血清成分分析(參考版)
2024-11-19 04:23本頁面
【正文】 在實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)了自己薄弱的實(shí)驗(yàn)操作技能與不太嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)實(shí)驗(yàn)態(tài)度，希望自己能夠再接再厲，讓自己的實(shí)驗(yàn)水平能更上一層樓！參考文獻(xiàn)：（分光光度計(jì)的應(yīng)用常識(shí)）（福建醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)精品課程）（韓山師范學(xué)院生化精品課程）（醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質(zhì)）（酸纖維素薄膜電泳法分離血清蛋白質(zhì)）（血清）內(nèi)容總結(jié)
（1）血清成分分析
作者：馮曉帆
（溫州大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，浙江溫州 ，325000）
摘要：本次實(shí)驗(yàn)通過鄰苯二甲醛法對血清中的膽固醇進(jìn)行了定量測定
。一些實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng) 凝膠層析法：① 加樣要沿著壁小心翼翼的加，否這樣品不容易進(jìn)入溶膠當(dāng)中。而紙層析法的成功與否受很多因素的限制，比如說燈芯做的突出紙面，濾紙中心圓心上的小孔間的太大，戳得不夠圓滑等等，都會(huì)影響樣品在層析液中的擴(kuò)散，就算同是谷氨酸或者都是丙氨酸在層析液當(dāng)中的，爬行速度也有所不同。查資料得知，影響電泳遷移率的外界因素有電場強(qiáng)度，溶液的PH值，溶液的例子強(qiáng)度和電滲現(xiàn)象，影響電泳的內(nèi)在因素有質(zhì)點(diǎn)所帶的靜電荷的量、質(zhì)點(diǎn)的大小和形狀，所以內(nèi)外因素共同導(dǎo)致了此次試驗(yàn)結(jié)果的不理想，分析如下：一、點(diǎn)樣的薄膜表面可能太干，樣品不易進(jìn)入膜內(nèi)，造成點(diǎn)樣起始點(diǎn)參差不起，影響分離效果；、點(diǎn)樣沒有做到恰到好處，可能太多，動(dòng)作不夠輕和穩(wěn)，用力可能過大，以致?lián)p壞膜片或印出凹陷影響電泳區(qū)帶分離效果；三、緩沖液濃度過高，則區(qū)帶泳動(dòng)速度慢，區(qū)帶分布過于集中，不易分辨；四、操作過程沒戴手套，未防止指紋污染對電泳結(jié)果的影響。在我們保證混合均勻試液，正確使用分光分度計(jì)等一系列規(guī)范操作的前提下，使吸光值出現(xiàn)負(fù)值的原因可能有：一、樣品的紫紅色物質(zhì)的吸光度比鮮紅的對照組的吸光度還要低，實(shí)驗(yàn)提供的血清存在一定的問題：二、混合酸中硫酸含量的高低對顯色有影響（混合酸的配制和測定過程中的加量都應(yīng)準(zhǔn)確）因而影響吸光度的測定。在此實(shí)驗(yàn)中，我們得到的無論是不免疫的或是免疫的血清都不夠純凈，都帶有鮮紅的顏色，因此對照組就帶有鮮紅的顏色。樣品的濃度不能過低，或者過高，超過光度計(jì)的測試范圍。我們總共收集27小試管，1到5，127好試管都為無色，6到11試管為藍(lán)色液體，13到26試管為黃色液體。 將薄膜取出后，移至漂洗液中，漂洗若干次，至無蛋白區(qū)無藍(lán)黑色。 將薄膜取出后，置于氨基黑10B染色劑重，染色10min。 將薄膜麻面朝下，平懸于電泳槽支架的濾紙橋上，點(diǎn)樣一端靠近負(fù)極；通電后先使U=80V，待10min后，使U=120V電泳40min。 用鑷子將薄膜置于濾紙上，吸收多余的液體，用鉛筆在薄膜麻面一端2cm處畫一細(xì)線，利用載玻片一側(cè)蘸取樣品，于細(xì)線處點(diǎn)樣。 將醋酸纖維素薄膜在緩沖溶液中浸泡20min，取出識(shí)別光面和麻面。用試管收集流出藍(lán)、黃色液體，比色并畫出洗脫曲線。打開螺旋夾，使液體的流速達(dá)到67dpm。洗脫加樣⑷、凝膠層析法凝膠層析的實(shí)驗(yàn)步驟過程名稱實(shí)驗(yàn)步驟凝膠預(yù)處理4g葡萄糖膠G25放入100mL燒杯中50mL蒸餾水小火煮沸1h靜止、冷卻、傾棄蒸餾水加入PBS10mL輕輕
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