血清成分分析(編輯修改稿)
2024-11-19 04:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 燥試管，編號后，按表3加入試劑。試管試劑表3 鄰苯二甲醛法測定血清總膽固醇——樣品的測定對照樣品醋酸/mL血清/mL鄰苯二甲醛試劑/mL0無水乙醇/mL0混合酸/mL*加畢，混勻，靜置10min，于550nm波長比色，以對照管校零點(diǎn)，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線即知100mL樣品中總膽固醇含量（mg）。⑵、鹽析法血清清蛋白與γ球蛋白的鹽析實(shí)驗(yàn)步驟取離心管一支，加入2mL血清加入2mLPBS（稀釋血清），搖勻逐滴加入pH=(NH4)2SO4溶液2mL，邊加邊搖靜止30min，離心20min（v=3000rpm）上清液（主要含有清蛋白）沉 淀（主要含有γ球蛋白）(NH4)2SO4，使上清液飽和加1mLPBS溶解靜止30min逐滴加入飽和(NH4)(相當(dāng)于33%飽和 (NH4)2SO4溶液)離心、沉淀加1mLPBS溶解沉淀放置30min放入透析袋離心20min（v=3000rpm）**放棄離心后的上清液（主要是α、β球蛋白），沉淀即為初步純化的γ球蛋白⑶、透析與濃縮法1. 取玻璃紙（15cm15cm）兩張，折成袋狀。將前面第一次鹽析得到的含有清蛋白的上清液和γ球蛋白分別倒入兩個透析袋中，用線繩系緊上口。2. 用玻璃棒懸掛在盛有半杯蒸餾水的100mL燒杯中，使透析袋下半部浸入水中，將燒杯放在微量振蕩器上振蕩1h（中間換水12次）。3. 將透析袋取下，小心將線繩解開，用滴管吸收袋內(nèi)的液體放入干凈的試管中。4. 用雙縮脲法分別檢查袋內(nèi)外液體蛋白質(zhì)。在用BaCl溶液檢查燒液體的NH4+和SO42。記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，觀察透析法除鹽的結(jié)果。5. 將兩透析袋取出，埋入蔗糖中濃縮。⑷、凝膠層析法凝膠層析的實(shí)驗(yàn)步驟過程名稱實(shí)驗(yàn)步驟凝膠預(yù)處理4g葡萄糖膠G25放入100mL燒杯中50mL蒸餾水小火煮沸1h靜止、冷卻、傾棄蒸餾水加入PBS10mL輕輕攪拌至凝膠懸起傾入10cm（用玻璃棉堵住下口，下口套一橡皮管）裝柱 將全部凝膠都傾入柱內(nèi)，且液面接近凝膠面時，用螺旋夾將橡膠管夾緊，在將柱內(nèi)凝膠面上平鋪一張小圓濾紙片，然后小心放松螺旋夾，使液體緩慢流出，到液體剛好流入凝膠面時，將螺旋夾再夾緊，裝柱工作完成。加樣 用膠頭吸管將濾紙上方清液吸出，加入重鉻酸鉀和藍(lán)葡聚糖混合溶液，用膠塞封住上口，安裝生理鹽水加入裝置。洗脫 用生理鹽水洗脫液進(jìn)行洗脫。打開螺旋夾，使液體的流速達(dá)到67dpm。收集混合液在凝膠柱中分離，藍(lán)色的藍(lán)葡聚糖在下方，黃色的重鉻酸鉀在上方。用試管收集流出藍(lán)、黃色液體，比色并畫出洗脫曲線。⑸、醋酸纖維素薄膜電泳法醋酸纖維素薄膜電泳實(shí)驗(yàn)步驟浸泡 將醋酸纖維素薄膜在緩沖溶液中浸泡20min，取出識別光面和麻面。點(diǎn)樣 用鑷子將薄膜置于濾紙上，吸
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