shí)清除能力較高且差異不大，清除能力最高達(dá)到79%左右。（4）料液比對(duì)DPPH自由基清除能力的影響圖49：料液比對(duì)DPPH自由基的清除能力圖410：料液比對(duì)DPPH清除能力的VC當(dāng)量 由圖49可知，隨著料液比的增大，大青葉提取液對(duì)DPPH清除能力先增大后減小。當(dāng)料液比為1:10~1:30時(shí)清除能力呈上升趨勢(shì)；當(dāng)料液比為1: 30時(shí)清除能力最高， %；料液比繼續(xù)增大后，清除能力呈急劇下降趨勢(shì)。 總結(jié)測(cè)定大青葉提取液對(duì)DPPH清除能力，可知乙醇濃度因素對(duì)大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果非常顯著，說(shuō)明乙醇濃度是主要影響因素；而超聲時(shí)間、超聲溫度和料液比對(duì)大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果明顯，說(shuō)明這三個(gè)因素起是次要影響因素；并且發(fā)現(xiàn)當(dāng)測(cè)定的大青葉總黃酮含量越大時(shí)，對(duì)DPPH清除能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測(cè)大青葉中起抗氧化活性的物質(zhì)主要是黃酮類化合物。說(shuō)明總黃酮類成分的含量與其抗氧化活性成正比，具有較好的一致性。+自由基能力的測(cè)定ABTS在脂溶性和水溶性的溶劑中均可適用，并且方法與DPPH一樣的簡(jiǎn)便可靠，因而也是一種廣泛使用測(cè)定抗氧化能力的方法, ABTS最初由Miller發(fā)明，當(dāng)時(shí)使用的方法為在ABTS存在的情況下，由過(guò)氧化氫激活高鐵肌紅蛋白。后來(lái)這種方法由Re改進(jìn)，采用過(guò)硫酸鉀與ABTS形成藍(lán)綠色的生色基團(tuán)，加入抗氧化劑后，溶液顏色變淺，變淺程度與抗氧化劑的清除自由基能力成正比例.該方法是以這種水溶性的自由基引發(fā)劑為顯色劑。ABTS與過(guò)硫酸鉀反應(yīng)生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽(yáng)離子自由基ABTS+，向其中加入被測(cè)物質(zhì)，如果該物質(zhì)中存在抗氧化成分，則該物質(zhì)會(huì)與ABTS+發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色，然后在ABTS+這種自由基的最大吸光波長(zhǎng)下(一般選擇734nm) 檢測(cè)吸光度的變化來(lái)反映物質(zhì)的抗氧化能力。、藥品及試劑 實(shí)驗(yàn)儀器ALZO4型電子分析天平：上海梅特勒托利多儀器有限公司。pH計(jì)：上海梅特勒托利多儀器有限公司。723可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海菩華科技儀器有限公司。DK512型電熱恒溫水浴鍋：上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。容量瓶(250mL、100mL、25mL)、比色管(10mL)。燒杯、移液管、吸耳球。ABTS[2,2azinobis (3ethylbenzthiazoline6sulfpnic acid)，即2,239。聯(lián)氮雙(3乙基苯并噻唑啉6磺酸)]VC（Ascrobic acid，維生素 C，抗壞血酸）為分析純；無(wú)水乙醇，蒸餾水, 高硫酸鉀+測(cè)定 ABTS+自由基的配制參考Thoo等的方法略加修改，用無(wú)水乙醇定容，搖勻，濃度7mmol/L；7mmol/L ABTS+，在室溫、避光黑暗的條件下靜置過(guò)夜反應(yīng)12~16h，形成ABTS+自由基儲(chǔ)備液。該儲(chǔ)備液在室溫，避光的條件下穩(wěn)定。用前用無(wú)水乙醇稀釋成工作液，（177。），再裝入棕色試劑瓶中，放入冰箱4℃進(jìn)行冷藏，以備用。⑴參照品VC標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備及測(cè)試，分別量8ml至10ml的比色管中用無(wú)水乙醇定容至刻度線，、、。+，反應(yīng)30min,在734nm測(cè)出吸光值，用無(wú)水乙醇代替待測(cè)液作為對(duì)照，用無(wú)水乙醇作空白，重復(fù)三組。 清除率=[(AcAi)/Ac]100% 式中，Ac： mL 無(wú)水乙醇加 ABTS+ 自由基溶液的吸光度； Ai： mL 待測(cè)液加 ABTS+自由基溶液的吸光度。⑵測(cè)試數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表51：VC標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定數(shù)據(jù)C（umol/ml）吸光度清除率/%0 1 2 3 4 5 6 7 8 以吸光度A 為縱坐標(biāo),濃度c為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。用最小二乘法進(jìn)行線性擬合,得c與A 的線性回歸方程以及相關(guān)系數(shù)R2。