生物制藥工藝學(xué)-生物制藥工藝技術(shù)基礎(chǔ)-醫(yī)藥保健-文庫(kù)吧
2025-04-12 00:39 本頁(yè)面
【正文】 制備彈性蛋白酶和激肽釋放酶，胰島素與胰酶等。 （二）生物材料的采集與保存 生理活性物質(zhì)易失活與降解，采集時(shí)必須保持材料的新鮮。防止腐敗、變質(zhì)與微生物污染。如胰臟采摘后要立即速凍，防止胰島素活力下降。 保存生物材料的主要方法有速凍、凍干、有機(jī)溶劑脫水，制成丙酮粉，或浸存于丙酮與甘油中等。 （三）動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)與保存 （四）微生物菌種的選育與保存 微生物種類繁多，易于培養(yǎng)，是工業(yè)化生產(chǎn)各種生物藥物的主要材料。 （ 1）含菌樣品的收集 根據(jù)微生物的生態(tài)特點(diǎn)，從自然界取樣，分離所需要菌種，如到堆積和腐爛纖維素的地方去取樣分離纖維素酶產(chǎn)生菌。 到溫泉附近取樣分離高溫蛋白酶產(chǎn)生菌。 一般可以從土壤中分離所需微生物，取樣時(shí)先將表土刮去2~3cm，在同一條件下選好 2~5點(diǎn)土樣混在一起包好，表明采樣地點(diǎn)及日期備用。 （ 2）富集培養(yǎng) 收集到的樣品若含所需要的菌較多，可直接分離。如含所需要的菌很少，就需要經(jīng)過(guò)富集培養(yǎng)，使所需要的菌大量生長(zhǎng)，以利于篩選。再配合控制溫度， pH或營(yíng)養(yǎng)成分即可達(dá)到目的。有時(shí)用能分解的底物作為生長(zhǎng)和誘導(dǎo)產(chǎn)生所須成分的培養(yǎng)基成分，以使所需要的菌種得到快速生長(zhǎng)，有利于進(jìn)一步分離。 （ 3）菌種純化 在自然條件下，各種類型的菌混雜在一起生活，所以要進(jìn)行分離，以獲得純種。菌種純化的方法一般采用稀釋分離或劃線分離法。 （ 1）篩選對(duì)象的選擇 篩選前，先要考慮哪些微生物是篩選的對(duì)象。如有報(bào)道，則根據(jù)文獻(xiàn)收集可能性最大的的微生物進(jìn)行篩選。 （ 2）培養(yǎng)方式的確定 微生物的培養(yǎng)方式，有固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)。 從自然界直接分離得到的菌種，都不能立即適應(yīng)實(shí)際生產(chǎn)需要。只有通過(guò)誘變，選育才能使產(chǎn)量成倍，成百倍地提高。選育方法基本上可以分成兩類：隨機(jī)選擇突變體；根據(jù)代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制選擇各種突變體。 （ 1）隨機(jī)選擇法 一般程序是采用誘變劑誘變處理微生物，增殖培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)稀釋涂布，隨機(jī)選擇部分或全部單菌落，逐個(gè)測(cè)定它們的 生物活性。最后挑選出產(chǎn)量或其它性能比親代菌株優(yōu)秀的突變株。 （ 2）根據(jù)代謝的調(diào)節(jié)機(jī)理選擇高產(chǎn)突變體 根據(jù)代謝的調(diào)節(jié)機(jī)理選擇高產(chǎn)突變體。 (抗性基因 ) （ 1）菌種的退化與防止 生產(chǎn)菌種本來(lái)在自然環(huán)境下生長(zhǎng)，所以在人工培養(yǎng)條件下，任何菌株通過(guò)一系列的轉(zhuǎn)接傳代都可能發(fā)生退化。 退化 — 一般把菌株的生活力，產(chǎn)孢子能力的衰退和特殊產(chǎn)物產(chǎn)量的下降，成為退化。 菌種退化現(xiàn)象：①單位容積中發(fā)酵液的活性物質(zhì)含量；②瓊脂平皿上的單菌落形態(tài)；③不同培養(yǎng)時(shí)期菌體細(xì)胞的形態(tài)和主要遺傳特征。如形成孢子能力；④發(fā)酵過(guò)程pH變動(dòng)情況；⑤發(fā)酵液的氣味、色澤。 菌種退化防止措施：①防止基因突變，基因突變是菌種退化的一個(gè)主要原因，低溫保藏法可以減少突變得產(chǎn)生。②采用雙重缺陷型 采用雙營(yíng)養(yǎng)缺陷標(biāo)志可間接而有效地防止突變。③制定科學(xué)管理制度 制作平行菌種斜面；④分離單菌落；認(rèn)真進(jìn)行單菌落分離工作，再多做平行的菌種斜面；⑤選擇培養(yǎng)條件 選擇有利于高產(chǎn)菌株而不利于低產(chǎn)菌株的培養(yǎng)條件。 （ 2）常用的菌種保藏方法 斜面保存法 — 將菌種轉(zhuǎn)接到新鮮的瓊脂斜面上，待生長(zhǎng)良好后，于 4℃ 保存。根據(jù)具體情況，間隔一定時(shí)間后轉(zhuǎn)接。 礦油法 — 在菌種斜面上覆蓋礦物油以隔絕空氣防止蒸發(fā)。 索氏法 — 將小試管斜面的菌種放在大試管內(nèi)，大試管內(nèi)裝幾粒氫氧化鉀，管口加橡皮套，然后用石蠟包封。 干硅膠法 — 試管內(nèi)裝硅膠約半滿， 180℃ 加熱滅菌 ，置密封干燥器內(nèi)冷卻，接種菌液約 1ml，塞好棉花，放入預(yù)置有色硅膠的大瓶中，蠟封瓶口，于低溫處保存。 砂土管法 — 取普通黃沙，洗凈過(guò) 60目篩，曬干，另取普通圓土研碎，過(guò)篩，曬干。兩者以 6:4混合。分裝于安醅瓶或小試管中，然后在 60℃ 干熱滅菌 2小時(shí)，連續(xù)滅菌三次后即可使用。裝管時(shí)可吸取少許孢子懸浮液加入，待干燥后抽真空封口或用棉花塞緊后蠟封，低溫保藏。 冷凍干燥法：將菌種懸浮于脫脂消毒牛奶中，快速冷凍，真空干燥。 甘油冷凍保存法：將對(duì)數(shù)期菌體懸浮于新鮮培養(yǎng)基中，加入 15%消毒
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