【正文】 病，血熱發(fā)班，壯熱不退以及血熱妄行的上部出血癥等。③鎮(zhèn)痛作用 在張慧勤等人[9]的研究報(bào)道中表明大青具有鎮(zhèn)痛作用,取體重19~25此行小白鼠33只，隨機(jī)分3組。 在《福建民間草藥》中記載大青有消炎鎮(zhèn)痛，除濕祛風(fēng)之效。OβDglucoside[6]、山大青苷。藍(lán)和大青的同名異物現(xiàn)象，還存在于我國各地的重要市場上，為了保證要安全有效，本著一藥、一物、一名的原則，建議將大青葉列為菘藍(lán)葉、馬藍(lán)葉、蓼藍(lán)葉，以此來區(qū)別大青葉。其二是陶弘景是江蘇隱居人士，因此“東境及近道”，則指江南一帶，說明大青是一種生長在南方的植物。5裂；雄蕊4枚，明顯伸出花冠外。自由基、清除ABTS自由基性質(zhì)活潑，有極強(qiáng)的氧化能力，對人體能造成極大危害，在體內(nèi)自由基和脂質(zhì)過氧化作用下能使大分子成分發(fā)生氧化變性、交聯(lián)和斷裂，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，從而引起癌癥等退變性疾病，黃酮類化合物有很好的清除自由基和抗氧化能力，對防止疾病以及人的健康有積極意義。黃酮除了具有心血管活性之外，還具有抗菌及抗病毒活性、抗菌及抗病毒活性、抗炎。+自由基能力的測定 4藥品及試劑 48 實(shí)驗(yàn)儀器 48 48能力的測定 41 DPPH 近年來， 針對黃酮類化合物的藥理活性的研究有很多。而且超聲提取技術(shù)能避免高溫高壓對有效成分的破壞。法、ABTS根皮淡黃色。 大青的藥名，最早見于《名醫(yī)別錄》。吳其濬《植物名實(shí)圖考》在《本草綱目》的基礎(chǔ)上，加以考訂說：今江西、湖南山坡所繪的圖也異常清晰，與現(xiàn)代植物分類學(xué)馬鞭草科大青一致。 3. Friedelin 39。⑴大青的傳統(tǒng)醫(yī)藥應(yīng)用在《中藥大辭典》中記載大青有防治齒痛、痢疾之效。⑵大青的現(xiàn)代作用①抗炎及殺菌作用大青的葉在贛、湘、鄂、浙、粵等省部分地區(qū)作大青葉使用，具明顯抗炎作用[8]，對痢疾桿菌、副大腸埃希菌有強(qiáng)的抑制作用，對腦膜炎球菌亦有殺菌作用。于給藥前每只小鼠測定2次，取平均值為該鼠藥前痛閾值。療效；治療23例，全部治愈，無1例死亡和后遺癥。大青葉洗眼劑的制備方法：大青葉250g,加水5000ml，煮沸1小時，過濾，濾渣再依法煮1次，合并兩次濾液，濃縮至125ml,冷卻，加乙醇375ml，混合均勻，放置24小時，濾紙過濾，回收回收乙醇煎煮至無乙醇臭味，加生理鹽水1000ml，再加防腐劑氰氧化汞使其濃度為1:500，用10%NaOH點(diǎn)pH值至7。水煎服，每日1劑[1]。如上法，一日三次，早中晚各一次[13]。黃酮類化合物的顏色與分子中是否存在苯甲酰與桂皮酰交叉共軛體系，及助色基團(tuán)（OH,OCH3）的種類，數(shù)目有關(guān)。而二氫黃酮及二氫黃酮醇等，因系非平面型分子，故排列不緊密，分子間引力降低，有利于水分子進(jìn)入，水中溶解度稍大。黃酮類化合物溶于濃硫酸中生成的鹽，常常表現(xiàn)出特殊的顏色，可用于鑒別。黃酮類化合物具有廣譜的藥理活性和較低的毒性，現(xiàn)就黃酮類化合物的主要藥理作用介紹如下。天然抗氧劑有苯酚類、黃酮類、生物堿類、靴質(zhì)類、皂昔類等。自由基的清除能力，來進(jìn)一步衡量被測物的抗氧化能力。⑶抗炎，免疫調(diào)節(jié)活性黃酮類化合物的抗炎，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)活性主要表現(xiàn)在對炎癥因子，如T細(xì)胞，B細(xì)胞，巨嗜細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞，嗜性粒細(xì)胞，肥大細(xì)胞，中性粒細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞和血小板的調(diào)節(jié)作用上。