【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 將已溶解的CaCl2溶液加入，最后加水至1000ml。5）Hanks液：Hanks原液 100ml 重蒸水 896ml %酚紅 4ml 配好的Hanks液，分裝包扎貼上標(biāo)簽，經(jīng)過滅菌后，4℃保存。6）詹納斯綠染液?！痉椒ㄅc步驟】 雞血細(xì)胞的獲得從家雞的翼根靜脈用注射器采血，注入試管后，迅速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制成抗凝全血。雞血細(xì)胞儲(chǔ)存液的制備在抗凝全血的試管中，%NaCl溶液，制成紅細(xì)胞儲(chǔ)備液，置于4℃冰箱內(nèi)可供一周內(nèi)使用。雞血細(xì)胞懸液的制備取雞血細(xì)胞儲(chǔ)備液200μl，加入800μl %NaCl溶液，混勻后，1200r/min離心5min，棄去上清液，再加入1000μl %NaCl溶液按上述條件離心一次。最后，棄去上清液，加入2000μl的GKN溶液制成雞血細(xì)胞懸液。計(jì)數(shù)取100μl雞血細(xì)胞懸液，加700μl的GKN溶液進(jìn)行稀釋，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)。若細(xì)胞濃度過大，用GKN溶液稀釋至177107個(gè)/ml 左右。雞血細(xì)胞的收集吸取200μl雞血細(xì)胞懸液放入離心管中，加入800μl Hanks液混勻，1000r/min離心5min。棄去上清液，用手指輕彈離心管底部，使沉淀的血細(xì)胞團(tuán)塊松散。PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合 吸取100μl 37℃的50%PEG溶液，慢慢沿著離心管壁逐滴加入，邊加邊輕搖離心管，使PEG與細(xì)胞混勻，然后在37℃水浴中靜置2min。終止PEG作用緩慢加入1mlHanks液，輕輕吹打混勻，于37℃水浴中靜置5min。制備細(xì)胞懸液用吸管輕輕吹打細(xì)胞團(tuán)數(shù)次使細(xì)胞團(tuán)分散，1000r/min離心5min，使細(xì)胞完全沉降。棄去上清液，加Hanks液，再離心一次，棄多數(shù)上清，留少許溶液，混勻。滴片、染色和鏡鑒用鑷子取預(yù)先冰凍的干凈載玻片，迅速滴上2—3滴細(xì)胞懸浮液，用玻片從載玻片的一邊推到另一邊，使細(xì)胞分散均勻，然后置酒精燈上微微加熱干燥。將晾干的玻片放在潔凈的玻板上，用Giemsa染液[Giemsa原液用10倍體積的1/15mol/L磷酸緩沖液（）稀釋]染色30min，自來水沖洗，空氣干燥。在顯微鏡下觀察細(xì)胞融合的情況。計(jì)算細(xì)胞融合率細(xì)胞融合率是指在顯微鏡的視野內(nèi)，已發(fā)生融合的細(xì)胞其細(xì)胞核總數(shù)與視野內(nèi)所有細(xì)胞（包括已融合細(xì)胞）的細(xì)胞核總數(shù)之比，通常以百分比表示，而且要進(jìn)行多個(gè)視野測(cè)定；進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。【注意事項(xiàng)】本實(shí)驗(yàn)中，%NaCl液代替了Alsver液。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，用Alsver液保存的紅細(xì)胞時(shí)間較短，而改用生理鹽水則明顯延長(zhǎng)紅細(xì)胞的保存時(shí)間且不影響細(xì)胞融合率。高Ca2+濃度能夠提高細(xì)胞融合率。有些抗凝劑中含有和Ca2+結(jié)合的化合物，比如Alsver液中檸檬酸鈉的酸根與血液中的Ca2+形成難解離的可溶性絡(luò)合物，導(dǎo)致血液中的Ca2+濃度降低，故起抗凝血作用，同時(shí)會(huì)造成細(xì)胞的融合率較低。必須嚴(yán)格控制PEG的作用時(shí)間，通常處理細(xì)胞1～2min。PEG和二甲基亞砜（DMSO）并用，可以提高細(xì)胞的融合率。