【文章內容簡介】 將已溶解的CaCl2溶液加入，最后加水至1000ml。5）Hanks液：Hanks原液 100ml 重蒸水 896ml %酚紅 4ml 配好的Hanks液，分裝包扎貼上標簽，經(jīng)過滅菌后，4℃保存。6）詹納斯綠染液?！痉椒ㄅc步驟】 雞血細胞的獲得從家雞的翼根靜脈用注射器采血，注入試管后，迅速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制成抗凝全血。雞血細胞儲存液的制備在抗凝全血的試管中，%NaCl溶液，制成紅細胞儲備液，置于4℃冰箱內可供一周內使用。雞血細胞懸液的制備取雞血細胞儲備液200μl，加入800μl %NaCl溶液，混勻后，1200r/min離心5min，棄去上清液，再加入1000μl %NaCl溶液按上述條件離心一次。最后，棄去上清液，加入2000μl的GKN溶液制成雞血細胞懸液。計數(shù)取100μl雞血細胞懸液，加700μl的GKN溶液進行稀釋，在血細胞計數(shù)板上計數(shù)。若細胞濃度過大，用GKN溶液稀釋至177107個/ml 左右。雞血細胞的收集吸取200μl雞血細胞懸液放入離心管中，加入800μl Hanks液混勻，1000r/min離心5min。棄去上清液，用手指輕彈離心管底部，使沉淀的血細胞團塊松散。PEG誘導細胞融合 吸取100μl 37℃的50%PEG溶液，慢慢沿著離心管壁逐滴加入，邊加邊輕搖離心管，使PEG與細胞混勻，然后在37℃水浴中靜置2min。終止PEG作用緩慢加入1mlHanks液，輕輕吹打混勻，于37℃水浴中靜置5min。制備細胞懸液用吸管輕輕吹打細胞團數(shù)次使細胞團分散，1000r/min離心5min，使細胞完全沉降。棄去上清液，加Hanks液，再離心一次，棄多數(shù)上清，留少許溶液，混勻。滴片、染色和鏡鑒用鑷子取預先冰凍的干凈載玻片，迅速滴上2—3滴細胞懸浮液，用玻片從載玻片的一邊推到另一邊，使細胞分散均勻，然后置酒精燈上微微加熱干燥。將晾干的玻片放在潔凈的玻板上，用Giemsa染液[Giemsa原液用10倍體積的1/15mol/L磷酸緩沖液（）稀釋]染色30min，自來水沖洗，空氣干燥。在顯微鏡下觀察細胞融合的情況。計算細胞融合率細胞融合率是指在顯微鏡的視野內，已發(fā)生融合的細胞其細胞核總數(shù)與視野內所有細胞（包括已融合細胞）的細胞核總數(shù)之比，通常以百分比表示，而且要進行多個視野測定；進行統(tǒng)計分析?！咀⒁馐马棥勘緦嶒炛?，%NaCl液代替了Alsver液。實驗證實，用Alsver液保存的紅細胞時間較短，而改用生理鹽水則明顯延長紅細胞的保存時間且不影響細胞融合率。高Ca2+濃度能夠提高細胞融合率。有些抗凝劑中含有和Ca2+結合的化合物，比如Alsver液中檸檬酸鈉的酸根與血液中的Ca2+形成難解離的可溶性絡合物，導致血液中的Ca2+濃度降低，故起抗凝血作用，同時會造成細胞的融合率較低。必須嚴格控制PEG的作用時間，通常處理細胞1～2min。PEG和二甲基亞砜（DMSO）并用，可以提高細胞的融合率。融合細胞繼續(xù)培養(yǎng)就變成了一個雜種細胞，它的染色體不是兩核的倍數(shù)，因為一些染色體會逐漸的消失?！咀饔谩慨嫵鲇^察到的融合細胞，并計算融合率。試說明細胞融合的關鍵。第二篇：《實驗四 細胞的有絲分裂》教案《實驗四 細胞的有絲分裂》教案一、實驗目的，掌握有絲分裂各期的主要特征二、材料與用品洋蔥頭、洋蔥根尖縱切片標本、蛙胚細胞有絲分裂切片標本；普通光學顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、小刀、小試劑瓶、培養(yǎng)皿、酒精燈、火柴、FAA固定液、1摩爾/升鹽酸或濃鹽酸、醋酸洋紅染液、蒸餾水三、實驗過程（1）取材將洋蔥頭置于盛水的小燒杯上，使其鱗莖浸入水中，放在25℃恒溫箱中培養(yǎng)。待根長到2厘米左右時，于夜晚12時至1時切取長約1厘米左右的根尖。（2）前處理將材料浸入蒸餾水內，放置冰箱（0～4℃）中24小時。（3）固定將材料從前處理的藥物中取出，用水沖洗2～3次，放入卡諾氏或FAA固定液中，固定24小時，固定液用量應為材料體積的15倍以上。如固定的材料當時不用，可以先在90%酒精中泡半小時，然后在70%酒精泡半個小時，再換入70%酒精中，置0～4℃冰箱內可保存半年。經(jīng)過較長時間保存的材料，進行觀察前再用固定處理一次，效果較好。（4）解離將固定后的根尖用清水漂洗數(shù)次，用1摩爾/升鹽酸在60℃恒溫箱內處理6～20分鐘后，清水漂洗。（5）染色和壓片將解離后的根尖，切取1～2毫米長的分生組織，放在載玻片上，加1滴醋酸洋紅染液，放置約10分鐘。然后在酒精燈上緩慢往復3～4次，微微加熱（不可煮沸），隨即用解剖針將材料撥碎，蓋上蓋玻片，覆以吸水紙，對準蓋玻片下的材料，用鉛筆的橡皮頭在蓋玻片上輕輕敲擊，再用拇指適當用力下壓，但注意勿使蓋片滑動。壓好的片子中，材料鋪展成均勻的、單層細胞的薄層。 先在低倍鏡下找到根尖分生區(qū)，再轉高倍鏡，選擇較典型的有絲分裂各期圖象，仔細觀察。（1）間期細胞形態(tài)無明顯變化，體積有所增大。核仁核膜較清楚，核內染色質呈細網(wǎng)狀。（2）前期 細胞核脹大，核內染色質最初表現(xiàn)為極細盤曲的染色絲，以后染色絲逐漸縮短變粗形成染色體。染色體形態(tài)逐漸清楚，著絲點逐漸明顯。在前期結束時，核仁核膜消失。（3）中期紡錘體形成。染色體排列在細胞中央的赤道面上，從細胞極端觀察，可同時看到全部染色體；從側面觀察，則染色體排列成“一”字形。此時染色體變短變粗，其形態(tài)和數(shù)目都較清楚。（4）后期染色體著絲點分裂，每一染色體的二條單體成為二條獨立的子染色體。全部染色體分為兩組，分別向細胞的兩極移動。（5）末期兩組子染色體分別到達兩極，染色體逐漸伸長變粗，分散在核內成為染色質；紡錘體逐漸消失，核仁核膜重新出現(xiàn)，形成兩個新核。在兩新核之間赤道面上，出現(xiàn)細胞板，并逐漸形成細胞壁，最后分成兩個子細胞。在高倍鏡下觀察動物細胞有絲分裂切片標本，比較動物植物細胞有絲分裂過程中的特點。四、作業(yè)繪出你所觀察到的植物細胞有絲分裂各期的圖象。細胞有絲分裂過程中哪一時期是觀察染色體形態(tài)和進行染色體記數(shù)的最好時期？動物細胞