⑸內(nèi)分泌系統(tǒng)作用活性黃酮類化合物還有降血糖作用，主要表現(xiàn)在β細(xì)胞保護(hù)作用及降血糖作用。但對于是否在此類病人中運(yùn)用黃酮類化合物進(jìn)行替代治療還在爭議之中口[27] 。陳冬梅[31]在研究中發(fā)現(xiàn)苦碟子總黃酮注射液(TFS)對急性心肌梗死具有不錯的療效，能明顯降低急性心肌梗死大鼠心肌梗死區(qū)及非梗死區(qū)FFA水平，有利于改善心肌代謝，恢復(fù)心肌的能源供應(yīng)；能明顯降低急性心肌梗死大鼠血漿ET、AngⅡ及TXA2水平，增加血漿PGI2水平及PGI2／TXA2比值，保持PGI2／TXA2生理平衡，有利于擴(kuò)張血管，增加心肌供血；能在急性心肌梗死早期抑制原癌基因表達(dá)，并提高Bcl2／Bax基因表達(dá)比例，抑制p53及Fas的表達(dá)，表明其具有對抗心肌細(xì)胞凋亡作用。在對黃酮類化合物對抗心律失常的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，槲寄生黃酮(VCF)可對抗烏頭堿所引起的心律失常，并認(rèn)為其主要原理為阻斷LcaL有關(guān)[37] 。此外，有些黃酮類化合物還可作為天然甜味劑、天然色素等使用，也可開發(fā)成具有特異性功能、靶標(biāo)專一性強(qiáng)、安全性較強(qiáng)的無公害農(nóng)藥。另外，糖的結(jié)合位置不同，對苷在水中的溶解度也有一定的影響。常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、丙酮等，高濃度的醇(90%~95%)適用于提取黃酮苷元，中等濃度的醇(60%左右)適用于提取黃酮苷，提取次數(shù)一般是2~4次。酸化時需調(diào)節(jié)pH=2~3 即可，如酸度過高，酸會與黃酮類化合物生成烊鹽而溶解。一是微波輻射能穿透提取介質(zhì)，到達(dá)物料內(nèi)部，使基質(zhì)內(nèi)部溫度迅速上升，導(dǎo)致細(xì)胞破裂，細(xì)胞內(nèi)有效成分自由流出。(4)溶劑用量少(可較常規(guī)方法少50%~90%)，耗能低，無環(huán)境污染，節(jié)約成本。通過酶反應(yīng)可在較較溫和的條件下將植物組織分解，加速有效成分的釋放，還可將影響藥物制劑的雜質(zhì)如淀粉、蛋白質(zhì)、果膠等分解去除，具有專屬作用強(qiáng)、無有機(jī)溶劑消耗和環(huán)境污染、效率高等特點(diǎn)。同時還可以通過控制臨界溫度和壓力的變化，來達(dá)到選擇性提取和分離純化的目的。由于黃酮類化合物分布廣泛，所以它們具有多種藥理活性。型數(shù)控超聲波清洗器KQ3200DB。大青葉子 采摘于?？谑谢鹕娇诠珗@樣品60℃烘干粉碎機(jī)粉碎，過20目篩，裝入試劑瓶中備用。取稀釋好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作為參比溶液。V—測定時取樣體積，mL。自由基的清除率、ABTS自由基的清除率、ABTS在70℃及以下溫度條件下進(jìn)行提取時，總黃酮提取率與溫度呈正相關(guān)。圖29：料液比對大青葉總黃酮提取得率的影響圖210：料液比對大青葉提取VC為當(dāng)量的影響由圖29可知，隨著料液比的增大，總黃酮提取率差別不大，當(dāng)料液比為1: 50時提取率稍微增加了一些，總黃酮提取率最高。pH計(jì)：上海梅特勒托利多儀器有限公司。冷卻，移入250 ml容量瓶中，定容，貯于棕色瓶中，4℃冰箱保存。用最小二乘法進(jìn)行線性擬合,得c與A 的線性回歸方程以及相關(guān)系數(shù)R2。乙醇濃度為60%總酚的提取率最高，當(dāng)提取液濃度進(jìn)一步增加時，總酚的提取率呈下降趨勢，其原因可能是隨著提取溶劑乙醇極性的減小，葉綠素溶出率增加，而含有多個糖分子的黃酮苷(極性較大)溶出量減少導(dǎo)致總黃酮的提取率下降，而黃酮類物質(zhì)是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多酚類化合物（即黃酮類化合物是酚類化合物中的一種），總黃酮的提取率下降必然導(dǎo)致總酚提取率的下降。