圖51：VC含量與吸光度的關(guān)系圖52：VC含量與吸光度的關(guān)系取提液4ml至10ml的比色管中用60%。,分別置于10mL 試管中，再分別加入配置好的ABTS+,搖勻，反應(yīng)30min后，分別在734nm處測(cè)定其吸光度。代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程可得濃度數(shù)據(jù)（以VC為參比）,三次結(jié)果取平均值。經(jīng)換算后得樣品自由基清除率和當(dāng)量。+自由基能力的影響（1）乙醇濃度對(duì)清除ABTS+自由基能力的影響圖53：乙醇濃度對(duì)清除ABTS+自由基能力圖54：乙醇濃度對(duì)清除ABTS+自由基能力的VC當(dāng)量 由圖53可知，隨乙醇液濃度從0%增加到40%時(shí)，大青葉提取液對(duì)清除ABTS+自由基能力呈快速上升趨勢(shì)；乙醇濃度為40%~80%時(shí)，清除能力較高，且清除能力呈緩慢增長(zhǎng)趨勢(shì)且差異不大。乙醇濃度為40%清除能力最高， %，清除能力越強(qiáng)說(shuō)明其抗氧化活性越強(qiáng)，因此乙醇濃度為40%時(shí)，大青葉提取液的抗氧化活性最強(qiáng)；當(dāng)乙醇液濃度進(jìn)一步增加時(shí)，清除能力急劇下降。（2）超聲時(shí)間對(duì)清除ABTS+自由基能力的影響圖55：超聲時(shí)間對(duì)清除ABTS+自由基能力圖56：超聲時(shí)間對(duì)清除ABTS+自由基能力的VC當(dāng)量由圖55可知，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)大青葉提取液對(duì)清除ABTS+自由基能力先增大后減小。在20 min~100 min時(shí)，清除能力呈上升的趨勢(shì)；到80min~100 min時(shí)清除能力達(dá)到較高且相差不大，清除能力為87~88% ；隨著時(shí)間的繼續(xù)延長(zhǎng)清除能力呈急劇下降的趨勢(shì)。（3）超聲溫度對(duì)清除ABTS+自由基能力的影響圖57：超聲溫度對(duì)清除ABTS+自由基能力圖58：超聲溫度對(duì)清除ABTS+自由基能力的VC當(dāng)量由圖57可知，隨著溫度的升高大青葉提取液對(duì)清除ABTS+自由基能力先增大后減小。在超聲溫度為30℃~60℃時(shí)，清除能力呈上升的趨勢(shì)。超聲溫度為60℃時(shí)清除能力最高，%左右；隨著溫度的繼續(xù)上升清除能力呈下降的趨勢(shì)。 （4）料液比對(duì)清除ABTS+自由基能力的影響圖59：料液比對(duì)清除ABTS+自由基能力圖510：料液比對(duì)清除ABTS+自由基能力的VC當(dāng)量由圖59可知，隨著料液比的增大，大青葉提取液對(duì)清除ABTS+自由基能力先增大后減小。當(dāng)料液比為1:10~1:30時(shí)清除能力呈上升趨勢(shì)；當(dāng)料液比為1: 30時(shí)清除能力最高；料液比繼續(xù)增大后，清除能力呈下降趨勢(shì)。 總結(jié)測(cè)定大青葉提取液對(duì)清除ABTS+自由基能力，可知乙醇濃度和超聲溫度因素對(duì)大青葉提取液清除ABTS+自由基能力影響效果非常顯著，說(shuō)明這兩個(gè)因素是主要影響因素；而超聲時(shí)間、料液比對(duì)大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果一般，說(shuō)明這兩個(gè)因素起是次要影響因素；并且發(fā)現(xiàn)當(dāng)測(cè)定的大青葉總黃酮含量越大時(shí)，對(duì)清除ABTS+自由基能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測(cè)大青葉中起清除自由基的物質(zhì)主要是黃酮類化合物。以上實(shí)驗(yàn)看出，在單因素實(shí)驗(yàn)條件下，分析測(cè)定的總黃酮含量、總酚含量、抗DPPH、抗ABTS+ 結(jié)果，確定大青葉總黃酮提取的最佳提取工藝條件為當(dāng)乙醇濃度為40%，超聲波作用時(shí)間為80min，超聲溫度為60℃，料液比為1:30。此條件下，大青葉提取物的總黃酮得率、總酚得率、清除DPPH自由基的清除率、清除ABTS+自由基的清除率都很明顯的提高。⑴大青葉總黃酮含量測(cè)定結(jié)果小結(jié)分析測(cè)定大青葉總黃酮的含量，發(fā)現(xiàn)乙醇濃度和超聲溫度對(duì)大青葉總黃酮提取率影響效果非常顯著，說(shuō)明這兩個(gè)因素對(duì)大青葉總黃酮提取率是主要影響因素；而超聲溫度對(duì)大青葉總黃酮提取率影響效果明顯，說(shuō)明超聲時(shí)間對(duì)大青葉總黃酮提取率是次要影響；料液比對(duì)大青葉總黃酮提取率效果不明顯，說(shuō)明料液比對(duì)大青葉總黃酮的提取率影響不大。通過(guò)總黃酮的提取工藝的優(yōu)化，%%，優(yōu)化效果顯著。⑵測(cè)定大青葉總酚含量結(jié)果總結(jié)分析測(cè)定大青葉總酚含量結(jié)果可知，乙醇濃度和超聲溫度對(duì)大青葉總酚提取率影響效果非常顯著，說(shuō)明這兩個(gè)因素對(duì)大青葉總酚提取率起主要影響因素；而超聲溫度和料液比對(duì)大青葉總黃酮提取率影響效果一般，說(shuō)明這兩個(gè)因素對(duì)大青葉總酚提取率起到次要影響。