融合細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)就變成了一個(gè)雜種細(xì)胞，它的染色體不是兩核的倍數(shù)，因?yàn)橐恍┤旧w會(huì)逐漸的消失。【作用】畫出觀察到的融合細(xì)胞，并計(jì)算融合率。試說明細(xì)胞融合的關(guān)鍵。第二篇：《實(shí)驗(yàn)四 細(xì)胞的有絲分裂》教案《實(shí)驗(yàn)四 細(xì)胞的有絲分裂》教案一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，掌握有絲分裂各期的主要特征二、材料與用品洋蔥頭、洋蔥根尖縱切片標(biāo)本、蛙胚細(xì)胞有絲分裂切片標(biāo)本；普通光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、小刀、小試劑瓶、培養(yǎng)皿、酒精燈、火柴、FAA固定液、1摩爾/升鹽酸或濃鹽酸、醋酸洋紅染液、蒸餾水三、實(shí)驗(yàn)過程（1）取材將洋蔥頭置于盛水的小燒杯上，使其鱗莖浸入水中，放在25℃恒溫箱中培養(yǎng)。待根長(zhǎng)到2厘米左右時(shí)，于夜晚12時(shí)至1時(shí)切取長(zhǎng)約1厘米左右的根尖。（2）前處理將材料浸入蒸餾水內(nèi)，放置冰箱（0～4℃）中24小時(shí)。（3）固定將材料從前處理的藥物中取出，用水沖洗2～3次，放入卡諾氏或FAA固定液中，固定24小時(shí)，固定液用量應(yīng)為材料體積的15倍以上。如固定的材料當(dāng)時(shí)不用，可以先在90%酒精中泡半小時(shí)，然后在70%酒精泡半個(gè)小時(shí)，再換入70%酒精中，置0～4℃冰箱內(nèi)可保存半年。經(jīng)過較長(zhǎng)時(shí)間保存的材料，進(jìn)行觀察前再用固定處理一次，效果較好。（4）解離將固定后的根尖用清水漂洗數(shù)次，用1摩爾/升鹽酸在60℃恒溫箱內(nèi)處理6～20分鐘后，清水漂洗。（5）染色和壓片將解離后的根尖，切取1～2毫米長(zhǎng)的分生組織，放在載玻片上，加1滴醋酸洋紅染液，放置約10分鐘。然后在酒精燈上緩慢往復(fù)3～4次，微微加熱（不可煮沸），隨即用解剖針將材料撥碎，蓋上蓋玻片，覆以吸水紙，對(duì)準(zhǔn)蓋玻片下的材料，用鉛筆的橡皮頭在蓋玻片上輕輕敲擊，再用拇指適當(dāng)用力下壓，但注意勿使蓋片滑動(dòng)。壓好的片子中，材料鋪展成均勻的、單層細(xì)胞的薄層。 先在低倍鏡下找到根尖分生區(qū)，再轉(zhuǎn)高倍鏡，選擇較典型的有絲分裂各期圖象，仔細(xì)觀察。（1）間期細(xì)胞形態(tài)無明顯變化，體積有所增大。核仁核膜較清楚，核內(nèi)染色質(zhì)呈細(xì)網(wǎng)狀。（2）前期 細(xì)胞核脹大，核內(nèi)染色質(zhì)最初表現(xiàn)為極細(xì)盤曲的染色絲，以后染色絲逐漸縮短變粗形成染色體。染色體形態(tài)逐漸清楚，著絲點(diǎn)逐漸明顯。在前期結(jié)束時(shí)，核仁核膜消失。（3）中期紡錘體形成。染色體排列在細(xì)胞中央的赤道面上，從細(xì)胞極端觀察，可同時(shí)看到全部染色體；從側(cè)面觀察，則染色體排列成“一”字形。此時(shí)染色體變短變粗，其形態(tài)和數(shù)目都較清楚。（4）后期染色體著絲點(diǎn)分裂，每一染色體的二條單體成為二條獨(dú)立的子染色體。全部染色體分為兩組，分別向細(xì)胞的兩極移動(dòng)。（5）末期兩組子染色體分別到達(dá)兩極，染色體逐漸伸長(zhǎng)變粗，分散在核內(nèi)成為染色質(zhì)；紡錘體逐漸消失，核仁核膜重新出現(xiàn)，形成兩個(gè)新核。在兩新核之間赤道面上，出現(xiàn)細(xì)胞板，并逐漸形成細(xì)胞壁，最后分成兩個(gè)子細(xì)胞。在高倍鏡下觀察動(dòng)物細(xì)胞有絲分裂切片標(biāo)本，比較動(dòng)物植物細(xì)胞有絲分裂過程中的特點(diǎn)。四、作業(yè)繪出你所觀察到的植物細(xì)胞有絲分裂各期的圖象。細(xì)胞有絲分裂過程中哪一時(shí)期是觀察染色體形態(tài)和進(jìn)行染色體記數(shù)的最好時(shí)期？動(dòng)物細(xì)胞