【文章內(nèi)容簡介】 確認(rèn)應(yīng)在檢驗(yàn)的范圍內(nèi)。通常用微生物的回收率（％）來表示準(zhǔn)確度 。 驗(yàn)證的菌濃度應(yīng)該在檢測范圍內(nèi)，一般應(yīng)選擇能夠準(zhǔn)確計(jì)數(shù)的最高濃度，系列稀釋至較低濃度，并且至少應(yīng)該有 5種濃度，每種濃度重復(fù)檢驗(yàn) 5次。 替代方法的回收率應(yīng)該達(dá)到 70％以上。 當(dāng)替代方法并不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁來進(jìn)行定量時(shí)，可能出現(xiàn)回收率高于藥典方法的情況，此時(shí)應(yīng)結(jié)合專屬性的內(nèi)容對準(zhǔn)確性進(jìn)行評價(jià)。 34 202303 精密度：是指在檢驗(yàn)范圍內(nèi)，對同一個(gè)均勻的樣品多次重復(fù)取樣測定，其檢驗(yàn)結(jié)果的一致程度。通常采用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）來表示 。 驗(yàn)證的菌濃度同準(zhǔn)確度，每種濃度重復(fù)檢驗(yàn)10次。 可以接受的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSD）應(yīng)不大于 35％。一般來說，替代方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSD）應(yīng)不大于藥典方法。在該項(xiàng)目上， USP 的規(guī)定是15％～ 35％，研究表明，當(dāng)含菌濃度在 30～300cfu/ml時(shí)，計(jì)數(shù)結(jié)果的 RSD完全可能在 15％以內(nèi)，因此，指導(dǎo)原則中對該指標(biāo)作了修改。 35 202303 專屬性：是指通過檢測適宜的試驗(yàn)菌，以證明檢驗(yàn)方法與其設(shè)定目的相適應(yīng)的能力。 例如，菌落計(jì)數(shù)平皿法其設(shè)定目的在于檢出一定數(shù)量的微生物，則其專屬性驗(yàn)證應(yīng)證明當(dāng)樣品中存在一定數(shù)量的試驗(yàn)菌時(shí)，通過平皿法檢驗(yàn)，能夠檢出試驗(yàn)菌，而樣品的存在不會對結(jié)果造成影響。 驗(yàn)證的關(guān)鍵是合理評價(jià)樣品的存在對檢驗(yàn)結(jié)果的影響，當(dāng)替代方法不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁就可以定量時(shí) ，這種評價(jià)顯得尤為必要。 定量限：是指樣品中能被準(zhǔn)確檢驗(yàn)的微生物最低數(shù)量。 驗(yàn)證的關(guān)鍵是在檢驗(yàn)范圍的低限，選擇盡可能低的 5種菌濃度，每種濃度重復(fù)測定 5次，替代方法的定量限不得大于藥典方法。 36 202303 線性：是指在檢驗(yàn)范圍內(nèi)，檢驗(yàn)結(jié)果與樣品中微生物數(shù)量成比例關(guān)系的程度。線性驗(yàn)證時(shí)必須覆蓋能夠準(zhǔn)確檢測的所有濃度范圍。 每株菌至少應(yīng)該有 5種濃度，每種濃度至少測定 5次。 在對驗(yàn)證數(shù)據(jù)進(jìn)行處理時(shí)，應(yīng)以樣本中預(yù)期的菌濃度為自變量，以不同方法的計(jì)數(shù)結(jié)果為因變量，進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)，替代方法的相關(guān)系數(shù)不得低于 。 范圍：是指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，檢驗(yàn)方法適用的高低限濃度或數(shù)量的區(qū)間。 37 202303 重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件（如實(shí)驗(yàn)場所、實(shí)驗(yàn)人員、儀器、試劑的批次等）發(fā)生變化時(shí)，所得檢驗(yàn)結(jié)果的精密度。反映了微生物檢驗(yàn)方法在檢驗(yàn)結(jié)果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力 。 驗(yàn)證的關(guān)鍵是使接種菌的量在檢測限以上，評價(jià)驗(yàn)證結(jié)果時(shí)應(yīng)制備均一的實(shí)驗(yàn)樣本 耐用性：是指當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的能力，為方法正常使用時(shí)的可靠性提供依據(jù)。 當(dāng)檢驗(yàn)方法采用基于培養(yǎng)的技術(shù)時(shí)，一般的參數(shù)變化是指對培養(yǎng)溫度和時(shí)間進(jìn)行調(diào)整，上述調(diào)整對檢驗(yàn)結(jié)果的影響并不顯著。 38 202303 微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則 39 202303 此原則的制定是為了更好應(yīng)用微生物限度檢查法，對標(biāo)準(zhǔn)和方法中的特定內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用做進(jìn)一步說明。 應(yīng)用此原則應(yīng)結(jié)合 2023年版《中國藥典》微生物限度檢查法詳細(xì)解讀。主要對以下各條作了明確。 40 202303 ：有效性和無毒性。 ：盡量選擇操作簡便，快速及避免損傷供試品中污染的微生物的方法。 ：盡量避免采用該方法，更不宜采用高速離心沉淀集菌。 ：由中檢所研制及分發(fā)。 ，可根據(jù)供試品應(yīng)符合的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)和菌數(shù)報(bào)告規(guī)則選擇更高稀釋級試驗(yàn)。 41 202303 可的菌種鑒定方法。 、貯存、銷售及新藥標(biāo)準(zhǔn)制定、進(jìn)口藥品標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核、考察藥品質(zhì)量、仲裁中，除品種或制劑通則項(xiàng)下另有規(guī)定外，其微生物限度均以藥典的“藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”為依據(jù)。 42 202303 8. 2023年版二部化學(xué)藥制劑通則項(xiàng)下 ⑴有微生物限度要求的制劑，微生物限度為必檢項(xiàng)目； ⑵對于只有原則性要求的制劑（如：丸劑、口服片劑、膠囊劑、顆粒劑），應(yīng)對其被微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評估。