并發(fā)現(xiàn)總黃酮提取率和總酚提取率具有一致性，即總黃酮提取量率時(shí)總酚的提取率也高，由此推測(cè)大青葉中總酚類化合物主要是黃酮類化合物。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化過(guò)程，%%，優(yōu)化效果顯著。⑶測(cè)定大青葉清除DPPH自由基能力的測(cè)定分析測(cè)定大青葉提取液對(duì)DPPH自由基清除能力結(jié)果，可知乙醇濃度因素對(duì)大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果非常顯著，說(shuō)明乙醇濃度是主要影響因素；而超聲時(shí)間、超聲溫度和料液比對(duì)大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果明顯，說(shuō)明這三個(gè)因素起是次要影響因素；通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化過(guò)程，大青葉清除DPPH%%，優(yōu)化效果顯著。并且發(fā)現(xiàn)當(dāng)測(cè)定的大青葉總黃酮含量越大時(shí)，對(duì)DPPH清除能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測(cè)大青葉中起抗氧化活性的物質(zhì)主要是黃酮類化合物。說(shuō)明總黃酮類成分的含量與其抗氧化活性成正比，具有較好的一致性。⑷測(cè)定大青葉提取液清除ABTS+自由基能力的測(cè)定分析測(cè)定大青葉提取液對(duì)清除ABTS+自由基能力結(jié)果，可知乙醇濃度和超聲溫度因素對(duì)大青葉提取液清除ABTS+自由基能力影響效果非常顯著，說(shuō)明這兩個(gè)因素是主要影響因素；而超聲時(shí)間、料液比對(duì)大青葉提取液的DPPH清除能力影響效果一般，說(shuō)明這兩個(gè)因素起是次要影響因素；并且發(fā)現(xiàn)當(dāng)測(cè)定的大青葉總黃酮含量越大時(shí)，對(duì)清除ABTS+自由基能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測(cè)大青葉中起清除自由基的物質(zhì)主要是黃酮類化合物。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化過(guò)程，大青葉提取液清除ABTS+%%，優(yōu)化效果顯著。⑸相關(guān)性分析用Excel軟件中的CORREL函數(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)的中總黃酮得率、總酚得率、清除DPPH自由基的清除率、清除ABTS+自由基的清除率四個(gè)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。表61：相關(guān)性分析表乙醇濃度因素超聲時(shí)間因素總酚得率%總黃酮得率%ABTS+清除率%總酚得率%總黃酮得率%ABTS+清除率%總黃酮得率%ABTS+清除率%DPPH清除率%超聲溫度因素料液比因素總酚得率%總黃酮得率%ABTS+清除率%總酚得率%總黃酮得率%ABTS+清除率%總黃酮得率%ABTS+清除率%DPPH清除率%由表61可知，活性成分總黃酮總酚含量與抗氧化活性具有正相關(guān)性。 DPPH和ABTS+自由基的清除能力在考察的4個(gè)因素時(shí)皆呈正相關(guān)性，推測(cè)具有DPPH和ABTS+自由基清除活性的可能是同一類活性成分；在料液比因素下，黃酮和總酚含量與抗氧化活性皆呈負(fù)相關(guān)或極弱相關(guān)，說(shuō)明雖然隨著料液比的增加抗氧化物質(zhì)傳遞，但隨著提取時(shí)間和料液比達(dá)到平衡后，黃酮和酚類成分便開(kāi)始分解。致謝 本論文是在材料與化工學(xué)院化工系徐靜老師的悉心指導(dǎo)下完成的，從論文的選題、文獻(xiàn)的查閱、試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析討論直到論文的撰寫都傾注了徐老師的極大心血。這幾個(gè)月的理論知識(shí)學(xué)習(xí)和試驗(yàn)階段都得到了徐老師很多的關(guān)心和幫助。徐老師淵博的知識(shí)，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，忘我的敬業(yè)精神和親切隨和的態(tài)度，都給了我很大的影響，使我受益非淺。在此，謹(jǐn)向我的指導(dǎo)老師徐靜老師表示最誠(chéng)摯的感謝和崇高的敬意!在論文試驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)用化學(xué)系梁振益老師給予了熱心指導(dǎo)和幫助，在此向他表示衷心的感謝!另外，在試驗(yàn)過(guò)程中，周婧師姐和劉鳳霞、夏家燕等同學(xué)也給予了很大的幫助，在此謹(jǐn)向各位表示最真摯的感謝!我要特別感謝我的家人多年來(lái)對(duì)我學(xué)業(yè)上的理解、支持、關(guān)心和無(wú)