d選11基因工程基本工具(編輯修改稿)
2025-01-26 02:21 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 1. 作用特點(diǎn) —— 斷開(kāi)磷酸二酯鍵 EcoRⅠ 黏性末端 黏性末端 1. 作用特點(diǎn) —— 斷開(kāi)磷酸二酯鍵 SmaⅠ 平末端 平末端 二、“分子縫合針” —— DNA連接酶 1 種類(lèi) ： ⑴ Ecoli DNA 連接酶 （分離自大腸桿菌） ⑵ T4 DNA連接酶 （分離自 T4噬菌體） 2 作用： 恢復(fù) 被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間 的 磷酸二酯鍵 。 3 作用原理： 催化磷酸二酯鍵形成 〃coli DNA 連接酶或 T4DNA連接酶 恢復(fù) 被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的 磷酸二酯鍵 T4DNA連接酶 T4 DNA連接酶 可以連接 黏性末端， 還可把 平末端 之間的縫隙 “縫合” 起來(lái)，但連接平末端效率較低 T4DNA連接酶 類(lèi)型 EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 來(lái)源 功能 大腸桿菌 T4噬菌體 恢復(fù) 磷酸 二酯鍵 只連接 黏性末端 能連接 黏性末端 和平末端 (效率低 ) 相同點(diǎn) 差別 連接與聚合酶 ： DNA連接酶與 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA連接酶 區(qū)別 1 區(qū)別 2 相同點(diǎn) 將 單個(gè)核苷酸 連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵 形成 磷酸二酯鍵 在 兩個(gè) DNA片段之間形成磷酸二酯鍵 以 一條 DNA鏈為模板 ，將 單個(gè)核苷酸 通過(guò)磷酸二酯鍵 連接成一條互補(bǔ)的 DNA鏈 將 DNA雙鏈上的 兩個(gè)缺口同時(shí)連接 起來(lái)，不需模板 三、“分子運(yùn)輸車(chē)” — 目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的 載體 ⒈載體需要的條件： ⑴ 有 1~多個(gè)限制酶切點(diǎn) ⑵對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害 ⑶導(dǎo)入基因 能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá) ⑷ 有某些標(biāo)記基因，
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