在保證產(chǎn)品對患者安全的前提下，通過回顧性驗(yàn)證或在線驗(yàn)證積累的微生物污染數(shù)據(jù)表明每批均符合微生物限度標(biāo)準(zhǔn)的要求，那么可不進(jìn)行批批檢驗(yàn)，但 必須保證每批最終產(chǎn)品均符合微生物限度規(guī)定。 43 202303 ⑶上述固體制劑若因制劑本身及工藝的原因?qū)е庐a(chǎn)品易受微生物污染，應(yīng)在品種項(xiàng)下列出微生物限度檢查項(xiàng)及微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，如生化類制劑。 。 用于手術(shù)、燒傷及嚴(yán)重創(chuàng)傷的局部給藥制劑應(yīng)符合無菌檢查法要求。對于創(chuàng)傷程度無法判斷的局部給藥制劑，若沒有證據(jù)證明藥品不存在安全性風(fēng)險(xiǎn)則應(yīng)符合無菌檢查法要求。 44 202303 ，除了依據(jù)“藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”外，還應(yīng)綜合考慮原料來源、性質(zhì)、生產(chǎn)工藝條件、給藥途徑及微生物污染對患者的潛在危險(xiǎn)等因素，提出合理安全的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，因此，必要時(shí)，特殊品種為保證其療效、穩(wěn)定性及避免對使用者的潛在危害性，應(yīng)制定更嚴(yán)格的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，并在品種項(xiàng)下規(guī)定，如眼用液體制劑，目前其生產(chǎn)工藝及生產(chǎn)條件尚難達(dá)到無菌產(chǎn)品的要求，但從使用者的安全性考慮，建議按無菌產(chǎn)品的要求進(jìn)行控制。 制定輔料、化學(xué)原料藥、中藥提取物的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，除參照相應(yīng)制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)綜合考慮相應(yīng)制劑及其生產(chǎn)工藝的特性。 45 202303 11. 2023年版一部對動物類原藥材粉作了明確規(guī)定，利于標(biāo)準(zhǔn)的正確理解和執(zhí)行。具體規(guī)定如下： 含動物類原藥材粉的口服中藥制劑要求不得檢出沙門菌。其中的動物類原藥材粉是指除蜂蜜、王漿、動物角、阿膠外的所有動物類原藥材粉，如牡蠣、珍珠等貝類，海蜇、等水產(chǎn)品，冬蟲夏草、人工牛黃等。 46 202303 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則 47 202303 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制。 藥品微生物的檢驗(yàn)結(jié)果受到很多因素的影響，如實(shí)驗(yàn)人員在取樣或試驗(yàn)過程中可能引入了污染微生物；微生物學(xué)分析方法本身的誤差較大；樣品中或環(huán)境中微生物可能分布不均勻等因素均影響藥品微生物實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，在藥品檢驗(yàn)中，為保證微生物試驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性和重現(xiàn)性，藥品微生物實(shí)驗(yàn)室必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢測方法并按良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)試驗(yàn)。 48 202303 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范包括以下幾個(gè)方面：人員、培養(yǎng)基、菌種、實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行、設(shè)備、文件、實(shí)驗(yàn)記錄、結(jié)果的判斷等。 49 202303 一、人員 從事藥品微生物試驗(yàn)工作的人員均要受到教育、培訓(xùn)及具備相關(guān)工作的經(jīng)驗(yàn)。 微生物實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)依據(jù)實(shí)驗(yàn)人員的崗位及職責(zé)對其進(jìn)行相應(yīng)的培訓(xùn)，在確認(rèn)他們可以承擔(dān)某一試驗(yàn)前，他們不能獨(dú)立從事該項(xiàng)微生物試驗(yàn)。應(yīng)保證所有人員在上崗前接受勝任工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢驗(yàn)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室生物安全等方面的培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后方可上崗，同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定所有級別實(shí)驗(yàn)人員的繼續(xù)教育計(jì)劃。 50 202303 微生物實(shí)驗(yàn)室管理人員包括工作人員和監(jiān)督人員，其專業(yè)技能和經(jīng)驗(yàn)水平應(yīng)與他們的職責(zé)范圍相符。 管理人員也應(yīng)接受系統(tǒng)的教育和微生物實(shí)驗(yàn)室的培訓(xùn)如：管理技能、實(shí)驗(yàn)室安全、試驗(yàn)按排、預(yù)算、實(shí)驗(yàn)室研究、實(shí)驗(yàn)結(jié)果評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查及技術(shù)報(bào)告書寫等。 應(yīng)熟練的應(yīng)用 SOP有關(guān)內(nèi)容到管理工作中；如制定不同工作崗位實(shí)驗(yàn)人員的培訓(xùn)課程和繼續(xù)教育計(jì)劃，隨時(shí)掌握和了解試驗(yàn)人員的水平，根據(jù)每個(gè)人的技術(shù)水平分配適宜的工作崗位。 對所有人員的培訓(xùn)、考核內(nèi)容和結(jié)果均應(yīng)記錄。 51 202303 二、培養(yǎng)基 培養(yǎng)基是絕大多數(shù)微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)。因此，培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物試驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵因素。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。