藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則(編輯修改稿)
2025-02-04 02:40 本頁面
【文章內容簡介】 菌種的處理和保藏的程序應標準化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備菌株是微生物試驗結果一致性的重要保證。 試驗菌種應是從國家菌種中心獲得的標準菌種，經過實驗室復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后保存 . 菌種保藏機構 中國菌種保藏管理委員會（ CCCCM） 成立于 1979年。下設 7個菌種保藏管理中心及有關專 業(yè)實驗室，共 12個單位實行統(tǒng)一領導，按專業(yè)分工管理。 普通微生物菌種保藏管理中心（ CCGMC） 中國科學院微生物研究所 中國科學院武漢病毒研究所 農業(yè)微生物菌種保藏管理中心（ ACCC） 中國農業(yè)科學院土壤肥料研究所 醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心（ CMCC） 中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所 中國藥品生物制品檢定所 中國預防醫(yī)學科學院病毒研究所 工業(yè)微生物菌種保藏管理中心（ CICC） 中國食品發(fā)酵工業(yè)科學研究所 抗生素菌種保藏管理中心（ CACC） 中國醫(yī)學科學院醫(yī)用生物技術研究所 四川抗生素研究所 華北制藥廠抗生素研究所 獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心（ CVCC） 農業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 林業(yè)微生物菌種保藏管理中心（ CFCC） 中國林業(yè)科學院 專利微生物菌種保藏管理中心（ ACCC） 武漢大學 國外的菌種保藏機構 世界菌種保藏聯(lián)合會（ WFCC） 美國標準菌種收藏所（ ATCC） 美國農業(yè)部北部地區(qū)研究實驗室（ NRRL） 英國 國立標準菌種收藏所（ NCTC） 英國 國際真菌研究所（ CMI） 荷蘭真菌中心保藏所（ CBS） 日本微生物菌種保藏聯(lián)合會（ JFCC） 標準菌株的復活或培養(yǎng)物的制備應按供應商提供的說明或按驗證的方法進行。 標準儲備菌株 — 從國內、外菌種收藏機構獲得的標準菌株經復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后 ,既為標準儲備菌株。 菌種的保存 低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代謝和生長繁殖，因此低溫、干燥和真空是菌種保藏的重要手段。 不同的微生物，應根據其生物特征來選擇最適宜的保藏方法。 菌種 培養(yǎng)基 保存溫度 傳接時間 細菌 一般為營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基，或根據菌種規(guī)定選用培養(yǎng)基 4～ 6℃ 芽孢菌 3～ 6個月，其他細菌 1個月 酵母菌 霉菌瓊脂或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基 4～ 6℃ 一般 3～ 6個月 真菌 PDA瓊脂或改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基 4～ 6℃ 一般 3～ 6個月 瓊脂斜面低溫保藏法 菌種 保存液（ 2mL） 保存溫度 保存時間 金黃色葡萄球菌 營養(yǎng)肉湯 1%蛋白胨甘油 水 10%～ 40%甘油 30～ 80℃ 半年以上 枯草芽孢桿菌 大腸埃希菌 膽鹽乳糖增菌液 乙型副傷寒沙門菌 銅綠假單孢桿菌 生孢梭菌 皰肉培養(yǎng)基 白色念珠菌 改良馬丁培養(yǎng)基 黑曲霉 液體冷凍保藏法 菌種的傳代和使用 工作菌種的傳代次數應嚴格控制，不得超過 5代，（從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第 0代）防止過度的傳代造成菌種變異。 1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中，任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉種或傳代一次。必要時，實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認。 凍干菌種（ 0代） ↓ 適宜的增菌液約 5mL溶解蘇醒（ 1代） ↓ 增菌液培養(yǎng)復壯（ 2代） ↓
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