【文章內(nèi)容簡介】 理當(dāng)局(dāngj)意識(shí)到了經(jīng)典的急性毒性試驗(yàn)存在的局限性 提供的信息不足以支持長毒試驗(yàn)的劑量選擇 從生物學(xué)的角度看，LD50沒有恒定的數(shù)值 通常所用的劑量與臨床人用劑量差別很大 人和動(dòng)物對(duì)藥物的敏感性差別很大 不必要的動(dòng)物和資源的浪費(fèi),急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第三十四頁，共八十頁。,對(duì)于新藥開發(fā)來說，急性毒性試驗(yàn)通常沒有必要求出精確(jīngqu232。)的LD50值，所要關(guān)注的是動(dòng)物出現(xiàn)的毒性及與劑量間的量效關(guān)系，在嚙齒類動(dòng)物中不再需要給以致死水平的劑量 但特殊的情況下，從科學(xué)的角度需要測定LD50值，如細(xì)胞毒類抗癌藥物，通常用LD50的1/10來估計(jì)I期臨床試驗(yàn)的安全起始劑量,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第三十五頁，共八十頁。,1991第一屆ICH會(huì)議 經(jīng)典的LD50 測定已不再是正式要求了 建議進(jìn)行逐漸(zhji224。n)增加劑量的耐受性研究以監(jiān)測不同劑量下的毒性反應(yīng) 建議采用兩種哺乳動(dòng)物 可以用兩種嚙齒類動(dòng)物或一種嚙齒類動(dòng)物加一種非嚙齒類動(dòng)物的嚴(yán)格設(shè)計(jì)的、單次給藥的、逐漸增加劑量的耐受性研究，取代嚙齒類動(dòng)物或非嚙齒類動(dòng)物L(fēng)D50測定的要求,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第三十六頁，共八十頁。,基于上述科學(xué)認(rèn)識(shí)和國內(nèi)的研發(fā)實(shí)際，2005年起草發(fā)布了當(dāng)前的技術(shù)指導(dǎo)原則(yu225。nz233。) 《化藥藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》 《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第三十七頁，共八十頁。,觀察時(shí)間及指標(biāo) 急性毒性觀察為全程觀察 時(shí)間為14天。以便能觀察到毒性指征出現(xiàn)的時(shí)間及其恢復(fù)時(shí)間，死亡時(shí)間等 指標(biāo)包括一般指標(biāo)、死亡、體重(tǐzh242。ng)變化等,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第三十八頁，共八十頁。,觀察時(shí)間及指標(biāo) 記錄所有死亡、臨床癥狀，臨床癥狀開始的時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆 對(duì)于所有的動(dòng)物均應(yīng)進(jìn)行大體解剖 任何器官出現(xiàn)體積、顏色(y225。ns232。)、紋理改變時(shí)，均應(yīng)記錄并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第三十九頁，共八十頁。,數(shù)據(jù)分析及評(píng)價(jià) 判斷每種反應(yīng)的量效關(guān)系及隨時(shí)間的變化 判斷各種反應(yīng)可能涉及的器官、組織或系統(tǒng)等，根據(jù)病理結(jié)果，初步判斷毒性靶器官 判斷動(dòng)物對(duì)受試物的耐受性、最大無反應(yīng)劑量、最小毒性反應(yīng)劑量、近似致死劑量等，初步判斷藥物安全范圍 對(duì)于需要測定(c232。d236。ng)LD50值的藥物，采用合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法求算LD50值,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第四十頁，共八十頁。,動(dòng)物種屬 “一般應(yīng)選(yīnɡ xuǎn)用一種嚙齒類動(dòng)物加一種非嚙齒類動(dòng)物進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。若未采用非嚙齒類動(dòng)物進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，應(yīng)闡明其合理性”,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第四十一頁，共八十頁。,動(dòng)物種屬 嚙齒類與非嚙齒類對(duì)藥物的敏感性明顯不同 研究證實(shí)非嚙齒類與人體的相關(guān)性一般更好 從代謝的角度考慮，非嚙齒類可能為更敏感動(dòng)物，且從反映藥品安全性特點(diǎn)(t232。diǎn)角度考慮非嚙齒類可能更敏感 國外在急性毒性試驗(yàn)前往往已完成了非嚙齒類動(dòng)物數(shù)日（35日）重復(fù)給藥的劑量探索試驗(yàn)。即已反映了非嚙齒類的急性毒性。而從我國實(shí)際情況來看，還有些差距,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第四十二頁，共八十頁。,試驗(yàn)(sh236。y224。n)方法 近似致死劑量法 最大給藥量法 固定劑量法（Fixeddose procedure） 上下法（階梯法，序貫法，Up and down method） 累積劑量設(shè)計(jì)法（金字塔法，Pyramiding dosage design） 半數(shù)致死量法,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第四十三頁，共八十頁。,進(jìn)展 LD50值的不確定性 試驗(yàn)結(jié)果數(shù)學(xué)處理后計(jì)算產(chǎn)生的一個(gè)數(shù)值 不同試驗(yàn)對(duì)于同一藥物所得出的結(jié)果差別較大，可達(dá)2.44 ~ 8.38倍 從依達(dá)拉奉和阿德福韋酯的研究結(jié)果可以得出類似(l232。i s236。)結(jié)論,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第四十四頁，共八十頁。,昆明種小鼠中依達(dá)拉奉與阿德福韋酯不同(b249。 t243。nɡ)給藥途徑的LD50值,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),數(shù)據(jù)來源于2000 – 2002年申報(bào)資料，有些僅進(jìn)行了其中1種或2種給藥途徑的SDT。從當(dāng)時(shí)國內(nèi)GLP與研發(fā)狀況分析，上述試驗(yàn)基本是在非GLP條件下完成(w225。n ch233。ng)的，其中一些試驗(yàn)可能是在同一試驗(yàn)單位進(jìn)行。n為試驗(yàn)次數(shù)。,第四十五頁，共八十頁。,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第四十六頁，共八十頁。,LD50值的不確定性 導(dǎo)致這種不確定的原因可能包括但不僅限于 生物學(xué)不確定性的存在 動(dòng)物品質(zhì)差異 試驗(yàn)條件差異 受試物制備的差異，如濃度、溶劑(r243。ngj236。)等 給藥體積和給藥速度差異，特別是注射途徑時(shí)，給藥速度是影響毒性表現(xiàn)重要因素,急性毒性試驗(yàn)(sh236。y224。n),第四十七頁，共八十頁。,LD50值的不確定性 意義 如果以LD50值為參考進(jìn)行后續(xù)非臨床或臨床劑量設(shè)計(jì)的精確計(jì)算，可能存在風(fēng)險(xiǎn) 上述結(jié)果提示在同一動(dòng)物種屬中多次試驗(yàn)獲得相同LD50值的幾率(jī lǜ)很小，文獻(xiàn)比較的意義很小 試圖通過測定LD50來確定不同