其原因可能是料液比增大后，大青葉內(nèi)多糖類物質(zhì)等其他物質(zhì)的溶解量增加，這些物質(zhì)對黃酮起到了吸附沉淀作用，從而引起總黃酮提取量下降，而總黃酮提取量下降又必然導(dǎo)致總酚提取量的下降。自由基是一種穩(wěn)定的自由基，通過檢測生物試劑對DPPH分光測定法的原理是依據(jù) DPPH723可見分光光度計(jì)：上海菩華科技儀器有限公司。溶液放入冰箱4℃進(jìn)行冷藏，以備用。用最小二乘法進(jìn)行線性擬合,得c與A 的線性回歸方程以及相關(guān)系數(shù)R2。自由基清除能力的影響圖43：乙醇濃度對DPPH清除能力的VC當(dāng)量由圖45可知，隨著超聲時間的延長大青葉提取液對DPPH在超聲溫度為30℃~60℃時，清除能力呈快速增大的趨勢。 總結(jié)測定大青葉提取液對DPPH后來這種方法由Re改進(jìn)，采用過硫酸鉀與ABTS形成藍(lán)綠色的生色基團(tuán)，加入抗氧化劑后，溶液顏色變淺，變淺程度與抗氧化劑的清除自由基能力成正比例.該方法是以這種水溶性的自由基引發(fā)劑為顯色劑。DK512型電熱恒溫水浴鍋：上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。+自由基儲備液。+ 自由基溶液的吸光度； Ai： mL 待測液加 ABTS經(jīng)換算后得樣品自由基清除率和當(dāng)量。（2）超聲時間對清除ABTS+自由基能力圖58：超聲溫度對清除ABTS+自由基能力的VC當(dāng)量由圖59可知，隨著料液比的增大，大青葉提取液對清除ABTS以上實(shí)驗(yàn)看出，在單因素實(shí)驗(yàn)條件下，分析測定的總黃酮含量、總酚含量、抗DPPH⑵測定大青葉總酚含量結(jié)果總結(jié)分析測定大青葉總酚含量結(jié)果可知，乙醇濃度和超聲溫度對大青葉總酚提取率影響效果非常顯著，說明這兩個因素對大青葉總酚提取率起主要影響因素；而超聲溫度和料液比對大青葉總黃酮提取率影響效果一般，說明這兩個因素對大青葉總酚提取率起到次要影響。%%，優(yōu)化效果顯著。清除能力影響效果一般，說明這兩個因素起是次要影響因素；并且發(fā)現(xiàn)當(dāng)測定的大青葉總黃酮含量越大時，對清除ABTS+清除率%總酚得率%總黃酮得率%ABTS DPPH在此，謹(jǐn)向我的指導(dǎo)老師徐靜老師表示最誠摯的感謝和崇高的敬意!在論文試驗(yàn)過程中，應(yīng)用化學(xué)系梁振益老師給予了熱心指導(dǎo)和幫助，在此向他表示衷心的感謝!另外，在試驗(yàn)過程中，周婧師姐和劉鳳霞、夏家燕等同學(xué)也給予了很大的幫助，在此謹(jǐn)向各位表示最真摯的感謝!我要特別感謝我的家人多年來對我學(xué)業(yè)上的理解、支持、關(guān)心和無私。+自由基的清除能力在考察的4個因素時皆呈正相關(guān)性，推測具有DPPH+清除率%DPPH通過單因素實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化過程，大青葉提取液清除ABTS清除能力也越大，而清除能力越大其抗氧化活性也越大，由此推測大青葉中起抗氧化活性的物質(zhì)主要是黃酮類化合物。通過單因素實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化過程，%%，優(yōu)化效果顯著。+ 結(jié)果，確定大青葉總黃酮提取的最佳提取工藝條件為當(dāng)乙醇濃度為40%，超聲波作用時間為80min，超聲溫度為60℃，料液比為1:30。當(dāng)料液比為1:10~1:30時清除能力呈上升趨勢；當(dāng)料液比為1: 30時清除能力最高；料液比繼續(xù)增大后，清除能力呈下降趨勢。+自由基能力先增大后減小。