【文章內容簡介】 確認應在檢驗的范圍內。通常用微生物的回收率（％）來表示準確度 。 驗證的菌濃度應該在檢測范圍內，一般應選擇能夠準確計數(shù)的最高濃度，系列稀釋至較低濃度，并且至少應該有 5種濃度，每種濃度重復檢驗 5次。 替代方法的回收率應該達到 70％以上。 當替代方法并不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁來進行定量時，可能出現(xiàn)回收率高于藥典方法的情況，此時應結合專屬性的內容對準確性進行評價。 34 202303 精密度：是指在檢驗范圍內，對同一個均勻的樣品多次重復取樣測定，其檢驗結果的一致程度。通常采用標準偏差或相對標準偏差（變異系數(shù)）來表示 。 驗證的菌濃度同準確度，每種濃度重復檢驗10次。 可以接受的相對標準偏差（ RSD）應不大于 35％。一般來說，替代方法的相對標準偏差（ RSD）應不大于藥典方法。在該項目上， USP 的規(guī)定是15％～ 35％，研究表明，當含菌濃度在 30～300cfu/ml時，計數(shù)結果的 RSD完全可能在 15％以內，因此，指導原則中對該指標作了修改。 35 202303 專屬性：是指通過檢測適宜的試驗菌，以證明檢驗方法與其設定目的相適應的能力。 例如，菌落計數(shù)平皿法其設定目的在于檢出一定數(shù)量的微生物，則其專屬性驗證應證明當樣品中存在一定數(shù)量的試驗菌時，通過平皿法檢驗，能夠檢出試驗菌，而樣品的存在不會對結果造成影響。 驗證的關鍵是合理評價樣品的存在對檢驗結果的影響，當替代方法不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁就可以定量時 ，這種評價顯得尤為必要。 定量限：是指樣品中能被準確檢驗的微生物最低數(shù)量。 驗證的關鍵是在檢驗范圍的低限，選擇盡可能低的 5種菌濃度，每種濃度重復測定 5次，替代方法的定量限不得大于藥典方法。 36 202303 線性：是指在檢驗范圍內，檢驗結果與樣品中微生物數(shù)量成比例關系的程度。線性驗證時必須覆蓋能夠準確檢測的所有濃度范圍。 每株菌至少應該有 5種濃度，每種濃度至少測定 5次。 在對驗證數(shù)據進行處理時，應以樣本中預期的菌濃度為自變量，以不同方法的計數(shù)結果為因變量，進行線性回歸分析，計算相關系數(shù)，替代方法的相關系數(shù)不得低于 。 范圍：是指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，檢驗方法適用的高低限濃度或數(shù)量的區(qū)間。 37 202303 重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實驗條件（如實驗場所、實驗人員、儀器、試劑的批次等）發(fā)生變化時，所得檢驗結果的精密度。反映了微生物檢驗方法在檢驗結果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力 。 驗證的關鍵是使接種菌的量在檢測限以上，評價驗證結果時應制備均一的實驗樣本 耐用性：是指當方法參數(shù)有小的刻意變化時，檢驗結果不受影響的能力，為方法正常使用時的可靠性提供依據。 當檢驗方法采用基于培養(yǎng)的技術時，一般的參數(shù)變化是指對培養(yǎng)溫度和時間進行調整，上述調整對檢驗結果的影響并不顯著。 38 202303 微生物限度檢查法應用指導原則 39 202303 此原則的制定是為了更好應用微生物限度檢查法，對標準和方法中的特定內容及標準的應用做進一步說明。 應用此原則應結合 2023年版《中國藥典》微生物限度檢查法詳細解讀。主要對以下各條作了明確。 40 202303 ：有效性和無毒性。 ：盡量選擇操作簡便，快速及避免損傷供試品中污染的微生物的方法。 ：盡量避免采用該方法，更不宜采用高速離心沉淀集菌。 ：由中檢所研制及分發(fā)。 ，可根據供試品應符合的微生物限度標準和菌數(shù)報告規(guī)則選擇更高稀釋級試驗。 41 202303 可的菌種鑒定方法。 、貯存、銷售及新藥標準制定、進口藥品標準復核、考察藥品質量、仲裁中，除品種或制劑通則項下另有規(guī)定外，其微生物限度均以藥典的“藥品微生物限度標準”為依據。 42 202303 8. 