生物制藥工藝學-生物制藥工藝技術基礎-醫(yī)藥保健(編輯修改稿)
2025-06-21 00:39 本頁面
【文章內容簡介】 甘油，混勻速凍，凍存于－ 70~－ 80℃ . （五）組織與細胞的破碎 組織與細胞的破碎方法有物理法、化學法與生物法。 （ 1）磨切法 工業(yè)上常用的有絞肉機，刨胰機，球磨機、磨粉機。實驗室常用的有勻漿機，研缽，高速組織搗碎機。 （ 2）壓力法 有壓榨法、高壓法和減壓法，滲透壓法。 （ 3）超聲波法 （ 4）反復凍融法 用稀酸、稀堿、濃鹽、有機溶劑或表面活性劑處理細胞，可破壞細胞結構釋放出內容物。 （ 1）組織自溶法 利用組織中自身溶解酶的作用改變、破壞細胞結構，釋放出目的物稱為組織自溶法。 (2) 酶解法 用外來酶處理生物材料，如用溶菌酶處理某些細菌，蝸牛酶等 （ 3）噬菌體法 用噬菌體感染細胞、裂解細胞，釋放出內容物。 （六）細胞器的分離 為獲得結合在細胞器上的一些生化成分或酶系，常常要先得到細胞器再進一步分離有效成分。方法是勻漿破碎細胞，差速離心。 第二節(jié) 生物活性物質的提取 提取是利用制備目的物的溶解特性，將目的物與細胞的固形物成分或其它結合成分分離，使其由固相轉入液相或從細胞生理狀態(tài)轉入特定溶液環(huán)境的過程。 一、物質性質與提取 （一）物質的性質與提取方法的選擇 要取得好的提取效果，最重要的是要針對生物材料和目的物的性質選擇合適的溶劑系統(tǒng)與提取條件。 生物材料及其目的物與提取有關的一些性狀包括溶解性質、分子量、等電點、存在方式、穩(wěn)定性、比重、粒度、粘度，目的物含量，主要雜質種類及溶解性質，有關酶的特征等。其中最主要的是目的物與主要雜質在溶解度方面的差異以及它們的穩(wěn)定性。操作者可根據文獻資料及本人的試驗摸索獲得的有關信息，在提取過程中增加目的物的溶出度，盡可能減少雜質的溶出度。 （二）活性物質的保護措施 （ 1）采用緩沖鹽系統(tǒng) 在生物藥物制備中，常用的緩沖鹽有磷酸緩沖鹽，檸檬酸緩沖鹽， Tris緩沖液，醋酸緩沖鹽，碳酸緩沖鹽，硼酸緩沖鹽和巴比妥緩沖鹽等。 （ 2）添加保護劑 防止某些生理活性物質的活性基團及酶的活性中心受到破壞，如巰基是許多活性蛋白質和酶催化活性基團，極易被氧化，故提取時，常添加某些還原劑如半胱氨酸， ?－巰基乙醇。對易受重金屬影響的，可添加EDTA。 （ 3）抑制水解酶的作用 （ 4）其它保護措施（冷、熱、酸、堿） 二、物質的性質與溶解度 （一）物質溶解度的一般規(guī)律 相似相溶 （二）水在生化物質提取中的作用 水是提取生化物質的常用溶劑。水分子的存在可使其它生物分子之間的氫鍵減弱，而與水分子形成氫鍵，水分子還能使溶質分子的離子鍵解離，這就是所謂的水合作用。水合作用促使蛋白質、核酸、多糖等生物大分子與水形成了水合分子或水合離子從而促使它們溶解于水或水溶液中。 三、提取效率 四、影響提取的因素 （一）溫度 多數物質的溶解度隨提取溫度的升高而增加。另外較高的溫度可以降低物料的粘度，有利于分子擴散和機械攪拌，所以對耐熱成分的提取可以用加熱的方法。對不耐熱的生物活性物質的提取，一般在 0~10℃ 進行提取。 (二 )酸堿度 多數生化物質在中性條件下較穩(wěn)定， pH值一般應控制在 4～ 9范圍內，為了增加目的物的溶解度，往往要避免目的物的等電點附近進行提取。 巧妙地選擇溶劑系統(tǒng)的 pH值不但直接影響目的物與雜質溶解度，還可以抑制有害酶類的水解破壞作用，防止降解，提高收率。 （三）鹽濃度 鹽溶作用 鹽析作用 五、提取方法 （一）用酸、堿、鹽水溶液提取 （二）表面活性劑提取 表面活性劑分子兼有親水與疏水基團，分布于油水界面時，有分散、乳化和增溶作用。表面活性劑分陰離子型、陽離子型與非離子型。離子型表面活性劑作用強，但是易引起蛋白質等生物大分子的變性，非離子表面活性劑變性作用小，適合于用水、鹽系統(tǒng)無法提取的提取的蛋白質或酶的提取。 （三）有機溶劑提取 －液提取 丙酮從動物腦中提取膽固醇， 溶劑分級提取：如先用丙酮，再用乙醇，最后用乙醚提取。石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，甲醇。 丙酮粉 －液萃取
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1