基因工程第二章工具酶(編輯修改稿)
2025-03-06 07:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 基化酶，可將 AAC（ N6A） GTGC 和 GCAC（ N6A） GTT 上的腺嘌呤進(jìn)行甲基化修飾。 (1) 原核生物ＤＮＡ甲基化 如果限制性內(nèi)切酶的識別位點(diǎn)是從表達(dá) Dam或 Dcm 甲基化酶的菌株中分離而得，并且其甲基化識別位點(diǎn)與內(nèi)切酶識別位點(diǎn)有重疊，那么該限制性內(nèi)切酶的部分或全部酶切位點(diǎn)有可能不被切割。 例如，從 dam+ 中分離的質(zhì)粒 DNA 完全不能被識別序列為 GATC 的 MboI 所切割。 菌株中的 DNA 甲基化程度并不完全相同。 pBR322 DNA 能被完全修飾（因此完全不能被 MboI 切割），而 λDNA 只有大約 50% 的 Dam 位點(diǎn)被甲基化，這是因?yàn)樵? λDNA 被包裝到噬菌體頭部之前，甲基化酶還沒來得及將 DNA 完全甲基化。因此，被 Dam 或 Dcm 甲基化完全阻斷的酶卻能對這些 λDNA 進(jìn)行部分切割。 被 Dam 或 Dcm 甲基化的限制性位點(diǎn)可以通過克隆 DNA 至 dam /dcm 菌株 【 如 dam /dcm 感受態(tài)細(xì)胞（ NEB C2925） 】 進(jìn)行去甲基化。 (1) 真核生物ＤＮＡ甲基化 在高等真核生物（如 Dnmt1）中發(fā)現(xiàn)的 CpG 甲基轉(zhuǎn)移酶（ CpG MTases），將甲基基團(tuán)轉(zhuǎn)移至胞嘧啶殘基上的 C5 位點(diǎn)。 CpG
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