2023年版二部化學藥制劑通則項下 ⑴有微生物限度要求的制劑，微生物限度為必檢項目； ⑵對于只有原則性要求的制劑（如：丸劑、口服片劑、膠囊劑、顆粒劑），應對其被微生物污染的風險進行評估。在保證產品對患者安全的前提下，通過回顧性驗證或在線驗證積累的微生物污染數(shù)據表明每批均符合微生物限度標準的要求，那么可不進行批批檢驗，但 必須保證每批最終產品均符合微生物限度規(guī)定。 43 202303 ⑶上述固體制劑若因制劑本身及工藝的原因導致產品易受微生物污染，應在品種項下列出微生物限度檢查項及微生物限度標準，如生化類制劑。 。 用于手術、燒傷及嚴重創(chuàng)傷的局部給藥制劑應符合無菌檢查法要求。對于創(chuàng)傷程度無法判斷的局部給藥制劑，若沒有證據證明藥品不存在安全性風險則應符合無菌檢查法要求。 44 202303 ，除了依據“藥品微生物限度標準”外，還應綜合考慮原料來源、性質、生產工藝條件、給藥途徑及微生物污染對患者的潛在危險等因素，提出合理安全的微生物限度標準，因此，必要時，特殊品種為保證其療效、穩(wěn)定性及避免對使用者的潛在危害性，應制定更嚴格的微生物限度標準，并在品種項下規(guī)定，如眼用液體制劑，目前其生產工藝及生產條件尚難達到無菌產品的要求，但從使用者的安全性考慮，建議按無菌產品的要求進行控制。 制定輔料、化學原料藥、中藥提取物的微生物限度標準時，除參照相應制劑的微生物限度標準外，還應綜合考慮相應制劑及其生產工藝的特性。 45 202303 11. 2023年版一部對動物類原藥材粉作了明確規(guī)定，利于標準的正確理解和執(zhí)行。具體規(guī)定如下： 含動物類原藥材粉的口服中藥制劑要求不得檢出沙門菌。其中的動物類原藥材粉是指除蜂蜜、王漿、動物角、阿膠外的所有動物類原藥材粉，如牡蠣、珍珠等貝類，海蜇、等水產品，冬蟲夏草、人工牛黃等。 46 202303 藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則 47 202303 藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則用于指導藥品微生物檢驗實驗室的質量控制。 藥品微生物的檢驗結果受到很多因素的影響，如實驗人員在取樣或試驗過程中可能引入了污染微生物；微生物學分析方法本身的誤差較大；樣品中或環(huán)境中微生物可能分布不均勻等因素均影響藥品微生物實驗結果。因此，在藥品檢驗中，為保證微生物試驗數(shù)據的可靠性和重現(xiàn)性，藥品微生物實驗室必須使用經驗證的檢測方法并按良好的實驗室規(guī)范指導試驗。 48 202303 藥品微生物實驗室規(guī)范包括以下幾個方面：人員、培養(yǎng)基、菌種、實驗室的布局和運行、設備、文件、實驗記錄、結果的判斷等。 49 202303 一、人員 從事藥品微生物試驗工作的人員均要受到教育、培訓及具備相關工作的經驗。 微生物實驗人員應具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景。 實驗室應依據實驗人員的崗位及職責對其進行相應的培訓，在確認他們可以承擔某一試驗前，他們不能獨立從事該項微生物試驗。應保證所有人員在上崗前接受勝任工作所必需的設備操作、微生物檢驗技術和實驗室生物安全等方面的培訓，經考核合格后方可上崗，同時，實驗室應制定所有級別實驗人員的繼續(xù)教育計劃。 50 202303 微生物實驗室管理人員包括工作人員和監(jiān)督人員，其專業(yè)技能和經驗水平應與他們的職責范圍相符。 管理人員也應接受系統(tǒng)的教育和微生物實驗室的培訓如：管理技能、實驗室安全、試驗按排、預算、實驗室研究、實驗結果評估和數(shù)據偏差的調查及技術報告書寫等。 應熟練的應用 SOP有關內容到管理工作中；如制定不同工作崗位實驗人員的培訓課程和繼續(xù)教育計劃，隨時掌握和了解試驗人員的水平，根據每個人的技術水平分配適宜的工作崗位。 對所有人員的培訓、考核內容和結果均應記錄。 51 202303 二、培養(yǎng)基 培養(yǎng)基是絕大多數(shù)微生物試驗的基礎。因此，培養(yǎng)基的質量是微生物試驗成功與否的關鍵因素。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質量控制試驗是提供優(yōu)質培養(yǎng)基的保證。