+自由基能力圖56：超聲時間對清除ABTS+自由基能力的影響（1）乙醇濃度對清除ABTS⑵測試數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表51：VC標(biāo)準(zhǔn)曲線測定數(shù)據(jù)C（umol/ml）吸光度清除率/%0 1 2 3 4 5 6 7 8 以吸光度A 為縱坐標(biāo),濃度c為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。用前用無水乙醇稀釋成工作液，（177。燒杯、移液管、吸耳球。+，向其中加入被測物質(zhì)，如果該物質(zhì)中存在抗氧化成分，則該物質(zhì)會與ABTS清除能力影響效果非常顯著，說明乙醇濃度是主要影響因素；而超聲時間、超聲溫度和料液比對大青葉提取液的DPPH（4）料液比對DPPH在20 min~80 min時，清除能力呈快速上升的趨勢；到80min~120 min時清除能力較高，超聲時間為80min時清除能力達(dá)到最高，% 。清除能力的VC當(dāng)量由圖43可知，隨乙醇液濃度從0%增加到40%時，大青葉提取液對DPPH,分別置于10mL 試管中，再分別加入配置好的DPPH容量瓶(250mL、100mL、25mL)，比色管(10mL)，燒杯，移液管，吸耳球。當(dāng)有自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失或減弱，褪色程度與接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系。目前，國外普遍使用DPPH并發(fā)現(xiàn)總黃酮提取率和總酚提取率具有一致性，即總黃酮提取率高時總酚的提取率也高，由此推測大青葉中總酚類化合物主要是黃酮類化合物。而且長時間超聲，產(chǎn)生較多的熱量，導(dǎo)致提取液溫度上升，對黃酮類成分造成破壞，由乙醇濃度對總酚的提取率的影響分析，已知總黃酮的提取率下降必然導(dǎo)致總酚的提取率的下降。取稀釋后溶液1ml四份,分別置于10mL比色管中，加入2 ml福林試劑，充分搖勻， ％碳酸鈉溶液．混勻，以蒸餾水稀釋至刻度。，分別取2mL置于10mL的容量瓶中，加入2 ml福林試劑，充分搖勻， ％碳酸鈉溶液．混勻，以蒸餾水稀釋至刻度。DK512型電熱恒溫水浴鍋：上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。其原因可能是料液比增大后，大青葉內(nèi)多糖類物質(zhì)等其他物質(zhì)的溶解量增加，這些物質(zhì)對黃酮起到了吸附沉淀作用，從而引起總黃酮提取率下降。提取液蒸發(fā)時也會降低乙醇的濃度，對提取總黃酮造成不利影響。（3）超聲溫度的確定分別準(zhǔn)確稱取5 g的大青葉，分別加入40%乙醇100 mL，分別在50、60、70、80℃下超聲波處理80min，然后進(jìn)行抽濾，殘?jiān)孟嗤瑵舛群腕w積的乙醇再超聲提取一次,合并兩次提取液,回收乙醇,濃縮液冷凍干燥,得到黃酮提取物，定容至100 mL，按測定其吸光度，從工作曲線方程查出黃酮含量，再計(jì)算出黃酮提取率。（2）超聲波作用時間的確定分別準(zhǔn)確稱取大青葉各5 g，分別加入40%乙醇100 mL，在60℃情況下超聲波處理60、80、100、120min然后進(jìn)行抽濾，殘?jiān)孟嗤瑵舛群腕w積的乙醇再超聲提取一次,合并兩次提取液,回收乙醇,濃縮液冷凍干燥,得到黃酮提取物，定容至100 mL，按測定其吸光度，從工作曲線方程查出黃酮含量，再計(jì)算出黃酮提取率。（1）乙醇濃度的確定分別準(zhǔn)確稱取5 g的大青葉，各加入100 mL乙醇，乙醇濃度分別為0%，20%，40%，60%，80%，100%在60℃條件下超聲波處理1h。代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程可得濃度數(shù)據(jù)（以蘆丁為參比）,三次結(jié)果取平均值。由于黃酮類成分均有2苯基色原酮為母核的結(jié)構(gòu)，作為黃酮類化合物的標(biāo)準(zhǔn)品要具有其母核，通過查閱文獻(xiàn)確定蘆丁也有此結(jié)構(gòu)，因此以蘆丁為基準(zhǔn)物測定天然植物中總黃酮的含量，蘆丁的結(jié)構(gòu)式為圖21： 圖21：蘆丁結(jié)構(gòu)式