生物制藥工藝學(xué)-生物制藥工藝技術(shù)基礎(chǔ)-醫(yī)藥保健(編輯修改稿)
2025-06-21 00:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 甘油，混勻速凍，凍存于－ 70~－ 80℃ . （五）組織與細(xì)胞的破碎 組織與細(xì)胞的破碎方法有物理法、化學(xué)法與生物法。 （ 1）磨切法 工業(yè)上常用的有絞肉機(jī)，刨胰機(jī)，球磨機(jī)、磨粉機(jī)。實驗室常用的有勻漿機(jī)，研缽，高速組織搗碎機(jī)。 （ 2）壓力法 有壓榨法、高壓法和減壓法，滲透壓法。 （ 3）超聲波法 （ 4）反復(fù)凍融法 用稀酸、稀堿、濃鹽、有機(jī)溶劑或表面活性劑處理細(xì)胞，可破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)釋放出內(nèi)容物。 （ 1）組織自溶法 利用組織中自身溶解酶的作用改變、破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，釋放出目的物稱為組織自溶法。 (2) 酶解法 用外來酶處理生物材料，如用溶菌酶處理某些細(xì)菌，蝸牛酶等 （ 3）噬菌體法 用噬菌體感染細(xì)胞、裂解細(xì)胞，釋放出內(nèi)容物。 （六）細(xì)胞器的分離 為獲得結(jié)合在細(xì)胞器上的一些生化成分或酶系，常常要先得到細(xì)胞器再進(jìn)一步分離有效成分。方法是勻漿破碎細(xì)胞，差速離心。 第二節(jié) 生物活性物質(zhì)的提取 提取是利用制備目的物的溶解特性，將目的物與細(xì)胞的固形物成分或其它結(jié)合成分分離，使其由固相轉(zhuǎn)入液相或從細(xì)胞生理狀態(tài)轉(zhuǎn)入特定溶液環(huán)境的過程。 一、物質(zhì)性質(zhì)與提取 （一）物質(zhì)的性質(zhì)與提取方法的選擇 要取得好的提取效果，最重要的是要針對生物材料和目的物的性質(zhì)選擇合適的溶劑系統(tǒng)與提取條件。 生物材料及其目的物與提取有關(guān)的一些性狀包括溶解性質(zhì)、分子量、等電點、存在方式、穩(wěn)定性、比重、粒度、粘度，目的物含量，主要雜質(zhì)種類及溶解性質(zhì)，有關(guān)酶的特征等。其中最主要的是目的物與主要雜質(zhì)在溶解度方面的差異以及它們的穩(wěn)定性。操作者可根據(jù)文獻(xiàn)資料及本人的試驗摸索獲得的有關(guān)信息，在提取過程中增加目的物的溶出度，盡可能減少雜質(zhì)的溶出度。 （二）活性物質(zhì)的保護(hù)措施 （ 1）采用緩沖鹽系統(tǒng) 在生物藥物制備中，常用的緩沖鹽有磷酸緩沖鹽，檸檬酸緩沖鹽， Tris緩沖液，醋酸緩沖鹽，碳酸緩沖鹽，硼酸緩沖鹽和巴比妥緩沖鹽等。 （ 2）添加保護(hù)劑 防止某些生理活性物質(zhì)的活性基團(tuán)及酶的活性中心受到破壞，如巰基是許多活性蛋白質(zhì)和酶催化活性基團(tuán)，極易被氧化，故提取時，常添加某些還原劑如半胱氨酸， ?－巰基乙醇。對易受重金屬影響的，可添加EDTA。 （ 3）抑制水解酶的作用 （ 4）其它保護(hù)措施（冷、熱、酸、堿） 二、物質(zhì)的性質(zhì)與溶解度 （一）物質(zhì)溶解度的一般規(guī)律 相似相溶 （二）水在生化物質(zhì)提取中的作用 水是提取生化物質(zhì)的常用溶劑。水分子的存在可使其它生物分子之間的氫鍵減弱，而與水分子形成氫鍵，水分子還能使溶質(zhì)分子的離子鍵解離，這就是所謂的水合作用。水合作用促使蛋白質(zhì)、核酸、多糖等生物大分子與水形成了水合分子或水合離子從而促使它們?nèi)芙庥谒蛩芤褐小? 三、提取效率 四、影響提取的因素 （一）溫度 多數(shù)物質(zhì)的溶解度隨提取溫度的升高而增加。另外較高的溫度可以降低物料的粘度，有利于分子擴(kuò)散和機(jī)械攪拌，所以對耐熱成分的提取可以用加熱的方法。對不耐熱的生物活性物質(zhì)的提取，一般在 0~10℃ 進(jìn)行提取。 (二 )酸堿度 多數(shù)生化物質(zhì)在中性條件下較穩(wěn)定， pH值一般應(yīng)控制在 4～ 9范圍內(nèi)，為了增加目的物的溶解度，往往要避免目的物的等電點附近進(jìn)行提取。 巧妙地選擇溶劑系統(tǒng)的 pH值不但直接影響目的物與雜質(zhì)溶解度，還可以抑制有害酶類的水解破壞作用，防止降解，提高收率。 （三）鹽濃度 鹽溶作用 鹽析作用 五、提取方法 （一）用酸、堿、鹽水溶液提取 （二）表面活性劑提取 表面活性劑分子兼有親水與疏水基團(tuán)，分布于油水界面時，有分散、乳化和增溶作用。表面活性劑分陰離子型、陽離子型與非離子型。離子型表面活性劑作用強(qiáng)，但是易引起蛋白質(zhì)等生物大分子的變性，非離子表面活性劑變性作用小，適合于用水、鹽系統(tǒng)無法提取的提取的蛋白質(zhì)或酶的提取。 （三）有機(jī)溶劑提取 －液提取 丙酮從動物腦中提取膽固醇， 溶劑分級提?。喝缦扔帽儆靡掖?，最后用乙醚提取。石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，甲醇。 丙酮粉 －液萃取
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